【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物，具體地，涉及一種細胞分化誘導劑及其應用。
技術介紹
1、病態竇房結綜合征是一類可能隨時危及患者生命的疾病，且發病率隨年齡增長而增加，采用干細胞來源的生物起搏器可通過恢復竇房結的起搏能力或創建異位起搏區域來實現，為此類疾病治療提供了有效治療策略。
2、干細胞誘導主要涉及將干細胞（包括胚胎干細胞（escs）和誘導多能干細胞（ipscs））分化成心肌細胞的方法。常用的分化誘導技術包括采用特定的生長因子和化學物質誘導干細胞分化成心肌細胞，包括逐步添加不同的信號分子，模擬心肌細胞發育過程中的自然環境。例如，5-氮雜胞苷(5-azacytidine，5-aza)可以誘導mscs在體外誘導分化成為心肌樣細胞。早在1999年，加拿大tomita將5-aza誘導的骨髓單個核細胞注射到冷凍法制作的大鼠心梗模型中，發現在心肌的瘢痕組織中有骨髓來源的心肌樣細胞。
3、近年來隨著基因編輯技術的發展，也有通過特定基因的操控來促進或指導干細胞向心肌細胞的分化的嘗試。但目前已知誘導技術難以解決目前干細胞分化出的類心肌細胞的存在動作電位較低的問題，這限制了其對心臟修復的潛在臨床應用。
技術實現思路
1、為解決上述問題，本專利技術提出了一種細胞分化誘導劑。
2、在第一個方面，本專利技術提供了一種細胞分化誘導劑，包含烏頭堿。
3、在一個實施方案中，所述誘導劑還包括5-氮雜胞苷。
4、在一個實施方案中，所述烏頭堿的濃度為1μm。
6、在第二個方面，本專利技術提供了一種產生心肌細胞的方法，包括采用5-氮雜胞苷以及烏頭堿處理被誘導細胞，使得被誘導細胞向心肌細胞分化。
7、在一個實施方案中，所述產生心肌細胞為體外分化。
8、在一個實施方案中，先用5-氮雜胞苷誘導被誘導細胞分化，之后采用烏頭堿培養分化后的被誘導細胞。
9、在一個實施方案中，先用含有10?μm的5-氮雜胞苷的培養基誘導被誘導細胞向類心肌細胞分化，經過一定誘導時間，漂洗細胞，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養；之后用1μm的烏頭堿培養基培養。
10、在一個實施方案中，所述誘導時間為12-48h，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養1-4周，之后采用1μm的烏頭堿培養基培養0.5-2h。
11、在一個實施方案中，所述誘導時間為24h，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養3周，之后采用用1μm的烏頭堿培養基培養1h。
12、在一個實施方案中，所述被誘導細胞包括干細胞。
13、在一個實施方案中，所述干細胞包括哺乳動物干細胞、人干細胞，優選地，包括胚胎干細胞（escs）和誘導多能干細胞（ipscs）。
14、在第三個方面，本專利技術還提供了所述的細胞分化誘導劑，或所述產生心肌細胞的的方法在誘導被誘導細胞分化為心肌細胞的應用。
15、在第四個方面，本專利技術還提供了第一方面所述的誘導劑、第二方面所述的產生心肌細胞的方法在治療受試者心臟疾病的應用，所述心臟疾病包括心肌病、冠狀動脈疾病、心力衰竭、心律失常、心肌梗死、心內膜炎、致心律失常性右心室發育不良(arvd)、長qt綜合征、兒茶酚胺敏感性多形性室性心動過速(cpvt)、巴斯綜合征(barth?syndrome)和在杜氏肌營養不良中的心臟受累等。
16、本專利技術的技術效果：
17、1.專利技術人首次將烏頭堿用于類心肌細胞分化，能夠顯著改善分化后的類心肌細胞存在的動作電位低的問題。
18、2.專利技術人首次確定包括烏頭堿的心肌細胞誘導劑各組分的濃度，能夠在改善心肌細胞動作電位低的問題的同時，避免了烏頭堿的毒性作用。
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1.一種細胞分化誘導劑，其特征在于，包含烏頭堿。
2.如權利要求1所述的誘導劑，其特征在于，所述誘導劑還包括5-氮雜胞苷；
3.一種產生心肌細胞的方法，其特征在于，包括采用5-氮雜胞苷以及烏頭堿處理被誘導細胞，使得被誘導細胞向心肌細胞分化。
4.如權利要求5所述的方法，其特征在于，先用5-氮雜胞苷誘導被誘導細胞分化，之后采用烏頭堿培養分化后的被誘導細胞。
5.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，先用含有10?μM的5-氮雜胞苷的培養基誘導被誘導細胞向類心肌細胞分化，經過一定誘導時間，漂洗細胞，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養；之后用1μM的烏頭堿培養基培養。
6.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述誘導時間為12-48h，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養1-4周，之后采用1μM的烏頭堿培養基培養0.5-2h。
7.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述誘導時間為24h，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養3周，之后采用用1μM的烏頭堿培養基培養1h。
8.如權利要求7
9.如權利要求10所述的方法，所述干細胞包括哺乳動物干細胞、人干細胞，優選地，包括胚胎干細胞（ESCs）和誘導多能干細胞（iPSCs）。
10.如權利要求1-4任一項所述的細胞分化誘導劑，或權利要求5-11任一項所述的方法在誘導被誘導細胞分化為心肌細胞的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種細胞分化誘導劑，其特征在于，包含烏頭堿。
2.如權利要求1所述的誘導劑，其特征在于，所述誘導劑還包括5-氮雜胞苷；
3.一種產生心肌細胞的方法，其特征在于，包括采用5-氮雜胞苷以及烏頭堿處理被誘導細胞，使得被誘導細胞向心肌細胞分化。
4.如權利要求5所述的方法，其特征在于，先用5-氮雜胞苷誘導被誘導細胞分化，之后采用烏頭堿培養分化后的被誘導細胞。
5.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，先用含有10?μm的5-氮雜胞苷的培養基誘導被誘導細胞向類心肌細胞分化，經過一定誘導時間，漂洗細胞，更換不含5-氮雜胞苷的完全培養基繼續培養；之后用1μm的烏頭堿培養基培養。
6.如權利要求7所述的方法，其...
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