【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體涉及新型il-18抑癌功能形式短il-18(shortil-18)及其應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、白細(xì)胞介素-18(il-18)首先以一種無活性的前體形式pro-il-18表達(dá)于多種免疫細(xì)胞和非免疫細(xì)胞中，并在炎癥小體的介導(dǎo)下被切割為具有生物活性的成熟il-18(matureil-18)，通過gsdmd在細(xì)胞膜上形成的微孔分泌到胞外。然后與目的細(xì)胞表面的il-18r結(jié)合，激活下游信號通路例如nf-κb，從而廣泛參與機體的穩(wěn)態(tài)維持和多種疾病的發(fā)生發(fā)展。
2、然而，il-18在腫瘤發(fā)生中的功能存在很多矛盾的信息。首先，pro-il-18的表達(dá)水平與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，高表達(dá)pro-il-18的癌癥病人表現(xiàn)出更高的生存率；但是mature?il-18卻表現(xiàn)出抑癌和促癌的雙重作用，又因為pro-il-18在多種疾病模型中具有不依賴于caspase-1和il-18r的功能，且多項研究表明pro-il-18可以被proteinase-3等多種蛋白酶切割為其他形式，因此本專利技術(shù)人猜測il-18在腫瘤發(fā)生發(fā)展的過程中可能具有除mature?il-18以外的功能形式。
3、因而本領(lǐng)域迫切需要解析il-18在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的詳細(xì)機制，并針對性地開發(fā)相關(guān)藥物以實現(xiàn)對癌癥/腫瘤的抑制。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的目的就是提供新型il-18抑癌功能形式短il-18及其應(yīng)用。
2、在本專利技術(shù)的第一方面，提供了一種短il-18(sh
3、(1)如seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3所示的氨基酸序列；
4、(2)與seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3所示序列具有至少90％(較佳地至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％)同一性的氨基酸序列；和/或
5、(3)在seq?id?no:1、seq?id?no:2、seq?id?no:3所示序列的基礎(chǔ)上，經(jīng)過添加、缺失、修飾和/或取代至少一個(如1-4個)氨基酸殘基所獲得的氨基酸序列。
6、在另一優(yōu)選例中，所述短il-18蛋白具有如seq?id?no:1、seq?id?no:2或seq?idno:3所示的氨基酸序列。
7、在另一優(yōu)選例中，所述短il-18蛋白的分子量大小為14kda至15kda。
8、在另一優(yōu)選例中，所述短il-18蛋白的分子量大小為約14kda或約15kda。
9、在另一優(yōu)選例中，所述短il-18蛋白的分子量大小為14kda或15kda。
10、在另一優(yōu)選例中，所述短il-18蛋白包括人源蛋白和非人哺乳動物源蛋白。
11、在另一優(yōu)選例中，所述非人哺乳動物包括：小鼠、大鼠、牛、馬、羊、猴、兔，或其組合。
12、在本專利技術(shù)的第二方面，提供了一種重組蛋白，所述重組短il-18蛋白具有：如本專利技術(shù)第一方面所述的短il-18蛋白和任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽蛋白。
13、在另一優(yōu)選例中，所述標(biāo)簽蛋白包括：fc標(biāo)簽、ha標(biāo)簽、gggs接頭、flag標(biāo)簽、myc標(biāo)簽、6his標(biāo)簽，或其組合。
14、在本專利技術(shù)的第三方面，提供了一種多核苷酸，所述多核苷酸編碼如本專利技術(shù)第一方面所述的短il-18蛋白，或如本專利技術(shù)第二方面所述的重組蛋白。
15、在另一優(yōu)選例中，所述多核苷酸具有如seq?id?no:4、seq?id?no:5、seq?id?no:6所示的核苷酸序列或相應(yīng)的簡并核苷酸序列。
16、在另一優(yōu)選例中，所述多核苷酸具有如seq?id?no:4、seq?id?no:5或seq?id?no:6所示的核苷酸序列。
17、在本專利技術(shù)的第四方面，提供了一種表達(dá)載體，所述表達(dá)載體含有單拷貝或多拷貝的如本專利技術(shù)第三方面所述的多核苷酸。
18、在另一優(yōu)選例中，所述表達(dá)載體選自下組：dna、rna、病毒載體、質(zhì)粒、轉(zhuǎn)座子、其他基因轉(zhuǎn)移系統(tǒng)，或其組合。優(yōu)選地，所述表達(dá)載體包括病毒載體，如慢病毒、腺病毒、aav病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒，或其組合。
19、在另一優(yōu)選例中，所述表達(dá)載體為腺病毒載體。
20、在另一優(yōu)選例中，所述表達(dá)載體中還包括選自下組的：啟動子、轉(zhuǎn)錄增強元件wpre、長末端重復(fù)序列l(wèi)tr等。
21、在本專利技術(shù)的第五方面，提供了一種宿主細(xì)胞，所述宿主含有如本專利技術(shù)第四方面所述的表達(dá)載體，或其基因組中整合有如本專利技術(shù)第三方面所述的多核苷酸。
22、在本專利技術(shù)的第六方面，提供了一種產(chǎn)生短il-18蛋白的方法，所述方法包括步驟：
23、(a)在適合的條件下，培養(yǎng)如本專利技術(shù)第五方面所述的宿主細(xì)胞，從而獲得含短il-18蛋白的培養(yǎng)物；
24、(b)從所述培養(yǎng)物中分離和/或回收所述的短il-18蛋白；和
25、(c)任選地，對步驟(b)獲得的短il-18蛋白進(jìn)行純化和/或修飾。
26、在本專利技術(shù)的第七方面，提供了一種偶聯(lián)物，所述偶聯(lián)物含有：
27、(a)如本專利技術(shù)第一方面所述的短il-18蛋白；和
28、(b)選自下組的偶聯(lián)部分：可檢測標(biāo)記物、毒素、細(xì)胞因子、酶、金納米顆?；蚣{米棒、納米磁粒、病毒外殼蛋白或vlp，或其組合。
29、在另一優(yōu)選例中，所述(a)部分與所述偶聯(lián)部分通過化學(xué)鍵或接頭進(jìn)行偶聯(lián)。
30、在另一優(yōu)選例中，所述可檢測標(biāo)記物包括放射性核素。
31、在另一優(yōu)選例中，所述放射性核素包括治療用同位素，選自下組：lu-177、y-90、ac-225、as-211、bi-212、bi-213、cs-137、cr-51、co-60、dy-165、er-169、fm-255、au-198、ho-166、i-10?125、i-131、ir-192、fe-59、pb-212、mo-99、pd-103、p-32、k-42、re-186、re-188、sm-153、ra223、ru-106、na24、sr89、tb-149、th-227、xe-133、yb-169、yb-177，或其組合。
32、在本專利技術(shù)的第八方面，提供了一種活性成分，所述活性成分含有：如本專利技術(shù)第一方面所述的短il-18蛋白、如本專利技術(shù)第二方面所述的重組蛋白、如本專利技術(shù)第三方面所述的多核苷酸、如本專利技術(shù)第四方面所述的表達(dá)載體、如本專利技術(shù)第五方面所述的宿主細(xì)胞、如本專利技術(shù)第七方面所述的偶聯(lián)物，或其組合。
33、在另一優(yōu)選例中，所述活性成分組合還含有藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。
34、在本專利技術(shù)的第九方面，提供了一種藥劑，所述藥劑含有：
35、(i)如本專利技術(shù)第八方面所述的活性成分；和
36、(ii)藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑。<本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
1.一種短IL-18(short?IL-18)蛋白，其特征在于，所述短IL-18蛋白的氨基酸序列選自下組：
2.一種重組蛋白，其特征在于，所述重組短IL-18蛋白具有：如權(quán)利要求1所述的短IL-18蛋白和任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽蛋白。
3.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼如權(quán)利要求1所述的短IL-18蛋白，或如權(quán)利要求2所述的重組蛋白。
4.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體含有單拷貝或多拷貝的如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
5.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主含有如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，或其基因組中整合有如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
6.一種產(chǎn)生短IL-18蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括步驟：
7.一種偶聯(lián)物，其特征在于，所述偶聯(lián)物含有：
8.一種活性成分，其特征在于，所述活性成分含有：如權(quán)利要求1所述的短IL-18蛋白、如權(quán)利要求2所述的重組蛋白、如權(quán)利要求3所述的多核苷酸、如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體、如權(quán)利要求5所述的宿主細(xì)胞、如權(quán)利要求7所述的偶聯(lián)物，或其組合
9.一種藥劑，其特征在于，所述藥劑含有：
10.如權(quán)利要求8所述的活性成分的用途，用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種短il-18(short?il-18)蛋白，其特征在于，所述短il-18蛋白的氨基酸序列選自下組：
2.一種重組蛋白，其特征在于，所述重組短il-18蛋白具有：如權(quán)利要求1所述的短il-18蛋白和任選的協(xié)助表達(dá)和/或純化的標(biāo)簽蛋白。
3.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼如權(quán)利要求1所述的短il-18蛋白，或如權(quán)利要求2所述的重組蛋白。
4.一種表達(dá)載體，其特征在于，所述表達(dá)載體含有單拷貝或多拷貝的如權(quán)利要求3所述的多核苷酸。
5.一種宿主細(xì)胞，其特征在于，所述宿主含有如權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體，或其...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：孟廣勛，沈俊辰，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院上海巴斯德研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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