【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于森林保護學領域，具體涉及一種松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2及其dsrna和應用。
技術介紹
1、松材線蟲病是目前我國發生最為嚴重的森林病害，對我國松林生態安全構成了嚴重威脅，其影響范圍與危害程度逐年增加，已經成為阻礙我國林業高質量發展的主要障礙之一。松材線蟲（ bursaphelenchus?xylophilus）的傳播依賴于媒介昆蟲。在我國南方地區，松墨天牛（ monochamus?alternatus）是最主要傳播媒介，如何切斷松墨天牛與松材線蟲的共生關系，從而阻斷松材線蟲病的傳播，是松材線蟲病防控工作中重要的環節，但目前在尚無針對這個環節的有效防控手段。研究表明，松墨天牛線粒體中的脂肪酸β氧化循環與其松材線蟲攜帶量密切相關，松墨天?？赏ㄟ^ maddhd2基因調控脂肪酸β氧化途徑響應松材線蟲的負載。
2、本專利技術首次從松墨天牛體內分離出 maddhd2基因，通過基因沉默何表型分析驗證了 maddhd2基因在控制松墨天牛的松材線蟲攜帶量中起到了正調控作用。因此，本專利技術公開了松墨天牛的松材線蟲攜帶量響應基因及其在松材線蟲病防控方面的應用，即通過調控 maddhd2基因來開發松材線蟲病防控潛在藥物。
1、本專利技術的目的在于提供一種松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2及其dsrna和應用。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2，其核苷酸序列如seq?id?no.1所示，其編碼的蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
4、上述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2的應用，為如下任意一種或多種：
5、1）在調控松墨天牛脂肪酸β氧化速率中的應用；
6、2）在調控松墨天牛攜帶松材線蟲能力中的應用；
7、3）在防控松材線蟲中的應用。
8、進一步的，上述調控松墨天牛脂肪酸β氧化速率為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2的表達水平降低松墨天牛脂肪酸β氧化速率。
9、進一步的，上述調控松墨天牛攜帶松材線蟲能力為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2的表達水平提高松墨天牛攜帶松材線蟲能力。
10、上述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2的熒光定量引物對，所述熒光定量引物對的序列為：
11、正向引物：5'-tggcattcaaaattacattccga-3'，
12、反向引物：5'-cccaccattgaaactcggattt-3'。
13、上述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2的dsrna，所述dsrna是由seq?idno.4所示的核苷酸序列和與seq?id?no.4所示的核苷酸序列反向互補的核苷酸序列組成的雙鏈rna。
14、上述的dsrna的制備方法，其是根據松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因 maddhd2設計dsrna引物對并通過pcr擴增得到帶有t7啟動子序列的dna，以所述帶有t7啟動子序列的dna為模板經體外轉錄合成dsrna；所述帶有t7啟動子序列的dna的核苷酸序列如seq?id?no.3所示。
15、進一步的，上述dsrna引物對的序列為：
16、正義鏈引物：5'-taatacgactcactataggaccagctcacgttgatcaca-3'，
17、反義鏈引物：5'-taatacgactcactatagggaggtgaaggtttcgagggt-3'。
18、上述的dsrna的應用，為如下任意一種或多種：
19、1）在降低松墨天牛脂肪酸β氧化速率中的應用；
20、2）在提高松墨天牛攜帶松材線蟲能力中的應用；
21、3）在防控松材線蟲中的應用。
22、一種降低松墨天牛脂肪酸β氧化速率和/或提高松墨天牛攜帶松材線蟲能力的方法，其是將上述的dsrna注射入松墨天牛體內，注射部位為松墨天牛的前胸背板。
23、本專利技術的優點在于：
24、本專利技術首次從松墨天牛體內分離得到 maddhd2基因，通過基因沉默何表型分析驗證了 maddhd2基因在控制松墨天牛的松材線蟲攜帶量中起到了正調控作用，以期利用基因工程手段減少松墨天牛攜帶松材線蟲的數量，切斷松材線蟲病的傳播途徑，同時減少松材線蟲病防控過程中各種有毒有機揮發性化學藥劑的使用，減少對環境的污染。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示，其編碼的蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2的應用，其特征在于：為如下任意一種或多種：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述調控松墨天牛脂肪酸β氧化速率為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2的表達水平提高松墨天牛脂肪酸β氧化速率。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述調控松墨天牛攜帶松材線蟲能力為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2的表達水平降低松墨天牛攜帶松材線蟲能力。
5.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2的熒光定量引物對，其特征在于：所述熒光定量引物對的序列為：
6.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2的dsRNA，其特征在于：所述dsRNA是由SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列和與SEQ?ID?NO.4所示的核苷酸序列反向互補的核苷酸序列組成的
7.權利要求6所述的dsRNA的制備方法，其特征在于：根據松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因MaDDHD2設計dsRNA引物對并通過PCR擴增得到帶有T7啟動子序列的DNA，以所述帶有T7啟動子序列的DNA為模板經體外轉錄合成dsRNA；所述帶有T7啟動子序列的DNA的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示。
8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：所述dsRNA引物對的序列為：
9.權利要求6所述的dsRNA的應用，其特征在于：為如下任意一種或多種：
10.一種提高松墨天牛脂肪酸β氧化速率和/或降低松墨天牛攜帶松材線蟲能力的方法，其特征在于：將權利要求6所述的dsRNA注射入松墨天牛體內，注射部位為松墨天牛的前胸背板。
...【技術特征摘要】
1.松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd2，其特征在于：其核苷酸序列如seq?id?no.1所示，其編碼的蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.2所示。
2.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd2的應用，其特征在于：為如下任意一種或多種：
3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述調控松墨天牛脂肪酸β氧化速率為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd2的表達水平提高松墨天牛脂肪酸β氧化速率。
4.根據權利要求2所述的應用，其特征在于：所述調控松墨天牛攜帶松材線蟲能力為通過降低松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd2的表達水平降低松墨天牛攜帶松材線蟲能力。
5.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd2的熒光定量引物對，其特征在于：所述熒光定量引物對的序列為：
6.權利要求1所述的松墨天牛脂肪酸β氧化調控基因maddhd...
【專利技術屬性】
技術研發人員：曾麗瓊，蔡守平，蘇軍，鄒向瑩，蘇順德，
申請(專利權)人：福建省林業科學研究院，
類型：發明
國別省市：
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