【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于微生物次級代謝產物領域，具體涉及一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌及其代謝產物和用途。
技術介紹
1、植物采后病害是嚴重降低采后園藝產品商品經濟價值的一大重要制約因素，過量的真菌孢子富集在果實表皮組織，為人類健康帶來不可逆的傷害。目前，隨著食品安全已成為熱點討論話題，化學農藥和化學殺菌劑降解率低、高殘留、污染環境等問題，為食品安全帶來不容忽視的挑戰。近年來，隨著國家對對食品安全的關注，天然、安全的生物保鮮劑日益走進大眾視野，微生物次級代謝產物以其可持續發展、生態友好及較好的抑菌保鮮的特點，成為研究熱點。
2、目前，生防微生物主要包括生防霉菌和生防細菌兩大類。生防霉菌作為生防微生物的另一大類主要支柱，在果蔬采后病害防治中，占據不可忽視的組分。然而，霉菌培養時間久，孢子容易分散在環境中，發酵液容易被細菌污染，為其抑菌發酵液制備和果蔬病害防治方面帶來不少困難。而生防細菌以其生長速率快，發酵產量高，防治譜寬等特點，在采后果蔬病害防止中得到了廣泛的應用。因此，有必要開發新的生防細菌用于植物采后病蟲害的防治。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服現有技術的缺點，提供一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌及其代謝產物和用途。
2、本專利技術的目的通過以下技術方案來實現：一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌，分類命名為：bacillus?siamensis?n-1，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為：gdmcc64974，保藏日期為：2024年8月12日。
3、一種廣譜生
4、s1.菌種活化：將權利要求1所述的bacillus?siamensis?n-1接種于lb固體培養基中，在28～32℃的培養箱中培養10～14h；
5、s2.制備種子液：將活化后的菌接種于lb液體培養基，搖床培養22～26h獲得種子液，所述培養的溫度為36～40℃，搖床的轉速為110～130rpm/min；
6、s3.發酵：將步驟s2獲得的種子液接種到發酵培養基中進行發酵，所述發酵的溫度為30～34℃，發酵轉速為160～200rpm/min，發酵時間為68～74h，將發酵液進行后處理得到抗菌肽。
7、進一步地，所述發酵培養基包括如下組分：葡萄糖5g/l，酵母提取粉10g/l，氯化鈉10g/l。
8、進一步地，步驟s3中所述發酵溫度為32℃、發酵轉速為180rpm/min、發酵時間為72h、種子液的接種量為3％，載液量為每瓶150ml/500ml。
9、進一步地，所述后處理的具體操作為：將發酵液離心，棄去沉淀，上清液中加入10wt％的鹽酸溶液，4℃放置10～14h，進一步離心棄去上清，所得沉淀溶于甲醇溶液，用氫氧化鈉溶液調ph值至7后磁力攪拌4.5～5.5h，離心棄去沉淀，上清液旋蒸濃縮凍干得抗菌肽，其中，所述離心的轉速為4500～5500rpm/min，離心時間為8～12min。
10、上述的方法制備的廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物在防治蓮霧軟腐病和芒果炭疽病中的應用。
11、進一步地，所述廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物對荔枝霜疫霉菌、蓮霧小孢擬盤多毛孢菌及芒果炭疽菌有抑制作用。
12、進一步地，代謝產物抗菌肽的最佳濃度為3.125mg/ml。
13、制備的抗菌肽添加于pdb培養基，稀釋濃度至3.125mg/ml，可以通過破壞蓮霧小孢擬盤多毛孢菌(p.microspore)和荔枝霜疫霉菌(peronophythora?litchi)菌絲結構，造成活性氧(reactive?oxygen，ros)大量累積，細胞發生凋亡，從而有效抑制蓮霧小孢擬盤多毛孢菌(pestalotiopsis?microspore)和荔枝霜疫霉菌(peronophythora?litchi)生長繁殖。
14、制備的抗菌肽添加于pda固體培養基，稀釋濃度至3.125mg/ml，可以有效抑制芒果炭疽菌(c.gloeosporioides)和蓮霧小孢擬盤多毛孢菌(p.microspore)生長繁殖速率，并通過體外刺傷實驗驗證得到，在該濃度下芒果炭疽病和蓮霧軟腐病的擴散速率顯著降低。
15、制備的抗菌肽添加于無菌水中，稀釋濃度至3.125mg/ml，將采后芒果清洗干凈后浸泡于抗菌肽溶液中，芒果果實炭疽病發病率顯著降低，且果實軟化速率明顯降低，較好維持了果實果膠酶和纖維素的活力，從而延長了采后芒果貨架期。
16、本專利技術具有以下優點：采后熱帶水果病害發生的原因在于，真菌孢子潛伏在果實表皮，通過果皮表面氣孔生長繁殖，從而誘發果實病害，降低其商品價值和貨架期。本專利技術提供了一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌，分類命名為：bacillus?siamensis?n-1，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為：gdmcc?64974，保藏日期為：2024年8月12日，該廣譜生防暹羅芽孢桿菌的代謝產物抗菌肽對常見的熱帶水果病原菌有明顯的抑制效果，且可以通過降低芒果炭疽病和蓮霧軟腐病發病率，維持采后果實較高的貯藏品質及較長的貨架期。此外，該抗菌肽為微生物天然發酵產物，具有天然、安全、抑菌譜廣等特點，且制備方法簡單，便于應用于工業化生產，可實現大規模生產和應用。
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1.一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌，其特征在于，分類命名為：Bacillus?siamensis?N-1，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為：GDMCC?64974，保藏日期為：2024年8月12日。
2.一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基包括如下組分：葡萄糖5g/L，酵母提取粉10g/L，氯化鈉10g/L。
4.根據權利要求2所述的根據權利要求1所述的一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，步驟S3中所述發酵溫度為32℃、發酵轉速為180rpm/min、發酵時間為72h、種子液的接種量為3％，載液量為每瓶150mL/500mL。
5.根據權利要求2所述的根據權利要求1所述的一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，所述后處理的具體操作為：將發酵液離心，棄去沉淀，上清液中加入10wt％的鹽酸溶液，4℃放置10～14h，進一步離心棄去上清，所得沉淀溶于甲醇溶液，用氫氧化鈉溶
6.根據權利要求2-5中任一所述的方法制備的廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物在防治蓮霧軟腐病和芒果炭疽病中的應用。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物對荔枝霜疫霉菌、蓮霧小孢擬盤多毛孢菌及芒果炭疽菌有抑制作用。
8.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，代謝產物抗菌肽的最佳濃度為3.125mg/mL。
...【技術特征摘要】
1.一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌，其特征在于，分類命名為：bacillus?siamensis?n-1，保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏號為：gdmcc?64974，保藏日期為：2024年8月12日。
2.一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，它包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，所述發酵培養基包括如下組分：葡萄糖5g/l，酵母提取粉10g/l，氯化鈉10g/l。
4.根據權利要求2所述的根據權利要求1所述的一種廣譜生防暹羅芽孢桿菌代謝產物的制備方法，其特征在于，步驟s3中所述發酵溫度為32℃、發酵轉速為180rpm/min、發酵時間為72h、種子液的接種量為3％，載液量為每瓶150ml/500ml。
5.根據權利要求2所述的根據權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：邵遠志，胡宇欣，李雯，李振，王鑫，
申請(專利權)人：海南大學，
類型：發明
國別省市：
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