【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種靶向膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的sirna及其應(yīng)用，屬于生物。
技術(shù)介紹
1、膠質(zhì)瘤（glioma）是最常見的腦腫瘤之一，占中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦腫瘤的30%。根據(jù)世界衛(wèi)生組織（who）的分級標(biāo)準(zhǔn)，膠質(zhì)瘤分為ⅰ~ⅳ級，其中，惡性程度最高的ⅳ級膠質(zhì)瘤，也稱為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（glioblastoma?multiforme,?gbm）。膠質(zhì)母細(xì)胞瘤常發(fā)病于腦實(shí)質(zhì)且呈彌漫性分散，是臨床最常見且最具侵襲性的膠質(zhì)瘤類型，患者中位生存期僅為12~18個(gè)月，5年生存率不到5%。
2、目前，針對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的標(biāo)準(zhǔn)治療方法主要包括手術(shù)切除、放療（rt）和化療這三種，其中，用于化療的一線藥物僅有替莫唑胺（temozolomide,?tmz）。但是，臨床治療過程中發(fā)現(xiàn)，約55%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者對替莫唑胺原發(fā)性耐藥，另一部分膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者在接受替莫唑胺治療的過程中也會不可避免地獲得替莫唑胺耐藥的表型，從而導(dǎo)致治療效果不佳。因此，迫切需要更多有效的針對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的治療藥物。
3、隨著新一代測序技術(shù)的進(jìn)步，人們對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的分子基礎(chǔ)和基因組的全貌有了更深入的認(rèn)識，許多研究者開始嘗試靶向治療膠質(zhì)母細(xì)胞瘤。然而，由于血腦屏障的存在和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤高度的異質(zhì)性，導(dǎo)致很多臨床研究階段的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤靶向治療藥物治療效果不佳，在延長患者的總生存期以及改善預(yù)后方面并沒有取得重大進(jìn)展。因此，迫切需要突破中樞給藥效率和腫瘤異質(zhì)性，從而獲得治療效果更好的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤靶向治療藥物。
4、rna干擾（rna?interference,?rnai）
5、若能通過sirna有效敲低膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)基因在生物體內(nèi)的表達(dá)，對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的靶向治療十分有幫助。并且，由于sirna在敲低疾病相關(guān)基因方面具有特異性和有效性，因此，基于rnai開發(fā)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤靶向治療藥物有望突破中樞給藥效率和腫瘤異質(zhì)性。但是，裸露的sirna極易受到核酸酶的降解，這使得rnai療法的成功很大程度上取決于sirna載體和遞送方法。傳統(tǒng)的sirna遞送系統(tǒng)，例如脂質(zhì)納米顆粒、陽離子聚合物和病毒等，都存在易生物降解、生物相容性低、循環(huán)穩(wěn)定性不足以及靶向能力弱等問題。因此，在開發(fā)能夠有效敲低膠質(zhì)母細(xì)胞瘤相關(guān)基因在生物體內(nèi)的表達(dá)的sirna的基礎(chǔ)上，找到能夠?qū)irna有效遞送進(jìn)神經(jīng)中樞，并且，能夠長期維持sirna在生物體內(nèi)的穩(wěn)定性和生物活性，同時(shí)，還具備高生物相容性的遞送系統(tǒng)對膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的靶向治療也很關(guān)鍵。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為解決上述問題，本專利技術(shù)提供了一種靶向膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的sirna，所述sirna包含正義鏈和反義鏈；所述sirna的正義鏈能夠和反義鏈至少部分地反向互補(bǔ)形成雙鏈區(qū)；所述sirna的反義鏈能夠通過堿基互補(bǔ)配對和靶標(biāo)核酸特異性結(jié)合，以引發(fā)靶標(biāo)核酸的降解；所述靶標(biāo)核酸包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因；所述膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因包括編碼核糖核苷酸還原酶亞基m2的基因（rrm2基因）和/或編碼熱休克蛋白47（hsp47）的基因（serpinh1基因）。
2、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，所述靶標(biāo)核酸包括編碼核糖核苷酸還原酶亞基m2的mrna和/或編碼熱休克蛋白47的mrna。
3、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，所述膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因還包括編碼表皮生長因子受體的基因（egfr基因）、mir-214和/或編碼血管內(nèi)皮生長因子受體的基因（vegfr基因）。
4、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，所述靶標(biāo)核酸包括編碼表皮生長因子受體的mrna、mir-214和/或編碼血管內(nèi)皮生長因子受體的mrna。
5、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a核糖核苷酸還原酶亞基m2的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.4所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.9所示的核酸分子；
6、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a熱休克蛋白47的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.5所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.10所示的核酸分子。
7、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a核糖核苷酸還原酶亞基m2的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.4所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；
8、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a熱休克蛋白47的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.5所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.10所示。
9、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a表皮生長因子受體的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.1所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.6所示的核酸分子；
10、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)閙ir-214時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.2所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.7所示的核酸分子；
11、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a血管內(nèi)皮生長因子受體的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.3所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seqid?no.8所示的核酸分子。
12、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a表皮生長因子受體的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.1所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.6所示；
13、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)閙ir-214時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.2所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.7所示；
14、當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a血管內(nèi)皮生長因子受體的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.3所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.8所示。
15、本專利技術(shù)還提供了一種重組核酸分子，所述重組核酸分子包含shrna；所述shrna包含上述sirna的正義鏈以及上述sirna的反義鏈；所述正義鏈和反義鏈之間通過莖環(huán)序列分隔，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。
16、在本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式中，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a核糖核苷酸還原酶亞基m2的基因時(shí)，所述shrna包含核苷酸序列如seq?id?no本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種靶向膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的siRNA，其特征在于，所述siRNA的反義鏈能夠通過堿基互補(bǔ)配對和靶標(biāo)核酸特異性結(jié)合，以引發(fā)靶標(biāo)核酸的降解；所述靶標(biāo)核酸包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因；
2.如權(quán)利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因還包括編碼表皮生長因子受體的基因、miR-214和/或編碼血管內(nèi)皮生長因子受體的基因。
3.如權(quán)利要求2所述的siRNA，其特征在于，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a表皮生長因子受體的基因時(shí)，所述siRNA的正義鏈包含核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示的核酸分子；
4.如權(quán)利要求3所述的siRNA，其特征在于，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a核糖核苷酸還原酶亞基M2的基因時(shí)，所述siRNA的正義鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示，反義鏈的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；
5.一種重組核酸分子，其特征在于，所述重組核酸分子包含shRNA；所述shRNA包含權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA的正義鏈以及權(quán)利要求1~
6.一種重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒表達(dá)權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA；或者，所述重組質(zhì)粒攜帶權(quán)利要求5所述的重組核酸分子。
7.一種工程化細(xì)胞，其特征在于，所述工程化細(xì)胞的基因組整合有權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA；或者，所述工程化細(xì)胞的基因組整合有權(quán)利要求5所述的重組核酸分子；或者，所述工程化細(xì)胞攜帶權(quán)利要求6所述的重組質(zhì)粒。
8.一種小細(xì)胞外囊泡，其特征在于，所述小細(xì)胞外囊泡包裹權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA；或者，所述小細(xì)胞外囊泡包裹權(quán)利要求5所述的重組核酸分子；或者，所述小細(xì)胞外囊泡包裹權(quán)利要求6所述的重組質(zhì)粒；或者，所述小細(xì)胞外囊泡由權(quán)利要求7所述的工程化細(xì)胞分泌而得。
9.權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA或權(quán)利要求5所述的重組核酸分子或權(quán)利要求6所述的重組質(zhì)粒或權(quán)利要求7所述的工程化細(xì)胞或權(quán)利要求8所述的小細(xì)胞外囊泡在制備用于預(yù)防和/或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦腫瘤的藥物中的應(yīng)用。
10.一種用于預(yù)防和/或治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)腦腫瘤的藥物，其特征在于，所述藥物的成分包含抑制劑；所述抑制劑包含權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的siRNA或權(quán)利要求5所述的重組核酸分子或權(quán)利要求6所述的重組質(zhì)粒或權(quán)利要求7所述的工程化細(xì)胞或權(quán)利要求8所述的小細(xì)胞外囊泡。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的sirna，其特征在于，所述sirna的反義鏈能夠通過堿基互補(bǔ)配對和靶標(biāo)核酸特異性結(jié)合，以引發(fā)靶標(biāo)核酸的降解；所述靶標(biāo)核酸包括膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因；
2.如權(quán)利要求1所述的sirna，其特征在于，所述膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因還包括編碼表皮生長因子受體的基因、mir-214和/或編碼血管內(nèi)皮生長因子受體的基因。
3.如權(quán)利要求2所述的sirna，其特征在于，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a表皮生長因子受體的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.1所示的核酸分子，反義鏈包含核苷酸序列如seq?id?no.6所示的核酸分子；
4.如權(quán)利要求3所述的sirna，其特征在于，當(dāng)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的致病基因?yàn)榫幋a核糖核苷酸還原酶亞基m2的基因時(shí)，所述sirna的正義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.4所示，反義鏈的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；
5.一種重組核酸分子，其特征在于，所述重組核酸分子包含shrna；所述shrna包含權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的sirna的正義鏈以及權(quán)利要求1~4任一項(xiàng)所述的sirna的反義鏈；所述正義鏈和反義鏈之間通過莖環(huán)序列分隔，形成發(fā)夾結(jié)構(gòu)。
6.一種重組質(zhì)粒，其...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張辰宇，李菁，陳夢寒，方靜雯，
申請(專利權(quán))人：南京大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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