【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于獸藥殘留的檢測領域，尤其涉及一種quechers結合高效液相色譜串聯質譜法測定動物源性食品中16種獸藥殘留量的方法。
技術介紹
1、作為世界上主要的豬肉生產和消費國，獸藥在畜牧業中扮演著至關重要的角色，在預防動物疫病，確保食品產量方面發揮著關鍵作用。然而，部分養殖戶為了經濟利益，可能會濫用獸藥或不遵守用藥規范，造成豬肉中獸藥殘留超過規定限度，進而引起食品安全的問題。如果人們長期攝入這些獸殘超標的動物源性食品，體內藥物的累積可能會誘發毒性反應，危害健康。因此，確保市售豬肉符合質量和安全標準，加強對豬肉中獸藥殘留的檢測和研究顯得尤為關鍵。現行國家標準現行國家標準gb?31650-2019《食品中獸藥最大殘留限量》和gb?31650.1-2022《食品中41種獸藥最大殘留限量》等標準和法規已經為肉類、蛋類、乳制品等動物源食品的獸藥殘留量設定了明確的限制標準。為了保護消費者的健康和確保動物源食品的質量安全，開發出快捷、高效且能同時準確檢測多種獸藥殘留的分析方法具有重要意義。
2、動物源食品由于其基質的復雜性，潛在干擾物多，這給獸藥殘留的檢測帶來了挑戰。由于獸藥殘留在樣品中含量很低，儀器的高選擇性和高靈敏度成為了推動獸藥殘留檢測技術發展的關鍵因素。高效液相色譜串聯質譜技術（hplc-ms/ms）結合了液相色譜的高效分離能力和質譜檢測器的高靈敏度與選擇性的優點，使其成為獸藥殘留檢測的首選方法。現行國家標準gb?31658.17-2021《動物性食品中四環素類,磺胺類和喹諾酮類藥物殘留量的測定?液相色譜-串聯質譜法》
3、quechers技術是通過提取劑、吸水劑和凈化劑對樣品進行前處理。往試樣的提取液中直接添加十八烷基硅烷鍵合硅膠（c18）、n-丙基乙二胺（psa）、石墨化炭黑（gcb）等凈化劑，能夠有效吸附并去除大部分雜質，達到凈化樣品的目的。quechers技術因其高效省時、操作便捷、成本低、穩定性強和安全性佳等優勢，在獸藥殘留分析領域被廣泛應用。因此，本研究基于quechers的前處理方法與lc-ms/ms技術相結合，對前處理條件、色譜、質譜條件等參數進行優化，建立了一種針對豬肉中常見的幾類獸藥殘留包括磺胺類、喹諾酮類、大環內酯類等16種獸藥殘留進行同時檢測的簡單高效且具有高靈敏度的檢測方法，以期為今后獸藥殘留檢測提供借鑒。
技術實現思路
1、針對現有技術中存在的問題，本專利技術的目的在于提供一種quechers結合高效液相色譜串聯質譜法測定動物源性食品中16種獸藥殘留量的方法。
2、本專利技術的目的是通過如下技術方案來實現的：
3、一種quechers結合高效液相色譜串聯質譜法測定動物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，包括以下步驟：
4、s1：動物源性食品樣品分散于水中，經甲酸乙腈溶液提取和萃取鹽包萃取，萃取鹽包為質量比為無水硫酸鈉和氯化鈉，得到提取液；
5、s2：采用quechers凈化劑凈化提取液，quechers凈化劑為psa、c18和無水硫酸鎂，離心后取上清液；上清液依次經濃縮、復溶、乙腈飽和正己烷凈化和過濾處理，得到待測液；
6、s3：利用高效液相色譜串聯質譜方法檢測待測液中的16種獸藥殘留量。
7、進一步的，上述動物源性食品包括禽畜肉和內臟。
8、進一步的，上述步驟s1具體為：將動物源性食品樣品絞碎后取5g放入離心管內，加入3ml超純水和適量陶瓷均質子，漩渦混合1min，再加入20ml?0.1%甲酸乙腈溶液，充分振搖1min，再渦旋振蕩提取5min，然后加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，渦旋5min后，4℃、5500rpm離心10min，所得上清液即為提取液。
9、進一步的，上述步驟s2具體為：將提取液轉移到裝有50mg?psa粉末、200mg?c18粉末和1g無水硫酸鈉的離心管中，渦旋振蕩2min，再6000rpm離心10min，收集上清液；移取5ml上清液于40℃下氮吹至干，加入1ml?25％乙腈水溶液溶解殘渣，再加入1ml乙腈飽和正己烷，渦旋混勻，5000rpm離心5min，分成兩層，將下層溶液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜進行過濾，得到待測液。
10、進一步的，上述步驟s3中的色譜條件為：色譜柱：agilent?eclipse?plus?c18色譜柱，2.1mm×50mm×1.8μm；柱溫：40℃；流動相a：0.1%甲酸水溶液，流動相b：乙腈；流速：0.4ml/min；進樣量：2μl；梯度洗脫程序：0~3.60min，5％?b；3.60~3.80min，5%~12%b；3.80~7.00min，12％?b；7.00~7.10min，12%~26%?b；7.10~9.00min，26%~55%?b；9.00~9.10min，55%~100%?b；9.10~11.50min，100%?b；11.50~11.60min，100%~5%?b；11.60~14.00min，5%?b。
11、進一步的，上述步驟s3中的質譜條件為：電噴霧離子源正離子模式，多反應離子監測模式檢測；鞘氣溫度250℃，流速11.0l/min；霧化氣壓力45psi；毛細管電壓3.5kv；干燥氣溫度300℃，流速8.0l/min。
12、進一步的，上述16種獸藥為磺胺甲惡唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、林可霉素、羅紅霉素、替米考星、鹽酸金剛乙胺、左旋咪唑、甲氧氯普胺、洛美沙星、氧氟沙星和沙拉沙星。
13、進一步的，上述16種獸藥的質譜檢測參數為：
14、
15、*為定量離子。
16、本專利技術的顯著優點在于：
17、與現有技術相比，本專利技術采用quechers前處理方式進行提取凈化的方法，比國標中的方法提高了分析物的回收率和靈敏度；反相色譜柱進行分離后采用超高效液相色譜串聯質譜聯用儀對畜禽肉、內臟樣品中16種獸藥進行同時檢測。本專利技術的檢測方法靈敏準確快速，可在9min內同時對16種獸藥進行定性和定量分析，檢出限（lod）為0.01μg/kg~0.25μg/kg。本專利技術的檢測方法對其他種獸藥的檢測也具有一定的參考價值。
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1.一種QuEChERS結合高效液相色譜串聯質譜法測定動物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述動物源性食品包括禽畜肉和內臟。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟S1具體為：將動物源性食品樣品絞碎后取5g放入離心管內，加入3mL超純水和適量陶瓷均質子，漩渦混合1min，再加入20mL0.1%甲酸乙腈溶液，充分振搖1min，再渦旋振蕩提取5min，然后加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，渦旋5min后，4℃、5500rpm離心10min，所得上清液即為提取液。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟S2具體為：將提取液轉移到裝有50mg?PSA粉末、200mg?C18粉末和1g無水硫酸鈉的離心管中，渦旋振蕩2min，再6000rpm離心10min，收集上清液；移取5mL上清液于40℃下氮吹至干，加入1mL?25％乙腈水溶液溶解殘渣，再加入1mL乙腈飽和正己烷，渦旋混勻，5000rpm離心5min，分成兩層，將下層溶液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜進行過濾
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟S3中的色譜條件為：色譜柱：Agilent?Eclipse?Plus?C18色譜柱，2.1mm×50mm×1.8μm；柱溫：40℃；流動相A：0.1%甲酸水溶液，流動相B：乙腈；流速：0.4mL/min；進樣量：2μL；梯度洗脫程序：0~3.60min，5％?B；3.60~3.80min，5%~12%?B；3.80~7.00min，12％?B；7.00~7.10min，12%~26%?B；7.10~9.00min，26%~55%?B；9.00~9.10min，55%~100%?B；9.10~11.50min，100%?B；11.50~11.60min，100%~5%?B；11.60~14.00min，5%?B。
6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟S3中的質譜條件為：電噴霧離子源正離子模式，多反應離子監測模式檢測；鞘氣溫度250℃，流速11.0L/min；霧化氣壓力45psi；毛細管電壓3.5kV；干燥氣溫度300℃，流速8.0L/min。
7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述16種獸藥為磺胺甲惡唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺喹惡啉、磺胺嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺間甲氧嘧啶、林可霉素、羅紅霉素、替米考星、鹽酸金剛乙胺、左旋咪唑、甲氧氯普胺、洛美沙星、氧氟沙星和沙拉沙星。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述16種獸藥的質譜檢測參數為：
...【技術特征摘要】
1.一種quechers結合高效液相色譜串聯質譜法測定動物源性食品中16種獸藥殘留量的方法，其特征在于：包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述動物源性食品包括禽畜肉和內臟。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s1具體為：將動物源性食品樣品絞碎后取5g放入離心管內，加入3ml超純水和適量陶瓷均質子，漩渦混合1min，再加入20ml0.1%甲酸乙腈溶液，充分振搖1min，再渦旋振蕩提取5min，然后加入4g無水硫酸鈉和1g氯化鈉，渦旋5min后，4℃、5500rpm離心10min，所得上清液即為提取液。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s2具體為：將提取液轉移到裝有50mg?psa粉末、200mg?c18粉末和1g無水硫酸鈉的離心管中，渦旋振蕩2min，再6000rpm離心10min，收集上清液；移取5ml上清液于40℃下氮吹至干，加入1ml?25％乙腈水溶液溶解殘渣，再加入1ml乙腈飽和正己烷，渦旋混勻，5000rpm離心5min，分成兩層，將下層溶液通過0.22μm孔徑的微孔濾膜進行過濾，得到待測液。
5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟s3中的色譜條件為：色譜柱：agilent?eclipse?plus?c18色...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳楠楠，陳秀明，方東升，詹清，鄭孝賢，揭曉玲，周阿容，王海龍，林夢丹，
申請(專利權)人：福建省微生物研究所，
類型：發明
國別省市：
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