【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物，具體涉及一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212及其應用。
技術介紹
1、水產養殖業被譽為全球經濟增長最迅猛的食品產業，然而，該產業的快速擴張伴隨著抗生素使用量驚人的增加。養殖業者往往在不確定是病毒還是細菌感染的情況下，仍會選擇使用抗生素，這種現象在亞洲和非洲的一些中低收入國家尤為明顯。而且相較于發達國家，這些國家對抗生素銷售和使用的監管相對較弱。盡管我國對水產品抗生素殘留問題已經形成嚴格的監管體系，但在水產養殖產業，大規模的使用抗生素依然是一種常見現象。這種現象不僅導致了耐藥菌株的產生，還引發了食品安全和水環境污染問題，對人類健康和公共衛生安全構成了嚴重威脅（malik?h,?singh?r,?kaur?s,?et?al.?review?ofantibiotic?use?and?resistance?in?foodanimal?production?in?who?south-east?asiaregion.?j?infect?public?health.?2023;?16?suppl?1:172-182.）。世界衛生組織2022年全球抗菌素耐藥性和使用監測系統報告指出，僅2019年，耐藥細菌就造成約130萬人死亡，預計到2050年，這一數據將上升至1000萬，遠超過因癌癥死亡的人數，每年造成的直接經濟損失超過2.0萬億美元（julos,?awosile?b.?global?antimicrobial?resistance?and?usesurveillance?system?(glass?2022):?inv
2、為了應對不同致病菌的侵染，生物體會產生多種抗菌蛋白/肽。通常抗菌蛋白相比抗菌肽分子量要大，但它們作用機制是相似的。抗菌蛋白/肽對細菌的作用靶標不是單一的，缺乏特異性，這一特性使得細菌對抗菌蛋白不易產生耐藥性。抗菌蛋白/肽殺菌的關鍵機制之一是改變或者破壞細菌細胞膜的結構和極性。許多抗菌蛋白/肽疏水性c端首先插入到細胞膜的疏水區域，從而導致膜構象的改變；此外，抗菌蛋白/肽還能改變膜脂分子的排列，同時在細胞膜上形成多個離子通道，使得細胞內容物大量溢出胞外而導致細菌死亡；還有一些抗菌蛋白/肽能夠抑制細胞壁合成酶的活性，破壞細胞壁的結構和完整性，這也是引發細菌死亡的一個重要機制；另外，一些抗菌蛋白/肽還可以穿透細胞膜，抵達細胞內部，阻斷細胞的關鍵過程，如干擾蛋白質/核酸合成、蛋白質/酶活性、細胞分裂、蛋白質正常折疊，最終導致細胞死亡（mhlongo?jt,?waddad?ay,?albericio?f,?de?la?torre?bg.antimicrobial?peptide?synergies?for?fightinginfectious?diseases.?adv?sci(weinh).?2023;10(26):e2300472）。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212及其應用。
2、為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案：
3、一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212，所述大黃魚抗菌蛋白lchpamp212具有如seq?idno.1所示的氨基酸序列。
4、一種編碼上述大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的基因，所述基因具有如seq?id?no.2所示的核苷酸序列。
5、一種表達載體，所述表達載體包括上述編碼大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的基因。
6、一種宿主細胞，所述宿主細胞包括上述的表達載體。
7、上述一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的制備方法，其是通過ecor?ⅰ/xho?ⅰ限制性酶切位點將上述編碼大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的基因克隆到pet-32a載體上，構建重組表達載體pet-32a-lchpamp212；將重組表達載體pet-32a-lchpamp212轉化到bl21(de3)感受態細胞中，經iptg誘導表達、提取、純化，獲得大黃魚抗菌蛋白lchpamp212。
8、上述一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的應用，包括但不限于以下幾種；
9、1）在制備抗菌劑中的應用；
10、2）在制備水體消毒劑中的應用；
11、3）在制備飼料添加劑中的應用；
12、4）在制備保鮮劑中的應用。
13、進一步的，上述抗菌劑用于抗創傷弧菌、溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌。
14、本專利技術的顯著優點在于：
15、本專利技術提供的抗菌蛋白lchpamp212為一假定蛋白（hypothetical?protein），其在大黃魚基因組未獲得功能注釋，本專利技術創新獲得該假定蛋白的抗菌功能。抗菌蛋白lchpamp212對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌都具有較好的抗菌活性，但對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的抗菌機制不同。掃描電鏡結果顯示，抗菌蛋白lchpamp212可以破壞創傷弧菌、溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌三種指示菌的細胞壁或細胞膜結構，形成孔洞；凝膠阻滯實驗結果表明，抗菌蛋白lchpamp212可以結合革蘭氏陰性菌創傷弧菌和溶藻弧菌的dna，但不能結合革蘭氏陽性菌金黃色葡萄球菌的dna。此外，抗菌蛋白lchpamp212可以抑制創傷弧菌、溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌三種指示菌生物膜的形成。在溫度25-100℃、鹽度0-40‰范圍，抗菌蛋白lchpamp212對創傷弧菌、溶藻弧菌、金黃色葡萄球菌三種指示菌保持著抗菌活性，表明抗菌蛋白lchpamp212具有作為抗菌劑、水體消毒劑、飼料添加劑和保鮮劑的潛力，并適用于海水環境使用。
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1.一種大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212，其特征在于：所述大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212具有如SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列。
2.一種編碼權利要求1所述大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212的基因，其特征在于：所述基因具有如SEQ?ID?NO.2所示的核苷酸序列。
3.一種表達載體，其特征在于：所述表達載體包括權利要求2所述的基因。
4.一種宿主細胞，其特征在于：所述宿主細胞包括權利要求3所述的表達載體。
5.一種權利要求1所述大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212的制備方法，其特征在于：通過EcoRⅠ/Xho?Ⅰ限制性酶切位點將權利要求2所述的基因克隆到pET-32a載體上，構建重組表達載體pET-32a-LcHpAMP212；將重組表達載體pET-32a-LcHpAMP212轉化到BL21(DE3)感受態細胞中，經IPTG誘導表達、提取、純化，獲得大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212。
6.如權利要求1所述的大黃魚抗菌蛋白LcHpAMP212的應用，其特征在于：包括但不限于以下幾種：
7.根據權利要
...【技術特征摘要】
1.一種大黃魚抗菌蛋白lchpamp212，其特征在于：所述大黃魚抗菌蛋白lchpamp212具有如seq?id?no.1所示的氨基酸序列。
2.一種編碼權利要求1所述大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的基因，其特征在于：所述基因具有如seq?id?no.2所示的核苷酸序列。
3.一種表達載體，其特征在于：所述表達載體包括權利要求2所述的基因。
4.一種宿主細胞，其特征在于：所述宿主細胞包括權利要求3所述的表達載體。
5.一種權利要求1所述大黃魚抗菌蛋白lchpamp212的制備方法，...
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