【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種固態發酵納豆激酶制備納豆粉的方法，屬于微生物發酵。
技術介紹
1、血栓是引起腦卒中和冠心病的重要誘因，而伴隨著老齡化社會的到來，血栓性疾病的患病人數預計會進一步增加，對我國居民生命健康和醫療經濟帶來極大的威脅。
2、血栓是由纖維蛋白和血小板大量凝固引起的一種疾病，它威脅著人類健康，并往往與中風、腦梗死和心肌梗死等其他一些疾病有關。纖溶酶已顯示出對溶栓的強大作用，與其它微生物纖溶酶(尿激酶、鏈激酶)相比，納豆激酶(nk)無副作用、成本較低且半衰期較長。此外，納豆激酶在體內和體外都顯示出溶栓活性，它不僅能直接降解纖維蛋白，還能刺激細胞釋放組織纖溶酶原激活劑，進一步促進纖維蛋白的降解。
3、納豆的保健功效很早就已被人們所認知。大豆經納豆芽孢桿菌發酵后，產生一系列的生物和化學變化，使大豆的營養物質種類和含量都發生了改變，也使其營養價值得到提高。更重要的是，使納豆具有了大豆所不具備的保健和醫療作用。納豆激酶有點有很多：可以防治血栓、高血壓、動脈硬化和便秘等疾病；有抗氧化和延緩衰老作用；具有神經保護作用；納豆激酶具有增加骨骼密度，防治骨質疏松的作用；具有抗菌整腸作用；可以預防癌癥；具有緩解更年期綜合癥的作用等。
4、目前納豆激酶的生產主要包括液態發酵和固態發酵。液態發酵發酵周期短，物料消耗少，傳質傳熱均勻，自動化程度高，發酵終點易于監測，但對發酵設備要求較高，投資成本大，能量消耗多，產生廢液多，所產單位酶活普遍不及固態發酵高。固態發酵使用設備簡單，操作要求低，能量消耗小，發酵原料普遍易得
5、但固態發酵容易受多種因素的影響，發酵程度與發酵基質物料比密切相關，反應進程復雜，菌體量測定困難，難以監控生產狀態，生產周期受微生物生長速度影響大，營養物質傳遞和傳熱不均。產生的nk一般要經過分離純化，主要分為粗分離與進一步純化，粗分離的方法主要有對粗酶液進行離心、粗過濾、鹽析、有機溶劑沉淀法等，對蛋白進行濃縮和初步純化，再采用離子交換、親和層析或凝膠滲透等進一步純化，經過冷凍干燥得到nk純品凍干粉。
6、專利cn113234627b使用枯草芽孢桿菌jnfe0127液態發酵制備納豆激酶，其中添加苦蕎粉的量為3％，發酵96h時酶活達到23326iu/ml；使用紅蕓豆和蕎麥2：1復配發酵20h的發酵制品中，nk酶活達到30174iu/g。文獻“苦蕎對發酵豆乳納豆激酶活力、風味及抗氧化活性的影響；食品與生物技術學報.2023,42(07)”公開了大豆、苦蕎2：1發酵豆乳能夠提高nk酶活、苦蕎中的多酚提高豆乳抗氧化性、減少揮發性鹽基氮含量。上述技術存在液態發酵納豆激酶儲存效果差、原材料成本過高、發酵營養物質單一等問題。
7、因此，開發一種低成本的、營養豐富且保持較高納豆激酶酶活的產品具有極高的經濟價值與實用價值。
技術實現思路
1、為解決上述問題，本專利技術將豆粕和苦蕎復配，使用轉溫發酵，制備得到的納豆粉在具有高納豆激酶酶活的基礎上，進一步提高了大豆異黃酮的含量。
2、本專利技術的第一個目的是提供一種固態發酵制備納豆粉的方法，包括如下步驟：
3、(1)將苦蕎和豆粕分別按照質量比1：2～3與水混合、浸泡，調節ph為6～8，浸泡后苦蕎和豆粕中含水量為50％～60％w/w；
4、(2)將苦蕎、豆粕混合得到混合物，額外添加碳源、氮源和無機鹽，滅菌制備得到固態培養基；
5、(3)固體培養基中接種bacillus?subtilis?jnfe0127，接種量為108～1010cfu/ml；接種后置于28～32℃、濕度為70％～80％的條件下發酵20～30h；再轉移至38～42℃、濕度為60％～70％的條件下發酵7～9h；
6、(4)干燥發酵后的固體培養基，粉碎制備得到納豆粉。
7、在一種實施方式中，豆粕為大豆榨油后的廢棄產物。
8、在一種實施方式中，步驟(2)中碳源為蔗糖、氮源為胰蛋白胨、無機鹽為0.01～0.1mol/l的氯化鉀溶液。
9、在一種實施方式中，苦蕎、豆粕混合時的質量比為0.8～1.2：0.8～1.2，蔗糖的添加量為2～2.5％w/w混合物，胰蛋白胨的添加量為1.0～2.0％w/w混合物，氯化鉀溶液與混合物的用量比為1～5ml：40g。
10、在一種實施方式中，步驟(4)的干燥是冷凍干燥，步驟為：將發酵后的固體培養基置于-75～-85℃，預凍10～15h，轉移至冷凍干燥機，-50～-60℃干燥48～72h。
11、在一種實施方式中，步驟(4)中粉碎制備得到的納豆粉的粒徑為60～80目。
12、本專利技術的第二個目的是提供任一上述方法制備得到的納豆粉。
13、本專利技術的第三個目的是提供上述納豆粉在制備納豆激酶中的應用。
14、本專利技術的第四個目的是提供一種發酵產品，含有上述的納豆粉；所述產品包括食品、保健品、藥品。
15、在一種實施方式中，所述食品包括飼料、添加劑或飲品。
16、本專利技術的第五個目的是提供一種同時提高納豆粉中大豆苷、燃料木苷和大豆異黃酮總量的方法，使用苦蕎和豆粕固態發酵制備納豆粉，所述固態發酵包括如下步驟：
17、(1)將苦蕎和豆粕按照質量比1：2～3與水混合浸泡，調節ph為6～8，浸泡后苦蕎和豆粕中含水量為50％～60％w/w；
18、(2)將苦蕎、豆粕混合得到混合物，額外添加碳源、氮源和無機鹽，滅菌制備得到固態培養基；
19、(3)固體培養基中接種bacillus?subtilis?jnfe0127，接種量為3～6％w/w(108～1010cfu/ml)；接種后置于28～32℃、濕度為70％～80％的條件下發酵20～30h，；再轉移至38～42℃、濕度為60％～70％的條件下發酵7～9h；
20、(4)冷凍干燥發酵后的固體培養基，粉碎制備得到大豆苷、燃料木苷和大豆異黃酮總量提高的納豆粉。
21、在一種實施方式中，步驟(2)中碳源為蔗糖、氮源為胰蛋白胨、無機鹽為0.01～0.1mol/l的氯化鉀溶液。
22、在一種實施方式中，苦蕎、豆粕混合時的質量比為0.8～1.2：0.8～1.2，蔗糖的添加量為2～2.5％w/w混合物，胰蛋白胨的添加量為1.0～2.0％w/w混合物，氯化鉀溶液與混合物的用量比為1～5ml：40g。
23、在一種實施方式中，步驟(4)的干燥是冷凍干燥，步驟為：將發酵后的固體培養基置于-75～-85℃，預凍10～15h，轉移至冷凍干燥機，-50～-60℃干燥48～72h。
24、在一種實施方式中，步驟(4)中粉碎制備得到的納豆粉的粒徑為60～80目。
25、本專利技術的第六個目的是提供一種固態發酵制備納豆激酶的方法，包括如下步驟：
26、(1)將苦蕎和豆粕按照質量比1：2～3與水混合浸泡，調節ph為6～8，浸泡后苦蕎和本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種固態發酵制備納豆粉的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中碳源為蔗糖、氮源為胰蛋白胨、無機鹽為0.01～0.1mol/L的氯化鉀溶液；苦蕎、豆粕混合時的質量比為0.8～1.2：0.8～1.2，蔗糖的添加量為2～2.5％w/w混合物，胰蛋白胨的添加量為1.0～2.0％w/w混合物，氯化鉀溶液與混合物的用量比為1～5mL：40g。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)的干燥是冷凍干燥，步驟為：將發酵后的固體培養基置于-75～-85℃，預凍10～15h，轉移至冷凍干燥機，-50～-60℃干燥48～72h。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)中粉碎制備得到的納豆粉的粒徑為60～80目。
5.權利要求1～4任一所述方法制備得到的納豆粉。
6.權利要求5所述納豆粉在制備納豆激酶中的應用。
7.一種發酵產品，其特征在于，含有權利要求5所述的納豆粉；所述產品包括食品、保健品、藥品。
8.根據權利要求7所述的產品，其特征在于
9.一種同時提高納豆粉中大豆苷、染料木苷和大豆異黃酮總量的方法，其特征在于，使用苦蕎和豆粕固態發酵制備納豆粉，所述固態發酵包括如下步驟：
10.一種固態發酵制備納豆激酶的方法，其特征在于，包括如下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種固態發酵制備納豆粉的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(2)中碳源為蔗糖、氮源為胰蛋白胨、無機鹽為0.01～0.1mol/l的氯化鉀溶液；苦蕎、豆粕混合時的質量比為0.8～1.2：0.8～1.2，蔗糖的添加量為2～2.5％w/w混合物，胰蛋白胨的添加量為1.0～2.0％w/w混合物，氯化鉀溶液與混合物的用量比為1～5ml：40g。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(4)的干燥是冷凍干燥，步驟為：將發酵后的固體培養基置于-75～-85℃，預凍10～15h，轉移至冷凍干燥機，-50～-60℃干燥48～72h。
4.根據權利...
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