【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于藥用真菌開發(fā)利用，更具體地說，本專利技術(shù)涉及一種痂狀炭角菌及其無菌子囊果培養(yǎng)方法。
技術(shù)介紹
1、痂狀炭角菌(xylaria?escharoidea)，是生長在白蟻巢穴基物上的一種野生真菌，分布于中國南方各地，數(shù)量稀少。炭角菌屬(xylaria?hill?ex?shrank)的分類學(xué)地位屬于真菌界fungi，子囊菌門ascomycota，盤菌亞門pezizomycotina，糞殼菌綱sordariomycetes，炭角菌亞綱xylariomycetidae，炭角菌目xylariales，炭角菌科xylariaceae。
2、炭角菌是一類食藥用菌，具有抑菌、抗氧化、抗腫瘤、抗抑郁、酶抑制和免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性，有很大的藥用開發(fā)潛力。炭角菌生態(tài)類型特殊，大多數(shù)物種是植物內(nèi)生菌，還有很多物種生長在由植物殘?bào)w與土壤構(gòu)成的白蟻廢巢中，子囊果難發(fā)現(xiàn)。炭角菌在野生環(huán)境下，子囊果在植物活體接近死亡或已經(jīng)死亡后才會(huì)發(fā)現(xiàn)，且子囊果細(xì)小，生物量少，很難進(jìn)行開發(fā)利用。
3、痂狀炭角菌的子囊果人工培養(yǎng)難度較大，自然生長周期達(dá)5-7個(gè)月，開放式培養(yǎng)子囊果極易受到蟲害、病害，無法形成完全成熟的子囊果，故建立痂狀炭角菌無菌子囊果的人工培養(yǎng)方法具有重要的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)的一個(gè)目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu)點(diǎn)。
2、為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的這些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種痂狀炭角菌，其分類命名為xylaria?escha
3、優(yōu)選的是，所述痂狀炭角菌的its1序列如seq?id?no.1所示。
4、優(yōu)選的是，所述痂狀炭角菌的采集、分離、純化的方法為：
5、9～10月在野外采集成熟痂狀炭角菌新鮮子囊果標(biāo)本，用報(bào)紙或餐巾紙包裹，常溫、通風(fēng)條件下運(yùn)送回實(shí)驗(yàn)室；
6、用無菌刀片剖開子囊果，切取菌柄中央的3～5×3～5×3～5mm大小的菌肉，放在pda斜面培養(yǎng)基中22～25℃避光培養(yǎng)2～3d，當(dāng)菌肉組織邊緣長出2～3cm菌絲后，挑取邊緣小塊菌絲轉(zhuǎn)接到新的pda斜面培養(yǎng)基中，繼續(xù)培養(yǎng)，如此轉(zhuǎn)接2～4次，得到純化的菌種，0～4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
7、一種如上所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，包括以下步驟：
8、步驟一、栽培種生產(chǎn)：制備麥粒培養(yǎng)基，在無菌條件下接種痂狀炭角菌，培養(yǎng)得到栽培種；
9、步驟二、制備子囊果培養(yǎng)料：以闊葉樹木屑或松木屑、棉籽殼、玉米芯、麩皮、石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣為原料制備得到子囊果培養(yǎng)料；
10、步驟三、裝料：將子囊果培養(yǎng)料裝入子囊果培養(yǎng)容器中，高壓滅菌，自然冷卻；
11、步驟四、接種：將栽培種接入步驟三裝料后的子囊果培養(yǎng)容器中；
12、步驟五、菌絲體培養(yǎng)：把接種后的子囊果培養(yǎng)容器放入培養(yǎng)室中，培養(yǎng)室和容器表面用70％乙醇溶液噴灑1～2次，在22～25℃避光培養(yǎng)7～10d；
13、步驟六、無菌子囊果培養(yǎng)：繼續(xù)在溫度5～30℃、空氣相對(duì)濕度60～80％條件下避光培養(yǎng)60～120d，形成黑色堅(jiān)硬的無菌子囊果，培養(yǎng)期間每隔7～10d用70％乙醇溶液噴灑培養(yǎng)室和容器表面，誘蟲燈誘殺培養(yǎng)室內(nèi)的昆蟲；
14、步驟七、采收：采收子囊果，去掉菌柄基部的培養(yǎng)料殘留物，烘干、包裝；
15、步驟八、儲(chǔ)存：將包裝好的無菌子囊果放于0～4℃冷庫中保存。
16、優(yōu)選的是，所述步驟一中，麥粒培養(yǎng)基的制備方法為：干小麥在沸水中煮20～30min，使干濕比達(dá)到1:1.7～1.8，撈起瀝干明水，加入石灰、石膏、碳酸鈣和過磷酸鈣，攪拌均勻后裝入容器中，用聚丙烯薄膜封口，在0.12～0.14mpa、121℃高壓滅菌30～40min，自然冷卻，得到麥粒培養(yǎng)基。
17、優(yōu)選的是，所述麥粒培養(yǎng)基中，小麥為96wt％，石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣各1wt％。
18、優(yōu)選的是，所述麥粒培養(yǎng)基容器包括但不限于250～500ml三角瓶、750～1000ml菌種瓶。
19、優(yōu)選的是，所述步驟一中，培養(yǎng)為：在22～25℃避光培養(yǎng)5～7d，菌絲體長滿麥粒培養(yǎng)基，容器口有大量白色氣生菌絲體或菌索。
20、優(yōu)選的是，所述步驟二中，子囊果培養(yǎng)料的制備方法為：闊葉樹木屑或松木屑、棉籽殼、玉米芯按任意比例混合共76wt％，麩皮20wt％，石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣各1wt％，稱取原料，加水拌料，料水比為1:1.2～1.4，攪拌均勻，得到子囊果培養(yǎng)料，其ph自然，含水量62～65％。
21、優(yōu)選的是，所述步驟三中，子囊果培養(yǎng)容器為高30～50cm、邊長10～30cm的方形玻璃或聚丙烯容器，或者高30～50cm、直徑10～30cm的圓形玻璃或聚丙烯容器。
22、優(yōu)選的是，所述步驟三中，裝料的具體方法為：將子囊果培養(yǎng)料裝入子囊果培養(yǎng)容器中，裝料量為容器總高度的1/5～1/4，壓實(shí)培養(yǎng)料，料中央打一個(gè)直徑1～3cm的接種孔，擦干凈裝料后的容器內(nèi)壁，采用聚丙烯膜和報(bào)紙封口，0.12～0.14mpa、121℃高壓滅菌60～70min，自然冷卻。
23、優(yōu)選的是，所述步驟四中，接種的具體方法為：在無菌條件下將栽培種接入子囊果培養(yǎng)容器的接種孔中，蓋上培養(yǎng)料。
24、優(yōu)選的是，所述步驟七中，烘干為在60～65℃烘箱中烘6～8h；包裝為放入聚乙烯包裝袋內(nèi)，密封。
25、本專利技術(shù)至少包括以下有益效果：本專利技術(shù)從自然界中分離篩選出一株痂狀炭角菌xe-tl2301，該菌株可用于人工培養(yǎng)子囊果；同時(shí)，本專利技術(shù)提供了一種痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，該方法簡單、成本低，生長周期短，解決了現(xiàn)有痂狀炭角菌的子囊果人工培養(yǎng)難度較大、自然生長周期長、易受到蟲害、病害等問題，本專利技術(shù)采用闊葉樹木屑或松木屑、棉籽殼、玉米芯等原料為培養(yǎng)料，干子囊果的生物學(xué)效率為1～3％，得到的子囊果可長期保存，為痂狀炭角菌無菌子囊果的人工培養(yǎng)提供了新的方法。
26、本專利技術(shù)的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對(duì)本專利技術(shù)的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種痂狀炭角菌，其特征在于，其分類命名為Xylaria?escharoidea?Xe-TL2301，已于2024年07月26日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心登記保藏，保藏編號(hào)為CGMCC?No.41417。
2.如權(quán)利要求1所述的痂狀炭角菌，其特征在于，所述痂狀炭角菌的ITS1序列如SEQ?IDNo.1所示。
3.一種如權(quán)利要求1所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟一中，麥粒培養(yǎng)基的制備方法為：干小麥在沸水中煮20～30min，使干濕比達(dá)到1:1.7～1.8，撈起瀝干明水，加入石灰、石膏、碳酸鈣和過磷酸鈣，攪拌均勻后裝入容器中，用聚丙烯薄膜封口，在0.12～0.14MPa、121℃高壓滅菌30～40min，自然冷卻，得到麥粒培養(yǎng)基。
5.如權(quán)利要求4所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述麥粒培養(yǎng)基中，小麥為96wt％，石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣各1wt％。
6.如權(quán)利要求4所述的痂狀
7.如權(quán)利要求3所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟二中，子囊果培養(yǎng)料的制備方法為：闊葉樹木屑或松木屑、棉籽殼、玉米芯按任意比例混合共76wt％，麩皮20wt％，石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣各1wt％，稱取原料，加水拌料，料水比為1:1.2～1.4，攪拌均勻，得到子囊果培養(yǎng)料，其pH自然，含水量62～65％。
8.如權(quán)利要求3所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟三中，子囊果培養(yǎng)容器為高30～50cm、邊長10～30cm的方形玻璃或聚丙烯容器，或者高30～50cm、直徑10～30cm的圓形玻璃或聚丙烯容器；裝料的具體方法為：將子囊果培養(yǎng)料裝入子囊果培養(yǎng)容器中，裝料量為容器總高度的1/5～1/4，壓實(shí)培養(yǎng)料，料中央打一個(gè)直徑1～3cm的接種孔，擦干凈裝料后的容器內(nèi)壁，采用聚丙烯膜和報(bào)紙封口，0.12～0.14MPa、121℃高壓滅菌60～70min，自然冷卻。
9.如權(quán)利要求8所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟四中，接種的具體方法為：在無菌條件下將栽培種接入子囊果培養(yǎng)容器的接種孔中，蓋上培養(yǎng)料。
10.如權(quán)利要求3所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟七中，烘干為在60～65℃烘箱中烘6～8h；包裝為放入聚乙烯包裝袋內(nèi)，密封。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種痂狀炭角菌，其特征在于，其分類命名為xylaria?escharoidea?xe-tl2301，已于2024年07月26日在中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心登記保藏，保藏編號(hào)為cgmcc?no.41417。
2.如權(quán)利要求1所述的痂狀炭角菌，其特征在于，所述痂狀炭角菌的its1序列如seq?idno.1所示。
3.一種如權(quán)利要求1所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.如權(quán)利要求3所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟一中，麥粒培養(yǎng)基的制備方法為：干小麥在沸水中煮20～30min，使干濕比達(dá)到1:1.7～1.8，撈起瀝干明水，加入石灰、石膏、碳酸鈣和過磷酸鈣，攪拌均勻后裝入容器中，用聚丙烯薄膜封口，在0.12～0.14mpa、121℃高壓滅菌30～40min，自然冷卻，得到麥粒培養(yǎng)基。
5.如權(quán)利要求4所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述麥粒培養(yǎng)基中，小麥為96wt％，石灰、石膏、碳酸鈣、過磷酸鈣各1wt％。
6.如權(quán)利要求4所述的痂狀炭角菌的無菌子囊果培養(yǎng)方法，其特征在于，所述步驟一中，培養(yǎng)為：在22～25℃避光培養(yǎng)5～7d，菌絲體長滿麥粒培養(yǎng)基，容器口有大量白色氣生菌絲體或菌索。
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【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：石毅，王光禮，王茂輝，石代勇，王媛媛，楊思豪，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：成都天綠菌業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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