【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于細胞系，具體涉及一種歐洲鰻鱺皮膚細胞系es及其培養(yǎng)方法和應用。
技術介紹
1、鰻鱺科(anguillidae)魚類具有復雜的降河洄游習性，迄今尚未能實現規(guī)?；斯し敝秤捎跉W洲鰻鱺胚胎和低齡幼體的難以獲取增加了歐洲鰻鱺體細胞系建立的難度，同時建立的鰻鱺體細胞系常常存在傳代不穩(wěn)定以及針對病毒感染敏感性差的問題，導致可用于病毒學和基因工程研究的敏感細胞系數量匱乏。
2、此外，目前記錄在案的魚類細胞系中，貼壁生長型細胞占據絕對優(yōu)勢，具備懸浮生長特性的報道稀少。由于貼壁生長型細胞在使用中型以上旋轉式生物反應器的生產環(huán)境下，對培養(yǎng)載體和營養(yǎng)物質的利用效率也相對較低。這無疑對建立具有懸浮生長特性的魚類細胞模型提出較大的需求。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術的目的在于提供一種歐洲鰻鱺皮膚細胞系es，具有病毒敏感性和傳代穩(wěn)定性，且能夠實現貼壁培養(yǎng)和懸浮培養(yǎng)的轉換，可長期穩(wěn)定地大量獲取，且能夠為鰻鱺科魚類的病害防控和種質保護研究提供數量保障。
2、本專利技術提供了一種歐洲鰻鱺(anguilla?anguilla)皮膚細胞系es，保藏編號為cctcc?no：c202429。
3、本專利技術提供了一種所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es的培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
4、將接種密度1×105個/ml～10×105個/ml的歐洲鰻鱺皮膚細胞系es接種于細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)。
5、優(yōu)選的是，所述細胞培養(yǎng)基為含終體積濃度3％～15％胎牛血清的l-1
6、優(yōu)選的是，所述培養(yǎng)的溫度為15～37℃。
7、本專利技術提供了所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es在制備細胞模型中的應用。
8、優(yōu)選的是，所述細胞模型包括病毒感染細胞模型和/或外源基因表達細胞模型。
9、優(yōu)選的是，所述病毒感染細胞模型中病毒包括鰻鱺科致病病毒和/或不以鰻鱺科魚類為宿主的魚類致病病毒。
10、優(yōu)選的是，所述病毒感染細胞模型的培養(yǎng)方法，將所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es于26℃下培養(yǎng)成單層細胞，接種病毒后置于30℃下培養(yǎng)分離病毒；
11、所述單層細胞培養(yǎng)時所用的培養(yǎng)基包括含終體積百分比8％胎牛血清的l-15培養(yǎng)基；30℃下培養(yǎng)用培養(yǎng)基為含終體積百分比3％胎牛血清的l-15培養(yǎng)基。
12、優(yōu)選的是，所述外源基因表達細胞模型的培養(yǎng)方法，是將所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es培養(yǎng)成單層細胞，用攜帶外源基因的重組表達載體轉染所述單層細胞，經培養(yǎng)得到外源基因表達模型；
13、所述單層細胞在進行培養(yǎng)時所用的培養(yǎng)基包括含終體積百分比8％胎牛血清的l-15培養(yǎng)基；
14、所述單層細胞的培養(yǎng)溫度為26℃。
15、本專利技術提供了一種外源基因表達細胞模型，以所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es為宿主細胞，包括目標外源基因或包含所述目標外源基因的基因衍生產品。
16、本專利技術提供了一種歐洲鰻鱺皮膚細胞系es，保藏編號為cctcc?no:c202429。本專利技術提供的細胞系es為成纖維樣細胞，是一株異倍體細胞系，具有適應溫度區(qū)域極廣、適應營養(yǎng)貧乏環(huán)境、增殖能力強、能在貼壁和懸浮培養(yǎng)模式之間行可逆性轉換等特點；在貼壁培養(yǎng)模式下能以24h的間隔穩(wěn)定傳代，并在傳代60次后依然保持典型的成纖維樣細胞形態(tài)，在貼壁—懸浮混合培養(yǎng)模式下能無需傳代即可大量、多批次收獲活性細胞材料；在液氮中保存30天的細胞復蘇后其貼壁率可達90％以上，更換培養(yǎng)基后成活率超過85％。同時所述細胞系es的培養(yǎng)方法經濟易行，除胎牛血清外無需添加特殊營養(yǎng)因子，培養(yǎng)模式轉換指標簡單明確，區(qū)分度高，在病毒學、免疫學、基因工程、生理學、毒理學、環(huán)境監(jiān)測等領域都有良好的應用前景。
17、本專利技術還提供了上述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es在細胞模型中的應用。所述細胞系es可作為病毒宿主細胞用以構建病毒侵染模型，也可用于構建外源基因表達模型。實施例中，利用鰻鱺皰疹病毒和赤點石斑魚神經壞死病毒侵染所述細胞系構建病毒侵染模型，接種鰻鱺皰疹病毒60h后可觀察到接毒樣品中出現多處局部細胞圓縮，出現細胞病變(cytopathiceffects,cpe)現象，至接毒后160h病變率可達50％；接種赤點石斑魚神經壞死病毒24h后，可觀察到接毒樣品中細胞死亡率上升，出現cpe現象，至接毒后72h病變率可達80％；并且在病毒的細胞傳代過程中，細胞內病毒基因的拷貝數出現了顯著的增長，表明所述細胞系es具有作為多功能病毒研究模型的潛力；同時還以綠色熒光蛋白為外源表達基因，構建進所述細胞系es中，經觀測，自轉染后24h起可實現表達，熒光持續(xù)時間可穩(wěn)定達到4天以上，測得轉染率約為10％，在魚類細胞系中表現優(yōu)秀，說明所建立的歐洲鰻鱺皮膚細胞系es可穩(wěn)定表達外源性基因，該細胞系在基因工程領域具備相當的應用價值。
18、生物保藏信息
19、歐洲鰻鱺(anguilla?anguilla)皮膚細胞系es，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，單位簡稱為cctcc，地址為中國武漢，武漢大學，保藏時間為2024年4月24日，保藏編號為cctcc?no：c202429。
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1.一種歐洲鰻鱺(Anguilla?anguilla)皮膚細胞系ES，其特征在于，保藏編號為CCTCCNO：C202429。
2.一種權利要求1所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系ES的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述細胞培養(yǎng)基為含終體積濃度3％～15％胎牛血清的L-15培養(yǎng)基。
4.根據權利要求2所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為15～37℃。
5.權利要求1所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系ES在制備細胞模型中的應用。
6.根據權利要求5所述應用，其特征在于，所述細胞模型包括病毒感染細胞模型和/或外源基因表達細胞模型。
7.根據權利要求6所述應用，其特征在于，所述病毒感染細胞模型中病毒包括鰻鱺科致病病毒和/或不以鰻鱺科魚類為宿主的魚類致病病毒。
8.根據權利要求6或7所述應用，其特征在于，所述病毒感染細胞模型的培養(yǎng)方法，將所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系ES于26℃下培養(yǎng)成單層細胞，接種病毒后置于30℃下培養(yǎng)分離病毒；
9.根據權利要求6所述應用，其特征在
10.一種外源基因表達細胞模型，其特征在于，以權利要求1所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系ES為宿主細胞，包括目標外源基因或包含所述目標外源基因的基因衍生產品。
...【技術特征摘要】
1.一種歐洲鰻鱺(anguilla?anguilla)皮膚細胞系es，其特征在于，保藏編號為cctccno：c202429。
2.一種權利要求1所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es的培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述細胞培養(yǎng)基為含終體積濃度3％～15％胎牛血清的l-15培養(yǎng)基。
4.根據權利要求2所述培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)的溫度為15～37℃。
5.權利要求1所述歐洲鰻鱺皮膚細胞系es在制備細胞模型中的應用。
6.根據權利要求5所述應用，其特征在于，所述細胞模型包括病毒感染細胞模型和/或外源基因表達細胞模型。
7.根據權利要求6所...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：鄭在予，陳斌，龔暉，池洪樹，
申請(專利權)人：福建省農業(yè)科學院生物技術研究所，
類型：發(fā)明
國別省市：
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