【技術實現步驟摘要】
本公開涉及生物醫學，尤其涉及一種用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組及其應用。
技術介紹
1、真皮成纖維細胞(fibroblast，fb)是皮膚真皮層的主要細胞類型，負責合成膠原蛋白、彈性蛋白和其他細胞外基質(ecm)蛋白，這些蛋白對于維持皮膚的結構和功能至關重要。隨著年齡的增長，真皮成纖維細胞會出現衰老現象，這通常被稱為細胞衰老或復制性衰老，這一過程與皮膚的整體衰老密切相關。細胞衰老的特征包括細胞增殖能力的下降、細胞形態和功能的變化、細胞周期的停滯以及細胞分泌表型的改變。在真皮成纖維細胞中，衰老會導致膠原蛋白和彈性蛋白的合成減少，同時增加基質金屬蛋白酶(mmps)的表達，這些酶可以降解ecm蛋白，導致皮膚彈性和緊致度的下降。此外，衰老的成纖維細胞還會產生更多的促炎細胞因子和自由基，如白細胞介素(ils)、腫瘤壞死因子α(tnf-α)和活性氧物種(ros)，這些分子可以引發或加劇炎癥反應，損害周圍的健康細胞，并加速皮膚老化過程。皮膚衰老的另一個重要特征是dna損傷的積累，這會影響到真皮成纖維細胞的正常功能。隨著時間的推移，dna損傷的修復能力下降，導致基因穩定性和細胞功能的進一步惡化。總的來說，真皮成纖維細胞的衰老與皮膚衰老有著密切的聯系。隨著成纖維細胞功能的下降，皮膚的再生能力和修復能力減弱，最終導致皮膚的外觀和功能發生明顯的衰老變化。因此，研究如何延緩或逆轉成纖維細胞的衰老過程，對于開發抗衰老治療策略具有重要意義。
2、micrornas(mirnas)是一類在轉錄后水平調控基因表達的短非編碼rna分子。它們通過與目
技術實現思路
1、為克服相關技術中存在的問題，本說明書提供了一種用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組及其應用，在對成纖維細胞衰老機制的深入研究、衰老標志物的發現、以及潛在的抗衰老治療手段方面均具有重要意義。
2、根據本公開的第一方面，提供一種用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，包括rna逆轉錄試劑盒和pcr擴增試劑盒，所述rna逆轉錄試劑盒用于將包含成纖維細胞衰老生物標志物的rna進行逆轉錄合成cdna，所述pcr擴增試劑盒用于將逆轉錄合成的cdna進行擴增；
3、其中，所述成纖維細胞衰老生物標志物包括mir-4260，核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
4、在一些示例性實施例中，所述rna逆轉錄試劑盒包括：
5、反轉錄引物，核苷酸序列如seq?id?no:2所示。
6、在一些示例性實施例中，所述pcr擴增試劑盒包括：
7、正向引物，核苷酸序列如seq?id?no:3所示；
8、反向引物，核苷酸序列如seq?id?no:4所示。
9、根據本公開第二方面，提供一種檢測體外真皮層組織的方法，采用如第一方面所述的用于體外真皮層組織樣本檢測的試劑盒組進行檢測。
10、在一些示例性實施例中，檢測體外真皮層組織的方法包括：
11、提取真皮層組織中的rna，采用所述rna逆轉錄試劑盒逆轉錄合成cdna；
12、采用所述pcr擴增試劑盒將逆轉錄合成的cdna進行擴增；
13、測定所述mir-4260的表達量。
14、根據本公開第三方面，提供一種改善真皮層組織衰老的藥物，包括：
15、mir-4260抑制劑，用于下調衰老成纖維細胞中mir-4260的表達量，所述mir-4260的核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
16、在一些示例性實施例中，所述mir-4260抑制劑能夠提升衰老成纖維細胞的活率。
17、根據本公開的第一方面，提供一種成纖維細胞衰老生物標志物，包括：
18、mir-4260，核苷酸序列如seq?id?no:1所示。
19、在一些示例性實施例中，所述mir-4260在衰老成纖維細胞中的表達量高于在年輕成纖維細胞中的表達量。
20、根據本公開第五方面，提供如第一方面所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組、如第二方面所述的檢測體外真皮層組織的方法、如第三方面所述的改善真皮層組織衰老的藥物或如第四方面所述的成纖維細胞衰老生物標志物在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產品中的應用。
21、本公開提供的技術方案可以包括以下有益效果：
22、本公開采集了20-30歲之間人群(年輕組，y組)和50-70歲之間的人群(衰老組，s組)的真皮層組織樣本，利用rt-pcr技術檢測兩組人群真皮層組織內mir-4260的表達量差異。結果顯示，衰老組內mir-4260的表達量明顯高于年輕組，說明mir-4260可能是一種潛在的真皮層組織衰老的標志物。
23、本公開利用自然傳代的方式體外誘導成纖維細胞衰老，構建了fb細胞衰老模型(將4代fb細胞設置為年輕組，20代細胞設置為衰老組)，并利用rt-pcr技術檢測兩組人群真皮層組織內mir-4260的表達量差異。結果顯示，衰老組內mir-4260的表達量明顯高于年輕組，進一步說明mir-4260可能是一種潛在的真皮層組織衰老的標志物。
24、本公開對mir-4260抑制劑在fb細胞上的抗衰效果進行驗證，將年輕fb細胞和衰老fb細胞分別作為對照組中的年輕組和衰老組，用轉染mir-4260抑制劑(mir-4260inhibitor)的衰老fb細胞作為藥物處理組(mir-4260-in)。結果顯示，采用c12fdg染色法，相對于年輕組，衰老組中c12fdg染色的平均熒光強度顯著增加，而相對于衰老組，藥物處理組組平均熒光強度顯著降低。采用cck8試劑盒，相較于年輕組，衰老組的衰老fb細胞活率有明顯的下降，而相較于衰老組，藥物處理組的fb細胞活率明顯上升。以上說明mir-4260-in可以恢復衰老fb細胞的細胞活率。
25、本公開通過一系列實驗，發現mir-4260在年輕與衰老人群中的表達存在顯著差異，這一結果為識別和監測皮膚衰老提供了一個新的特異性的生物標志物。該生物標志物的發現，提供了一種可能改善皮膚健康、增強皮膚再生能力和延緩衰老過程的新方法。
26、綜上，本公開在對成纖維細胞衰老機制的深入研究、衰老標志物的發現、以及潛在的抗衰老治療手段方面均具有重要意義。
27、應當理解的是，以上的一般描述和后文的細節描述僅是示例性和解釋性的，并不能限制本說明書。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，包括RNA逆轉錄試劑盒和PCR擴增試劑盒，所述RNA逆轉錄試劑盒用于將包含成纖維細胞衰老生物標志物的RNA進行逆轉錄合成cDNA，所述PCR擴增試劑盒用于將逆轉錄合成的cDNA進行擴增；
2.根據權利要求1所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述RNA逆轉錄試劑盒包括：
3.根據權利要求1所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述PCR擴增試劑盒包括：
4.一種檢測體外真皮層組織的方法，其特征在于，采用如權利要求1至3任一項所述的用于體外真皮層組織樣本檢測的試劑盒組進行檢測。
5.根據權利要求4所述的檢測體外真皮層組織的方法，其特征在于，包括：
6.一種改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，包括：
7.根據權利要求6所述的改善真皮層組織衰老的藥物，其特征在于，所述miR-4260抑制劑能夠提升衰老成纖維細胞的活率。
8.一種成纖維細胞衰老生物標志物，其特征在于，包括：
9.根據權利要求8所述的成纖維細胞
10.如權利要求1至3任一項所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組、如權利要求4或5所述的檢測體外真皮層組織的方法、如權利要求6或7所述的改善真皮層組織衰老的藥物或如權利要求1或2所述的成纖維細胞衰老生物標志物在制備診斷、輔助診斷、治療真皮層組織衰老的產品中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，包括rna逆轉錄試劑盒和pcr擴增試劑盒，所述rna逆轉錄試劑盒用于將包含成纖維細胞衰老生物標志物的rna進行逆轉錄合成cdna，所述pcr擴增試劑盒用于將逆轉錄合成的cdna進行擴增；
2.根據權利要求1所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述rna逆轉錄試劑盒包括：
3.根據權利要求1所述的用于檢測體外真皮層組織的試劑盒組，其特征在于，所述pcr擴增試劑盒包括：
4.一種檢測體外真皮層組織的方法，其特征在于，采用如權利要求1至3任一項所述的用于體外真皮層組織樣本檢測的試劑盒組進行檢測。
5.根據權利要求4所述的檢測體外真皮層組織的方法，其特征在于，包括：
...【專利技術屬性】
技術研發人員：李宏宇，饒翔，黃匯，吳理達，牛萌萌，唐杰，高云亮，
申請(專利權)人：南京安生諾科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。