【技術實現步驟摘要】
本申請屬于生物醫藥，具體的，涉及一種新型冠狀病毒mrna疫苗及其制備和應用。
技術介紹
1、新型冠狀病毒(sars-cov-2)屬于β屬冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑60～140nm；病毒基因組為單股正鏈rna，全長約29.9kb，編碼4種結構蛋白：刺突蛋白(spike，s)、包膜蛋白(envelope，e)、膜蛋白(membrane，m)和核殼蛋白(nucleocapsid，n)。新冠病毒入侵人體呼吸道后，主要依靠其表面的s蛋白上的受體結合域(rbd)識別宿主細胞受體血管緊張素轉化酶2(ace2)，并與之結合感染宿主細胞。
2、基于新冠病毒的結構和感染人體細胞的過程，一般選擇s蛋白作為新冠疫苗的抗原。新冠病毒在人群中流行和傳播過程中基因頻繁發生突變，某些突變會影響病毒生物學特性，如s蛋白上特定的氨基酸突變會導致新冠病毒與ace2親和力增強，進而增強其在細胞內復制和傳播的能力。另外，s蛋白的一些氨基酸突變也會增加其對疫苗的免疫逃逸能力和降低不同變異株之間的交叉保護能力，導致再次感染。因此，開發針對多種病毒株的新冠疫苗具有重要意義。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種新型冠狀病毒mrna疫苗，所述mrna疫苗編碼抗原蛋白包含新冠病毒ba.5株s蛋白和xbb.1.5株s蛋白，能夠有效防治新型冠狀病毒感染。
2、在一個實施例中，本專利技術提供一種編碼新型冠狀病毒蛋白的mrna分子，所述mrna分子包含編碼新冠病毒ba.5株s蛋白和xbb.1
3、在一個實施例中，所述mrna分子編碼的新冠病毒ba.5株s蛋白包括f812p、a887p、a894p、a937p、k981p和982p突變。
4、在一個實施例中，所述mrna分子編碼的新冠病毒xbb.1.5株s蛋白包括f813p、a888p、a895p、a938p、k982p和983p突變。
5、在一個實施例中，所述包含編碼新冠病毒ba.5株s蛋白的序列如seq?id?no.3、5、7、9或11所示，所述包含編碼xbb.1.5株s蛋白的序列如seq?id?no.4、6、8、10或12所示。
6、在一個實施例中，所述mrna分子還包括帽結構，5′utr元件，3′utr和poly?a；所述5’utr元件選自cyba、den2、hhbb、rpl38、rps25、tcv或top；所述3′utr元件選自hhba1、hhbb、bydv、hhbbx2、cyba_1.5x、bmv、tsv或tcv；所述poly?a選自60a、100a、30a-10x-70a、30a-10x-70a-10c-a或40a-10x-60a-10c-a。
7、本專利技術還提供一種包含所述mrna分子的表達載體，其包含從5’端至3’端的以下元件：5’utr、包含新冠病毒s蛋白的抗原蛋白編碼序列、3’utr和poly?a；任選地，是將上述新冠病毒s蛋白編碼序列連接至pkl質粒中，優選地，所述pkl質粒是seq?id?no.2的pkl-luci質粒酶切得到的。
8、在一個實施例中，所述mrna分子表達載體的5’utr選自cyba、den2、hhbb、rpl38、rps25、tcv或top；所述3’utr選自hhba1、hhbb、bydv、hhbbx2、cyba_1.5x、bmv、tsv或tcv；所述poly?a選自60a、100a、30a-10x-70a、30a-10x-70a-10c-a或40a-10x-60a-10c-a。優選地，所述5’utr為den2，所述3’utr為hhbbx2，所述poly?a為100a。
9、在一個實施例中，本專利技術還提供一種新型冠狀病毒mrna疫苗，由脂質納米顆粒包封所述mrna分子構成。
10、在一個實施例中，所述脂質納米顆粒包封的mrna分子為分別編碼包含新冠病毒ba.5株s蛋白和xbb.1.5株s蛋白的mrna分子的混合，其中編碼包含新冠病毒ba.5株s蛋白和包含xbb.1.5株s蛋白的mrna分子的摩爾比為(0.5～2):1。
11、本專利技術還提供了所述的mrna分子、所述的表達載體、所述的新型冠狀病毒mrna疫苗在制備預防和/或治療新型冠狀病毒感染藥物中的應用。
12、本專利技術的有益效果：
13、本專利技術設計并制備了一款二價新冠mrna疫苗，該疫苗由脂質納米顆粒包封2條mrna構成；2條mrna分別編碼包含omicronba.5株和xbb.1.5株的s蛋白的抗原蛋白，并對s蛋白的個別氨基酸做了突變，以增強疫苗的免疫原性。小鼠免疫試驗證實，本專利技術的二價新冠疫苗能有效誘導小鼠體內針對新冠病毒的體液免疫和細胞免疫。
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1.一種mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子包含編碼新冠病毒BA.5株S蛋白和XBB.1.5株S蛋白的序列。
2.根據權利要求1所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子編碼的新冠病毒BA.5株S蛋白包括F812P、A887P、A894P、A937P、K981P和V982P突變。
3.根據權利要求1或2所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子編碼的新冠病毒XBB.1.5株S蛋白包括F813P、A888P、A895P、A938P、K982P和V983P突變。
4.根據權利要求1-3任一項所述的mRNA分子，其特征在于，所述編碼包含新冠病毒BA.5株S蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3、5、7、9或11所示，所述編碼包含XBB.1.5株S蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4、6、8、10或12所示。
5.權利要求1-4任一所述的mRNA分子，其特征在于，所述mRNA分子還包括帽結構，5′UTR，3′UTR和poly?A；所述5’UTR選自CYBA、DEN2、hHBB、RpL38、RpS25、TCV或TOP；
6.包含權利要求1-5任一項所述mRNA分子的表達載體，其特征在于，其包含從5′端至3′端的以下元件：5’UTR、包含新冠病毒S蛋白的抗原蛋白編碼序列、3’UTR和poly?A；任選地，是將上述新冠病毒S蛋白編碼序列連接至pKL質粒中，優選地，所述pKL質粒是SEQ?ID?NO.2的pKL-Luci質粒酶切得到的；
7.一種新冠病毒mRNA疫苗，其特征在于，包含權利要求1-5任一項所述的mRNA分子。
8.權利要求7所述的新冠病毒mRNA疫苗，其特征在于，所述mRNA疫苗還包含脂質納米顆粒，脂質納米顆粒包封所述mRNA分子。
9.權利要求8所述的新冠病毒mRNA疫苗，其特征在于，所述脂質納米顆粒包封的mRNA分子為分別編碼包含新冠病毒BA.5株S蛋白和XBB.1.5株S蛋白的mRNA分子的混合，其中編碼包含新冠病毒BA.5株S蛋白和包含XBB.1.5株S蛋白的mRNA分子的摩爾比為（0.5~2）:1。
10.權利要求1-5任一項所述的mRNA分子、權利要求6所述的表達載體、權利要求7-9任一項所述的mRNA疫苗在制備預防和/或治療新型冠狀病毒感染藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種mrna分子，其特征在于，所述mrna分子包含編碼新冠病毒ba.5株s蛋白和xbb.1.5株s蛋白的序列。
2.根據權利要求1所述的mrna分子，其特征在于，所述mrna分子編碼的新冠病毒ba.5株s蛋白包括f812p、a887p、a894p、a937p、k981p和v982p突變。
3.根據權利要求1或2所述的mrna分子，其特征在于，所述mrna分子編碼的新冠病毒xbb.1.5株s蛋白包括f813p、a888p、a895p、a938p、k982p和v983p突變。
4.根據權利要求1-3任一項所述的mrna分子，其特征在于，所述編碼包含新冠病毒ba.5株s蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.3、5、7、9或11所示，所述編碼包含xbb.1.5株s蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.4、6、8、10或12所示。
5.權利要求1-4任一所述的mrna分子，其特征在于，所述mrna分子還包括帽結構，5′utr，3′utr和poly?a；所述5’utr選自cyba、den2、hhbb、rpl38、rps25、tcv或top；所述3′utr選自hhba1、hhbb、bydv、hhbbx2、cyba_1.5x、bmv、tsv或tcv；所述poly?a選自60a、100...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊建國，劉玉瑩，王艷，李文華，吳依昕，王雪，叢麗圓，張海江，劉永江，
申請(專利權)人：北京康樂衛士生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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