【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體涉及特異性結合fgfr2b的抗體或其抗原結合片段、其制備方法和用途。
技術介紹
1、成纖維細胞生長因子受體(fgfr)是跨膜酪氨酸激酶受體，通過激活下游pi3k-akt和mapk-erk通路調節許多基本生物過程，包括胚胎發生、組織和干細胞維持、血管生成和傷口愈合(beenken?and?mohammadi,2009；katoh?and?katoh,2006；turner?and?grose,2010)。fgfr家族由4種受體(fgfr1至fgfr4)組成，對應22種配體(fgf)(korc?and?friesel,2009)。fgfr2信號傳導通路失調會導致基因擴增和蛋白質過表達，從而導致腫瘤發生和預后不良(grose?and?dickson,2005)。剪接變異產生幾種受體變體，包括2種主要的fgfr2同種型，稱為fgfr2b和fgfr2c(也稱為fgfr2iiib和fgfr2iiic)。每種同種型的表達通常僅限于特定組織。具體來說，fgfr2b的3個主要配體是fgf7、fgf10和fgf22，通常在上皮細胞中表達，而fgfr2c在間充質組織中表達(ornitz?et?al.,1996；zhang?et?al.,2006)。在fgfr2擴增的胃癌中，fgfr2b同種型占主導地位。
2、在之前的研究中，fgfr2b在2.5％-31.1％的胃食管腺癌(gea)中過表達，具體取決于所使用的抗體和檢測方法(ahn?et?al.,2016；angal?et?al.,1993；nagatsuma
3、為了開發一種具有低角膜毒性的新型抗fgfr2b抗體，以滿足尚未滿足的臨床需求，我們生成了針對fgfr2b的特異性抗體，其表現出顯著的腫瘤抑制能力，但fgf10抑制能力低，意味著低的臨床不良事件。
技術實現思路
1、在一個方面，本公開提供了特異性結合fgfr2b的抗體或其抗原結合片段，其包含：具有與seq?id?no：1至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈互補決定區1(cdr1)、具有與seqid?no：2至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈cdr2、以及具有與seq?id?no：3至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈cdr3。
2、在一些實施方案中，抗體或其抗原結合片段具有以下特性中的至少一種：
3、i)對fgf10與fgfr2b結合的抑制作用弱；
4、ii)檢測不到的對fgfr2c的結合親和力。
5、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含：具有氨基酸序列seq?idno：4的輕鏈cdr1；具有氨基酸序列seq?id?no：5的輕鏈cdr2；和具有氨基酸序列seq?id?no：6的輕鏈cdr3。
6、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含：由seq?id?no：1所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr1，由seq?id?no：2所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr2，由seq?id?no：3所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr3；和由seq?id?no：4所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr1，由seq?id?no：5所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr2，和由seq?id?no：6所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr3。
7、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含具有與seq?id?no:7至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈可變區；和具有與seq?id?no:8至少80％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區。
8、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含：由seq?id?no:7所示的氨基酸序列組成的重鏈可變區；和由seq?id?no:8所示的氨基酸序列組成的輕鏈可變區。
9、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含具有氨基酸序列seq?id?no:9的重鏈；和具有氨基酸序列seq?id?no:10的輕鏈。
10、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段包含免疫球蛋白恒定區，任選地人免疫球蛋白的恒定區，或任選地人igg的恒定區。在優選實施方案中，恒定區源自人igg1。
11、在一些實施方案中，本文提供的抗體或其抗原結合片段的恒定區包含一個或多個增強抗體依賴性細胞毒性(adcc)的修飾。
12、在一些實施方案中，本文提供的抗體或其抗原結合片段是無巖藻糖基化的。
13、在一些實施方案中，本文提供的抗體或其抗原結合片段是人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、fab片段、f(fab')2片段、scfv片段、fv片段、fab'片段或結構域抗體。
14、在一些實施方案中，本文提供的抗體或其抗原結合片段能夠抑制fgfr2磷酸化和fgf誘導的癌細胞增殖。
15、另一方面，本公開提供了與如上所述的抗體或其抗原結合片段競爭結合fgfr2b的抗體或其抗原結合片段。
16、在一些實施方案中，所述抗體或其抗原結合片段特異性結合fgfr2b上的相同表位，所述表位被包含分別具有seq?id?no：7和8所示的氨基酸序列的重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體或其抗原結合片段識別。
17、另一方面，本公開提供了編碼本文所提供的抗體或其抗原結合片段的核酸。
18、在一些實施方案中，所述核酸包括：具有核苷酸序列seq?id?no:11的重鏈編碼核酸；和/或具有核苷酸序列seq?id?no：12的輕鏈編碼核酸。
19、另一方面，本公開提供了包含本文提供的核酸的表達載體。
20、另一方面，本公開提供了包含本文提供的表達載體的宿主細胞。
21、另一方面，本公開提供了一種藥物組合物，其包含：
22、(a)本文提供的抗體或其抗原結合片段、本文提供的核酸、或本文提供的表達載體，和
23、(b)藥學上可接受的載體。
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【技術保護點】
1.一種特異性結合FGFR2b的抗體或其抗原結合片段，其包含：具有與SEQID?NO：1至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈互補決定區1(CDR1)、具有與SEQ?ID?NO：2至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈CDR2、和具有與SEQ?ID?NO：3至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈CDR3。
2.根據權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其具有以下特性中的至少一種：
3.根據權利要求1或2所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：具有氨基酸序列SEQ?IDNO：4的輕鏈CDR1；具有氨基酸序列SEQ?ID?NO：5的輕鏈CDR2；和具有氨基酸序列SEQ?ID?NO：6的輕鏈CDR3。
4.根據權利要求3所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：由SEQ?ID?NO：1所示的氨基酸序列組成的重鏈CDR1，由SEQ?ID?NO：2所示的氨基酸序列組成的重鏈CDR2，由SEQ?ID?NO：3所示的氨基酸序列組成的重鏈CDR3；和由SEQ?ID?NO：4所示的氨基酸序列組成的輕鏈CDR1，由SEQ?ID?NO：5所示的氨基酸序列組成的輕鏈CDR2，和由SEQ?I
5.根據權利要求1-4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含具有與SEQ?IDNO:7至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈可變區；和具有與SEQ?ID?NO:8至少80％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區。
6.根據權利要求5所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：由SEQ?ID?NO:7所示的氨基酸序列組成的重鏈可變區；和由SEQ?ID?NO:8所示的氨基酸序列組成的輕鏈可變區。
7.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含具有氨基酸序列SEQ?ID?NO:9的重鏈；和具有氨基酸序列SEQ?ID?NO:10的輕鏈。
8.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含免疫球蛋白恒定區，任選地人免疫球蛋白恒定區，或任選地人IgG、優選人IgG1的恒定區。
9.根據權利要求8所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述恒定區包含一個或多個增強抗體依賴性細胞毒性(ADCC)的修飾。
10.根據權利要求8所述的抗體或其抗原結合片段，其是無巖藻糖基化的。
11.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其是人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、Fab片段、F(Fab')2片段、scFv片段、Fv片段、Fab'片段或結構域抗體。
12.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其能夠抑制FGF誘導的FGFR2磷酸化和癌細胞增殖。
13.一種抗體或其抗原結合片段，其與前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段競爭結合FGFR2b。
14.根據權利要求13所述的抗體或其抗原結合片段，其特異性結合FGFR2b上的表位，所述表位與包含分別具有SEQ?ID?NO：7和8所示的氨基酸序列的重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體或其抗原結合片段所識別的表位相同。
15.一種核酸，其編碼前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
16.根據權利要求15所述的核酸，其包含：具有核苷酸序列SEQ?ID?NO:11的重鏈編碼核酸；和/或具有核苷酸序列SEQ?ID?NO：12的輕鏈編碼核酸。
17.一種表達載體，其包含權利要求15或16所述的核酸。
18.一種宿主細胞，其包含權利要求17所述的表達載體。
19.一種藥物組合物，其包含：
20.一種抗體-藥物綴合物，其包含與一個或多個綴合部分連接的權利要求1-14中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
21.一種產生根據權利要求1-14中任一項所述的抗體或其抗原結合片段的方法，所述方法包括在允許所述抗體或其抗原結合片段表達的條件下培養權利要求18所述的宿主細胞。
22.權利要求1-14中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、權利要求15或16所述的核酸、權利要求17所述的表達載體、權利要求18所述的宿主細胞、權利要求19所述的藥物組合物、或權利要求20所述的抗體-藥物綴合物在制備用于治療受試者中與FGFR2b異常表達相關的疾病或病癥的藥物中的用途。
23.一種抑制或減少受試者中FGF誘導的腫瘤細胞增殖的方法，所述方法包括向所述受試者施用治療有效量的權利要求1-14中任一項所述的抗體或其抗原結合片段、權利要求15或16所述的核酸、權利要求17所述的表達載體、權利要求18所述的宿主細胞、...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種特異性結合fgfr2b的抗體或其抗原結合片段，其包含：具有與seqid?no：1至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈互補決定區1(cdr1)、具有與seq?id?no：2至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈cdr2、和具有與seq?id?no：3至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈cdr3。
2.根據權利要求1所述的抗體或其抗原結合片段，其具有以下特性中的至少一種：
3.根據權利要求1或2所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：具有氨基酸序列seq?idno：4的輕鏈cdr1；具有氨基酸序列seq?id?no：5的輕鏈cdr2；和具有氨基酸序列seq?id?no：6的輕鏈cdr3。
4.根據權利要求3所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：由seq?id?no：1所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr1，由seq?id?no：2所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr2，由seq?id?no：3所示的氨基酸序列組成的重鏈cdr3；和由seq?id?no：4所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr1，由seq?id?no：5所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr2，和由seq?id?no：6所示的氨基酸序列組成的輕鏈cdr3。
5.根據權利要求1-4中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含具有與seq?idno:7至少80％同一性的氨基酸序列的重鏈可變區；和具有與seq?id?no:8至少80％同一性的氨基酸序列的輕鏈可變區。
6.根據權利要求5所述的抗體或其抗原結合片段，其包含：由seq?id?no:7所示的氨基酸序列組成的重鏈可變區；和由seq?id?no:8所示的氨基酸序列組成的輕鏈可變區。
7.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含具有氨基酸序列seq?id?no:9的重鏈；和具有氨基酸序列seq?id?no:10的輕鏈。
8.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其包含免疫球蛋白恒定區，任選地人免疫球蛋白恒定區，或任選地人igg、優選人igg1的恒定區。
9.根據權利要求8所述的抗體或其抗原結合片段，其中所述恒定區包含一個或多個增強抗體依賴性細胞毒性(adcc)的修飾。
10.根據權利要求8所述的抗體或其抗原結合片段，其是無巖藻糖基化的。
11.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其是人抗體、人源化抗體、嵌合抗體、單克隆抗體、多克隆抗體、重組抗體、雙抗體、三抗體、四抗體、fab片段、f(fab')2片段、scfv片段、fv片段、fab'片段或結構域抗體。
12.根據前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段，其能夠抑制fgf誘導的fgfr2磷酸化和癌細胞增殖。
13.一種抗體或其抗原結合片段，其與前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段競爭結合fgfr2b。
14.根據權利要求13所述的抗體或其抗原結合片段，其特異性結合fgfr2b上的表位，所述表位與包含分別具有seq?id?no：7和8所示的氨基酸序列的重鏈可變區和輕鏈可變區的抗體或其抗原結合片段所識別的表位相同。
15.一種核酸，其編碼前述權利要求中任一項所述的抗體或其抗原結合片段。
16.根據權利要求15所述的核酸，其包含：具有核苷酸序列seq?id?no:11的重鏈編碼核酸；和/或具有核苷酸序列seq?id?no：12的輕鏈編碼核酸。
17.一種表達載體，其包含權利要求15或16所述的核酸。
18.一種宿主細胞，其包含權利要求17所述的表達...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周添添，杜慶林，韓淑華，彭菲，楊雪艷，
申請(專利權)人：杭州中美華東制藥有限公司，
類型：發明
國別省市：
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