【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于雌激素生物轉(zhuǎn)化，尤其涉及一種生產(chǎn)8-pn的生物制備方法及雌激素補(bǔ)充組合物。
技術(shù)介紹
1、雌激素對(duì)在女性乳房發(fā)育和功能維持至關(guān)重要，它能夠促進(jìn)乳腺導(dǎo)管系統(tǒng)的生長(zhǎng)和分化并通過與乳腺細(xì)胞表面的雌激素受體(er)結(jié)合，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的增殖和分化從而形成乳腺導(dǎo)管和終末芽，同時(shí)促進(jìn)乳房中脂肪細(xì)胞的增殖和脂質(zhì)儲(chǔ)存以維持乳房形狀和體積。此外，雌激素能夠促進(jìn)乳腺組織的血管生成，提高乳房的血液供應(yīng)，有助于乳腺組織的健康和功能維持。而隨著年齡增長(zhǎng)，雌激素水平下降，為改善雌激素減少所帶來的不良后果，許多研究者選擇以補(bǔ)充雌激素的方式來改善。8-異戊二烯基柚皮素8-prenylnaringenin(8-pn)是黃酮類化合物的衍生物，其雌激素樣作用安全有效，且毒副作用小，幾乎只存在于啤酒花中。
2、目前8-pn的獲得方法主要為直接提取、化學(xué)合成和微生物合成。然而，啤酒花中8-pn含量?jī)H占啤酒花含量的0.09％～0.13％，同時(shí)啤酒花種植要求較高，分離提取技術(shù)花費(fèi)高昂，因此通過直接提取方法無法實(shí)現(xiàn)8-pn的大量獲得。化學(xué)合成方法合成8-pn，底物通常選擇柚皮素、異黃腐酚進(jìn)行催化合成，盡管產(chǎn)物得率有所提高，但原料成本高，過程通常需要多步反應(yīng)，副產(chǎn)物多難以分離，生產(chǎn)效率低且對(duì)環(huán)境污染嚴(yán)重。與上述兩種方法相較，生物合成法條件溫和，營(yíng)養(yǎng)需求簡(jiǎn)單、對(duì)環(huán)境污染小、產(chǎn)物易于分離等特點(diǎn)。因此，受到更多研究者的關(guān)注。目前的研究主要對(duì)大腸桿菌和釀酒酵母進(jìn)行相關(guān)模塊構(gòu)建和基因改造而進(jìn)行8-pn的生產(chǎn)，在一定程度上提高了8-pn的產(chǎn)率。然而，由于大腸桿菌自身
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、(一)專利技術(shù)目的
2、本專利技術(shù)的目的是提供一種生產(chǎn)8-pn的生物制備方法及雌激素補(bǔ)充組合物，本專利技術(shù)通過利用腸道微生物將異黃腐酚(ix)轉(zhuǎn)化為8-pn，提高了8-pn產(chǎn)率，真正實(shí)現(xiàn)了8-pn的高效和安全生產(chǎn)，生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單可行，大幅降低生產(chǎn)成本，促進(jìn)產(chǎn)業(yè)發(fā)展。
3、(二)技術(shù)方案
4、為解決上述問題，本專利技術(shù)的第一方面提供了一種生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，包括以下步驟：
5、s1，將啤酒花懸浮于koh溶液中，攪拌離心后獲得啤酒花沉淀物，將所述啤酒花沉淀物溶解于乙酸乙酯中，采用洗脫劑進(jìn)行洗脫、收集處理，得到異黃腐酚；
6、s2，制備種子培養(yǎng)基并向所述種子培養(yǎng)基中接入混合菌種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得種子液；
7、s3，將所述種子液接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中進(jìn)行發(fā)酵，得到種子發(fā)酵液；所述發(fā)酵培養(yǎng)基為添加了異黃腐酚的種子培養(yǎng)基；
8、s4，取制備后的種子發(fā)酵液，加入乙酸乙酯和石英砂，震蕩、離心，取上清液，對(duì)所述上清液進(jìn)行氮吹蒸發(fā)濃縮，得到8-pn。
9、進(jìn)一步地，s1步驟具體包括：將50-60g啤酒花懸浮于1mol/l的koh溶液中，調(diào)節(jié)ph在13-14之間，攪拌離心后獲得啤酒花沉淀物，將所述啤酒花沉淀物溶解于175-225ml的乙酸乙酯中，采用洗脫劑進(jìn)行洗脫，再收集處理，得到異黃腐酚。
10、進(jìn)一步地，s2步驟中，所述制備種子培養(yǎng)基的過程包括：
11、按以下質(zhì)量濃度配制含naco3：1-1.5g/l、mncl2·(h2o)4：0.5-0.6g/l、葡萄糖：15-20g/l、mgso4·7h20：0.1g/l、酵母浸粉：1.5-5g/l、l-半胱氨酸0.5-0.7g/l、(nh4)2so4：1-1.5g/l和cacl2：0.5-0.7g/l的組分溶液；
12、向所述組分溶液中添加刃天青作為氧化還原指示劑，并調(diào)節(jié)ph至6.8-7.0，高壓滅菌后，得到種子培養(yǎng)基。
13、進(jìn)一步地，所述混合菌種包括：細(xì)枝真桿菌、植物乳桿菌和短乳桿菌中的一種或幾種。
14、進(jìn)一步地，s2步驟中，所述向所述種子培養(yǎng)基中接入混合菌種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得種子液具體包括：向裝有25ml種子培養(yǎng)基的搖瓶中接入1-2％混合菌種進(jìn)行種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：攪拌速度為220r/min，溫度為36℃-37℃，培養(yǎng)時(shí)間為24-48h后獲得種子液。
15、進(jìn)一步地，所述s3步驟具體包括：將種子液以3％的接種量接種至含有2.5l發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基中異黃腐酚的添加質(zhì)量濃度為5-10g/l，通過優(yōu)化發(fā)酵條件得到種子發(fā)酵液。
16、進(jìn)一步地，所述優(yōu)化發(fā)酵條件為：控制初始攪拌速度為220-250r/min，空氣流速為2.5l/min，溫度為36-37℃。
17、進(jìn)一步地，所述優(yōu)化發(fā)酵條件還包括：發(fā)酵16-18h后，將300-350ml所述種子培養(yǎng)基以5ml/h的流速加入發(fā)酵罐中，并調(diào)節(jié)發(fā)酵體系ph值在6.8-7.0。
18、進(jìn)一步地，所述s4步驟具體包括：取600-800μl發(fā)酵液，加入600-800μl的乙酸乙酯和5-10mg石英砂，以4000-5000rpm震蕩20-30min，以10000rpm離心10min，取上清液，將收集好的上清液進(jìn)行氮吹蒸發(fā)濃縮，得到8-pn。
19、本專利技術(shù)的另一方面提供了一種雌激素補(bǔ)充組合物，所述組合物包括如下質(zhì)量分的組分：葛根粉15～20份、木瓜粉10份、8-pn?5～10份、阿膠肽13～16份、鱈魚膠原蛋白肽12～15份、維生素c?5～7份、長(zhǎng)雙歧桿菌2份、青春雙歧桿菌2份、低聚果糖2份、西柚果汁粉5份、葡萄籽粉5份，所述8-pn采用上述說明中任意一種所述的方法制備所得。
20、本專利技術(shù)提供了一種生產(chǎn)8-pn的生物制備方法及雌激素補(bǔ)充組合物，具有如下有益效果：在該生物制備方法中，從啤酒花中收集異黃腐酚(ix)，并以異黃腐酚(ix)為底物，利用篩選的幾種腸道微生物作為混合菌種進(jìn)行混合發(fā)酵，以提高將ix轉(zhuǎn)化為8-pn的轉(zhuǎn)化率。本專利技術(shù)利用食品級(jí)腸道微生物，減少生產(chǎn)過程中的原料成本和復(fù)雜性，采用綠色生物技術(shù)，減少對(duì)環(huán)境的污染，實(shí)現(xiàn)了8-pn的可持續(xù)生產(chǎn)，保證產(chǎn)品安全性。
21、進(jìn)一步地，該專利技術(shù)提供的雌激素補(bǔ)充組合物對(duì)血清中紊亂的性激素水平具有顯著調(diào)節(jié)作用，能夠明顯改善女性因雌激素降低或內(nèi)分泌失調(diào)所帶來的不良影響。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，S1步驟具體包括：將50-60g啤酒花懸浮于1mol/L的KOH溶液中，調(diào)節(jié)pH在13-14之間，攪拌離心后獲得啤酒花沉淀物，將所述啤酒花沉淀物溶解于175-225mL乙酸乙酯中，采用洗脫劑進(jìn)行洗脫，再收集處理，得到異黃腐酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，S2步驟中，所述制備種子培養(yǎng)基的過程包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，所述混合菌種包括：細(xì)枝真桿菌、植物乳桿菌和短乳桿菌中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，S2步驟中，所述向所述種子培養(yǎng)基中接入混合菌種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得種子液具體包括：向裝有25mL種子培養(yǎng)基的搖瓶中接入1-2％混合菌種進(jìn)行種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：攪拌速度為220r/min，溫度為36℃-37℃，培養(yǎng)時(shí)間為24-48h后獲得種子液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，所述優(yōu)化發(fā)酵條件為：控制初始攪拌速度為220-250r/min，空氣流速為2.5L/min，溫度為36-37℃。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，所述優(yōu)化發(fā)酵條件還包括：發(fā)酵16-18h后，將300-350mL所述種子培養(yǎng)基以5mL/h的流速加入發(fā)酵罐中，并調(diào)節(jié)發(fā)酵體系pH值在6.8-7.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-PN的生物制備方法，其特征在于，所述S4步驟具體包括：取600-800μl種子發(fā)酵液，加入600-800μl的乙酸乙酯和5-10mg石英砂，以4000-5000rpm震蕩20-30min，以10000rpm離心10min，取上清液，將收集好的上清液進(jìn)行氮吹蒸發(fā)濃縮，得到8-PN。
10.一種雌激素補(bǔ)充組合物，其特征在于，所述組合物包括如下質(zhì)量分的組分：葛根粉15～20份、木瓜粉10份、8-PN?5～10份、阿膠肽13～16份、鱈魚膠原蛋白肽12～15份、維生素C?5～7份、長(zhǎng)雙歧桿菌2份、青春雙歧桿菌2份、低聚果糖2份、西柚果汁粉5份、葡萄籽粉5份，所述8-PN采用上述權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的方法制備所得。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，s1步驟具體包括：將50-60g啤酒花懸浮于1mol/l的koh溶液中，調(diào)節(jié)ph在13-14之間，攪拌離心后獲得啤酒花沉淀物，將所述啤酒花沉淀物溶解于175-225ml乙酸乙酯中，采用洗脫劑進(jìn)行洗脫，再收集處理，得到異黃腐酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，s2步驟中，所述制備種子培養(yǎng)基的過程包括：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，所述混合菌種包括：細(xì)枝真桿菌、植物乳桿菌和短乳桿菌中的一種或幾種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，s2步驟中，所述向所述種子培養(yǎng)基中接入混合菌種進(jìn)行培養(yǎng)，獲得種子液具體包括：向裝有25ml種子培養(yǎng)基的搖瓶中接入1-2％混合菌種進(jìn)行種子培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：攪拌速度為220r/min，溫度為36℃-37℃，培養(yǎng)時(shí)間為24-48h后獲得種子液。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)8-pn的生物制備方法，其特征在于，所述s3步驟具體包括：將種子液以3％的接種量接種至含有2.5l發(fā)酵培養(yǎng)基的發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基中異黃腐酚的添加質(zhì)量濃度...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：徐春明，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京杉途生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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