【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及微生物，尤其是涉及一種降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法和應用。
技術介紹
1、巖藻糖(fucose，fuc)又稱6-脫氧-半乳糖，是一種廣泛存在的天然糖，廣泛存在于動物、植物、藻類中。而且，由于l-巖藻糖參與構成母乳低聚糖，所以l-巖藻糖也是人體八種必須糖之一，在人體中發揮著重要的生理功能。l-巖藻糖可通過與病毒、細菌、毒素結合來防止其感染細胞，增強機體抵抗力；l-巖藻糖也可通過調解腸道菌群來維護腸道健康；此外，l-巖藻糖還具有皮膚保濕功能，能延緩皮膚衰老，刺激纖維母細胞增生，并防止紫外線、輻射等對纖維母細胞造成的傷害。
2、目前，巖藻糖的生產方法主要有植物提取法、化學合成法和微生物發酵法，微生物發酵法具有生產周期短、產量高等優點。微生物發酵法制備巖藻糖的過程包括：首先，在巖藻糖生產菌株胞內，果糖-6-磷酸在基因mana、manb、manc、gmd和wcag作用下合成gdp-l-巖藻糖；其次，巖藻糖生產菌株胞外的乳糖被β-半乳糖苷通透酶lacy轉運至胞內，然后和gdp-l-巖藻糖作用合成2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)；最后，在巖藻糖生產菌株胞內，2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)在α-l-巖藻糖苷酶的作用下分解為巖藻糖和乳糖。但是，在微生物發酵法制備l-巖藻糖時發現，2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)會被運送至巖藻糖生產菌株胞外，無法完全在胞內與α-l-巖藻糖苷酶反應，導致巖藻糖生產菌株在發酵生產巖藻糖時會在胞外出現2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)的殘留。
3、因此，開發一種
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法和應用。
2、為實現上述目的，本專利技術采取的技術方案為：
3、第一方面，本專利技術提供了一種降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法，包括如下步驟：
4、50-90℃加熱處理巖藻糖生產菌株，使細胞破裂釋放內容物，水解胞外的2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)生成巖藻糖(fuc)。
5、本專利技術的方法通過溫和的加熱來使巖藻糖生產菌株發生細胞破裂，釋放出含有α-l-巖藻糖苷酶的內容物，并保持α-l-巖藻糖苷酶的酶活性，使其能夠發揮作用將胞外的2’-巖藻糖基乳糖分解為巖藻糖(fuc)和乳糖，從而降低胞外巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)的含量。
6、優選地，所述加熱處理的溫度為50-80℃。
7、更為優選地，所述加熱處理的溫度為50-60℃。
8、更進一步優選地，所述加熱處理的溫度為60℃。
9、優選地，所述加熱處理的時間為5-90min。
10、更為優選地，所述加熱處理的時間為10-40min。
11、更進一步優選地，所述加熱處理的時間為15-30min，具體可為15min。
12、優選地，所述內容物含有α-l-巖藻糖苷酶。
13、優選地，所述巖藻糖生產菌株表達α-l-巖藻糖苷酶。
14、在本專利技術中，本領域所有能夠生產巖藻糖的菌株都能夠通過本專利技術的方法來降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)的含量，因為巖藻糖生產菌株內的α-l-巖藻糖苷酶均能夠與胞外的2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)反應生成巖藻糖(fuc)和乳糖，從而降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)的含量。
15、優選地，所述巖藻糖生產菌株在加熱處理后，還包括置于25-42℃溫度下進行保溫處理。
16、更為優選地，所述保溫處理的溫度為37℃。
17、更為優選地，所述保溫處理的時間為0.1-2h。
18、更進一步優選地，所述保溫處理的時間為0.5-2h。
19、在本專利技術中，之所以在對巖藻糖生產菌株進行加熱處理后進行保溫處理，是為了讓α-l-巖藻糖苷酶更好、更充分地分解2’-巖藻糖基乳糖(2’-fl)生成巖藻糖(fuc)。
20、第二方面，本專利技術提供了如第一方面所述方法在巖藻糖生產菌株發酵生產巖藻糖中的應用。
21、第三方面，本專利技術提供了一種巖藻糖生產菌株發酵生產巖藻糖的方法，包括如下步驟：
22、s1.對巖藻糖生產菌株進行分批補料發酵生產巖藻糖，得到含巖藻糖生產菌株的發酵液；
23、s2.按照如第一方面所述降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法對含巖藻糖生產菌株的發酵液進行處理。
24、與現有技術相比，本專利技術具有以下有益效果：
25、本專利技術的方法通過溫和的加熱來使巖藻糖生產菌株發生細胞破裂，釋放出含有α-l-巖藻糖苷酶的內容物，并保持α-l-巖藻糖苷酶的酶活性，使其能夠發揮作用將胞外的2’-巖藻糖基乳糖分解為巖藻糖和乳糖，從而降低胞外巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖的含量。
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1.一種降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的溫度為50-80℃。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的溫度為50-60℃。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的時間為5-90min。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的時間為10-40min。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述巖藻糖生產菌株表達α-L-巖藻糖苷酶。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述巖藻糖生產菌株在加熱處理后，還包括置于25-42℃溫度下進行保溫處理。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，所述保溫處理的時間為0.1-2h。
9.權利要求1-8任一所述方法在巖藻糖生產菌株發酵生產巖藻糖中的應用。
10.一種巖藻糖生產菌株發酵生產巖藻糖的方法，其特征在于，包括如下步驟：
【技術特征摘要】
1.一種降低巖藻糖生產菌株胞外2’-巖藻糖基乳糖含量的方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的溫度為50-80℃。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的溫度為50-60℃。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的時間為5-90min。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述加熱處理的時間為10-40min。
6.如...
【專利技術屬性】
技術研發人員：沈慧敏，金憶文，勞才文，夏沁怡，李賀，樊希杰，張啟宏，
申請(專利權)人：合肥中科健康生物產業技術研究院有限公司，
類型：發明
國別省市：
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