【技術實現步驟摘要】
本申請屬于生物，涉及一種報告基因細胞株及其構建方法和應用。
技術介紹
1、近年來，抗體藥物以高特異性、安全性和有效性等優點被廣泛應用于多種疾病的臨床治療中。白介素33(interleukin?33，il-33)是il-1細胞因子家族成員，主要由組織內皮細胞或上皮細胞表達，當細胞接收到應激、感染及損傷等刺激時，il-33在細胞中表達，將外界的抗原刺激信號傳遞到th2通路。il-33與細胞表面的il-1受體相關蛋白(il-1rl1，又稱為st2)結合，招募il-1受體輔助蛋白(il-1rap)，引起胞內tir聚集后招募myd88，激活nf-κb信號通路，誘導肥大細胞，th2細胞，treg細胞及ilc2等細胞分泌il-5、il-6、il-13、tnf、inf-γ等促炎癥因子及ccl17、ccl22、cxcl8等趨化因子，誘發炎癥反應。il-33在粘膜組織炎癥、關節炎癥以及慢性皮膚炎癥的疾病中的表達異常升高，如過敏性鼻炎(kamekura?ret?al.,(2012)clin?exp?allergy.42:218-28)、風濕性關節炎、強直性脊柱炎、特應性皮炎(savinko?t?et?al.,(2012)j?invest?dermatol.132:1392-1400)、牛皮癬；且il-33/st2信號途徑失調與哮喘、慢性阻塞性肺病(hacker,lambers?et?al.,(2009)j?clin?labanal.23:372-9)、支氣管炎、炎癥性腸病(beltran?cj?et?al.,(2010)inflamm?boweldi
2、生物學活性是抗體藥物的關鍵質量屬性，直接影響到抗體藥物的質量，在整個工藝過程中需要嚴格把控。因此，提供一種準確快速評價抗st2/il-33軸抗體生物學活性的細胞和方法，適用于大規模抗體藥物的檢測，為抗il-33/st2軸抗體藥物的研究和篩選提供了有利工具，具有廣闊的應用前景。
技術實現思路
1、本申請提供了一種細胞株，其中，所述細胞株為哺乳動物細胞，并且所述細胞株的基因組中整合有第一表達盒和第二表達盒，其中，所述第一表達盒表達外源的st2基因，所述第二表達盒表達外源的受nf-κb調控的報告基因。
2、在一些實施方案中，所述外源的st2基因是人st2基因或猴st2基因。在一些實施方案中，所述的st2基因包括cdna基因。在一些實施方案中，所述的st2基因包括野生型和突變型基因。
3、在一些實施方案中，所述報告基因的轉錄表達依賴nf-κb響應元件(nf-κb/re)的激活。在一些實施方案中，所述第二表達盒包括nf-κb響應元件和報告基因編碼序列。在一些實施方案中，所述報告基因為熒光素酶報告基因(luciferase基因)。在一些實施方案中，所述報告基因為luc2p基因(photinus?pyralis)。
4、在一些實施方案中，所述細胞株為人腎上皮細胞系。在一些實施方案中，所述細胞株為人胚腎293(hek293)細胞或其衍生細胞。在一些實施方案中，所述細胞株為人胚腎293t(hek293t)細胞。
5、在一些具體的實施方案中，所述細胞株的保藏編號為cctcc?no:c202397。
6、在一些具體的實施方案中，所述細胞株為hek293t細胞，已于2023年05月09日保藏于中國典型培養物保藏中心(cctcc)，分類命名為：人胚腎293t-st2-nfκb報告基因細胞hek293t-st2-nfκb?luciferase，保藏編號為：cctcc?no:c202397，保藏地址為：中國，武漢，武漢大學，430072。
7、在一些實施方案中，所述的細胞株具有一種或多種以下特性：
8、(a)可用于體外檢測抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段的生物學活性；
9、(b)可用于體外測定或評估抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段對il-33/st2相互作用的抑制或者阻斷效果；
10、(c)特異性好，具體地，抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段與細胞結合的擬合曲線呈現良好的“s”型趨勢；
11、(d)代次穩定性好，具體地，所述細胞株可穩定傳代5代或更多、傳代10代或更多、傳代15代或更多、傳代20代或更多、傳代25代或更多、傳代30代或更多、傳代35代或更多、傳代40代或更多、傳代45代或更多、傳代50代或更多、或傳代更多代。
12、另一方面，本申請還提供了一種用于檢測抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段的生物學活性的細胞株，所述細胞株為哺乳動物細胞，并且所述細胞株的基因組中整合有第一表達盒和第二表達盒，其中，所述第一表達盒表達外源的st2基因，所述第二表達盒表達外源的受nf-κb調控的報告基因。
13、在一些實施方案中，所述外源的st2基因是人st2基因或猴st2基因。在一些實施方案中，所述的st2基因包括cdna基因。在一些實施方案中，所述的st2基因包括野生型和突變型基因。
14、在一些實施方案中，所述報告基因的轉錄表達依賴nf-κb響應元件(nf-κb/re)的激活。在一些實施方案中，所述第二表達盒包括nf-κb響應元件和報告基因編碼序列。在一些實施方案中，所述報告基因為熒光素酶報告基因(luciferase基因)。在一些實施方案中，所述報告基因為luc2p基因(photinus?pyralis)。
15、在一些實施方案中，所述細胞株為人腎上皮細胞系。在一些實施方案中，所述細胞株為hek293細胞或其衍生細胞。在一些實施方案中，所述細胞株為hek293t細胞。
16、在一些具體的實施方案中，所述細胞株的保藏編號為cctcc?no:c202397。
17、在一些具體的實施方案中，所述細胞株為hek293t細胞，已于2023年05月09日保藏于中國典型培養物保藏中心(cctcc)，分類命名為：人胚腎293t-st2-nfκb報告基因細胞hek293t-st2-nfκb?luciferase，保藏編號為：cctcc?no:c202397，保藏地址為：中國，武漢，武漢大學，430072。
18、本申請所述的抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段是指能夠抑制或阻斷il-33/st2相互作用的抗體或其抗原結合片段，包括但不限于抗st2抗體或其抗原結合片段和抗il-33抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，所述抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段為抗st2抗體或其抗原結合片段。在一些實施方案中，所述抗il-33/st2軸抗體或其抗原結合片段為抗il-33抗體或其抗原結合片段。
19、另一方面，本申請還提供了一種本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種細胞株，其中，所述細胞株為哺乳動物細胞，并且所述細胞株的基因組中整合有第一表達盒和第二表達盒，其中，所述第一表達盒表達外源的ST2基因，所述第二表達盒表達外源的受NF-κB調控的報告基因。
2.根據權利要求1所述的細胞株，其中，所述外源的ST2基因是人ST2基因或猴ST2基因。
3.根據權利要求1或2所述的細胞株，其中，所述報告基因為熒光素酶報告基因，任選地，所述報告基因的轉錄表達依賴NF-κB響應元件的激活。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的細胞株，其中，所述細胞株為HEK293細胞或其衍生細胞；優選地，所述細胞株為HEK293T細胞。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的細胞株，其中，所述細胞株的保藏編號為CCTCCNO:C202397。
6.一種細胞株，其中，所述細胞株的保藏編號為CCTCC?NO:C202397。
7.一種試劑盒，其包括權利要求1-6中任一項所述的細胞株。
8.權利要求1-6中任一項所述的細胞株用于檢測抗IL-33/ST2軸抗體或其抗原結合片段生物學活性的用途。
9.根據權利要求8所述的用途，其中，所述抗IL-33/ST2軸抗體或其抗原結合片段包括抗ST2抗體或其抗原結合片段和抗IL-33抗體或其抗原結合片段。
10.根據權利要求8或9所述的用途，其中，所述生物學活性包括結合活性和阻斷活性。
...【技術特征摘要】
1.一種細胞株，其中，所述細胞株為哺乳動物細胞，并且所述細胞株的基因組中整合有第一表達盒和第二表達盒，其中，所述第一表達盒表達外源的st2基因，所述第二表達盒表達外源的受nf-κb調控的報告基因。
2.根據權利要求1所述的細胞株，其中，所述外源的st2基因是人st2基因或猴st2基因。
3.根據權利要求1或2所述的細胞株，其中，所述報告基因為熒光素酶報告基因，任選地，所述報告基因的轉錄表達依賴nf-κb響應元件的激活。
4.根據權利要求1-3中任一項所述的細胞株，其中，所述細胞株為hek293細胞或其衍生細胞；優選地，所述細胞株為hek293t細胞。
5.根據權利要求1-...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王蘭，于傳飛，楊卜嘉，侯書婷，劉春雨，楊雅嵐，李盈淳，
申請(專利權)人：中國食品藥品檢定研究院，
類型：發明
國別省市：
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