【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程。
技術介紹
1、瓜類白粉病是一種由podosphaera?xanthii引起的具有毀滅性影響的葉部病害，傳統上依賴化學農藥進行防治，但這些農藥對環境具有長期不良影響。因此，開發一種環境友好的防治手段十分必要。
2、l-氨基環丙烷-2-羧酸(l-aze)是一種天然存在的非蛋白氨基酸，已被證實具有抗菌和抗真菌活性，尤其對白粉病有顯著療效。除了l-aze的環比l-脯氨酸少一個碳外，l-aze與l-脯氨酸結構相同。l-aze最早由fowden在百合花、鳳凰木和甜菜中發現。它通過阻礙競爭植被的生長和毒害捕食者，在植物化感作用中起到中間體的作用，這種作用源于l-aze被誤摻入蛋白質中取代了脯氨酸。l-脯氨酸被l-aze取代會導致蛋白質的三級結構發生改變，因為l-aze旋轉的螺旋角比l-脯氨酸小約15°，因此在某些植物物種中應作為一種有效的植物毒素發揮作用。l-aze也是脫氧木津酸和煙草胺的關鍵成分，這兩者是強效的植物源促進劑，有助于植物從土壤中吸收鐵。巧合的是，l-aze也在革蘭氏陰性菌銅綠假單胞菌中被發現。它是一種獨特的小分子非核糖體多肽次級代謝產物的單體，具有抗菌、抗腫瘤、免疫抑制等生物活性。l-aze還被用于多肽結構的修飾及多種抑制劑的制備，例如有害藻類生長抑制劑和肝纖維化抑制劑。值得注意的是，最近的研究表明，l-aze對podosphaera?xanthii具有極強的抗真菌活性，并對白粉病具有顯著的治療效果。作為一種天然存在于植物中的非蛋白氨基酸，l-aze被認為是一種可降解的白粉病控制劑，具有低
3、第一個被驗證的l-aze合成酶，由azej(pa3335)基因編碼，已在銅綠假單胞菌pao1中被發現。這種酶直接從s-腺苷甲硫氨酸(adomet)中生成l-aze，并產生5'-甲硫基腺苷(mta)作為副產物。adomet由s-腺苷甲硫氨酸合成酶(由metk基因編碼)通過甲硫氨酸和atp合成。副產物mta是一種可以通過甲硫氨酸再生途徑(稱為楊循環)再生成甲硫氨酸的核苷，形成腺嘌呤和甲酸。雖然在銅綠假單胞菌中的l-aze合成途徑已經明確，但由于這是一種機會性病原體，阻礙了其作為工業生產l-aze的宿主。此外，植物中較低的合成效率也無法滿足大規模生產的需求。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了一株工程菌株，將質粒pyb1s-azej轉入到大腸桿菌bw25113中獲得；所述質粒pyb1s-azej是將azej基因轉入到pyb1s質粒中，并由pbad啟動子驅動后獲得質粒pyb1s-azej。
2、進一步地，將metk基因轉入到所述質粒pyb1s-azej中獲得質粒pyb1s-azej-metk，再將質粒pyb1s-azej-metk轉入到大腸桿菌bw25113中獲得。
3、進一步地，還包括將質粒pmtn引入到所述的菌株中；所述質粒pmtn是在pfs91g骨架上通過l-阿拉伯糖誘導啟動子pbad表達mtnk基因、mtna基因、mtnb基因、mtnc基因和mtnd基因。
4、更進一步地，在工程菌株中，敲除purr基因后獲得。
5、更進一步地，在工程菌株中，將prs基因轉入到trpr位點后獲得。
6、更進一步地，在工程菌株中，在yeep位點整合一個apt基因后獲得。
7、更進一步地，在工程菌株中，將adk基因轉入到amn位點后獲得。
8、本專利技術還提供了工程菌株在發酵產l-aze中的應用。
9、本專利技術提供的工程菌株能大幅提高l-aze的產量。
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1.工程菌株，其特征在于，將質粒pYB1s-azeJ轉入到大腸桿菌BW25113中獲得；
2.依據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，將metK基因轉入到所述質粒pYB1s-azeJ中獲得質粒pYB1s-azeJ-metK，再將質粒pYB1s-azeJ-metK轉入到大腸桿菌BW25113中獲得；
3.依據權利要求2所述的工程菌株，其特征在于，還包括將質粒pMTN引入到所述權利要求2所述的菌株中；
4.依據權利要求3所述的工程菌株，其特征在于，敲除purR基因后獲得。
5.依據權利要求4所述的工程菌株，其特征在于，將prs基因轉入到trpR位點后獲得。
6.依據權利要求5所述的工程菌株，其特征在于，在yeeP位點整合一個apt基因后獲得。
7.依據權利要求5所述的工程菌株，其特征在于，將adk基因轉入到amn位點后獲得。
8.依據權利要求1至7任一所述的工程菌株在發酵產L-AZE中的應用。
9.依據權利要求4或5任一所述的工程菌株在發酵產L-AZE中的應用，其特征在于，增強PRPP供
10.依據權利要求6或7任一所述工程菌株在發酵產L-AZE中的應用，其特征在于，所述加強ATP-腺嘌呤循環的反應如下式：
...【技術特征摘要】
1.工程菌株，其特征在于，將質粒pyb1s-azej轉入到大腸桿菌bw25113中獲得；
2.依據權利要求1所述的工程菌株，其特征在于，將metk基因轉入到所述質粒pyb1s-azej中獲得質粒pyb1s-azej-metk，再將質粒pyb1s-azej-metk轉入到大腸桿菌bw25113中獲得；
3.依據權利要求2所述的工程菌株，其特征在于，還包括將質粒pmtn引入到所述權利要求2所述的菌株中；
4.依據權利要求3所述的工程菌株，其特征在于，敲除purr基因后獲得。
5.依據權利要求4所述的工程菌株，其特征在...
【專利技術屬性】
技術研發人員：鄭杰，于波，
申請(專利權)人：中國科學院微生物研究所，
類型：發明
國別省市：
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