【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及生物，特別涉及一種基于鴿腺病毒hexon蛋白的診斷試劑盒及應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、鴿腺病毒(pigeon?adenovirus,piadv)是鴿嗉囔炎的主要病原，嚴(yán)重威脅鴿子的健康，尤其在賽鴿中流行后引起的損失更為嚴(yán)重。該病毒通過糞便、食物污染和直接接觸傳播。piadv感染后，鴿子會(huì)嘔吐、消化減弱、排綠色或白色水樣糞便，精神不振、羽毛雜亂、體重下降，嚴(yán)重時(shí)甚至引起急性死亡。piadv有多種類型，其中i群腺病毒(pigeon?adenovirustype?i,piadv-ⅰ)主要侵襲年幼的鴿子，而ii群腺病毒(pigeon?adenovirus?typeⅱ,piadv-ⅱ)則能感染不同年齡段的鴿子。目前，全球范圍內(nèi)尚缺乏準(zhǔn)確且快捷的方法來確認(rèn)病鴿所感染腺病毒的類型，這使得針對(duì)性治療變得更加困難，給養(yǎng)鴿業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。
2、hexon作為禽腺病毒的主要抗原蛋白，在病毒免疫和識(shí)別機(jī)制中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。其結(jié)構(gòu)復(fù)雜且獨(dú)特，由保守的p1區(qū)和p2區(qū)以及可變的loop1至loop4環(huán)共同構(gòu)成。這些區(qū)域不僅賦予了hexon獨(dú)特的形態(tài)，更使其能夠形成同源三聚體結(jié)構(gòu)，從而具備刺激機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體的能力。在hexon的結(jié)構(gòu)中，保守的p1和p2區(qū)位于病毒體內(nèi)，構(gòu)成了其穩(wěn)定的基座部分。而loop1、loop2、loop3和loop4四個(gè)高變環(huán)狀區(qū)域則形成了塔尖區(qū)，這些區(qū)域具有高度的可變性和復(fù)雜性，與基座部分共同構(gòu)成了hexon獨(dú)特的塔狀結(jié)構(gòu)。其中，loop1環(huán)區(qū)是hexon蛋白中最為獨(dú)特和重要的部分。它不僅序列可
3、本專利技術(shù)專利通過原核表達(dá)鴿腺病毒hexon蛋白，定量為1mg/ml的重組蛋白按照體積比1:1與佐劑充分混合乳化后免疫鴿子、新西蘭大白兔和balb/c小鼠，分別制備出針對(duì)hexon蛋白特異性的多克隆和單克隆抗體，并以此為材料進(jìn)一步開發(fā)了一種基于鴿腺病毒hexon蛋白的elisa診斷試劑盒。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足及填補(bǔ)市場(chǎng)上鴿腺病毒抗原診斷試劑的短缺，本專利技術(shù)的目的在于提供一種基于原核大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)制備的重組鴿腺病毒hexon蛋白；提供基于該重組蛋白的兔、鴿多克隆抗體和鼠單克隆抗體；進(jìn)一步提供基于上述材料開發(fā)的一種檢測(cè)鴿腺病毒抗原的elisa檢測(cè)試劑盒。
2、為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本專利技術(shù)是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。
3、本專利技術(shù)一方面公開了一種抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體，所述抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體為1h5-8-14-5，其中單克隆抗體1h5-8-14-5的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示。
4、再一方面，本專利技術(shù)還公開了一種檢測(cè)鴿腺病毒的雙抗體夾心elisa診斷試劑盒，所述試劑盒包括包被有抗hexon蛋白多克隆抗體的酶標(biāo)板、hexon蛋白、hrp標(biāo)記權(quán)利要求1所述的抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體、陰性對(duì)照、顯色液、洗滌液、終止液。
5、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述抗hexon蛋白多克隆抗體為兔抗hexon蛋白多克隆抗體，使用時(shí)將該多克隆抗體1:1000倍稀釋后包被于酶標(biāo)板。
6、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述hexon蛋白的氨基酸序列如seq?id?no.1所示。
7、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述密碼子優(yōu)化后的hexon蛋白的核苷酸序列如seq?id?no.2所示。
8、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述hexon蛋白的濃度為0.5μg/ml。
9、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述hrp標(biāo)記的抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體1:4000倍稀釋后使用。
10、優(yōu)選地，本專利技術(shù)所述陰性對(duì)照為pbst緩沖液。
11、再一方面，本專利技術(shù)還公開了所述的單克隆抗體1h5-8-14-5在制備鴿腺病毒或鴿腺病毒hexon蛋白檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
12、本專利技術(shù)制備的單克隆抗體1h5-8-14-5具有的特異性和敏感性，適用于鴿腺病毒或鴿腺病毒hexon蛋白的檢測(cè)。
13、本專利技術(shù)制備的鴿腺病毒的雙抗體夾心elisa診斷試劑盒具有良好的特異性和敏感性，適用于鴿腺病毒或鴿腺病毒hexon蛋白的檢測(cè)。
本文檔來自技高網(wǎng)...【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種抗鴿腺病毒Hexon蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述抗鴿腺病毒Hexon蛋白單克隆抗體為1H5-8-14-5，其中單克隆抗體1H5-8-14-5的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別如SEQ?ID?NO.3和SEQ?ID?NO.4所示。
2.一種檢測(cè)鴿腺病毒的雙抗體夾心ELISA診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括包被有抗Hexon蛋白多克隆抗體的酶標(biāo)板、Hexon蛋白、HRP標(biāo)記權(quán)利要求1所述的抗鴿腺病毒Hexon蛋白單克隆抗體、陰性對(duì)照、顯色液、洗滌液、終止液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述抗Hexon蛋白多克隆抗體為兔抗Hexon蛋白多克隆抗體，使用時(shí)將該多克隆抗體1:1000倍稀釋后包被于酶標(biāo)板。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述Hexon蛋白的氨基酸序列如SEQ?IDNO.1所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述密碼子優(yōu)化后的Hexon蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述Hexon蛋白的
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述HRP標(biāo)記權(quán)利要求1所述的抗鴿腺病毒Hexon蛋白單克隆抗體1:4000倍稀釋后使用。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性對(duì)照為PBST緩沖液。
9.一種如權(quán)利要求1所述的單克隆抗體1H5-8-14-5在制備鴿腺病毒或鴿腺病毒Hexon蛋白檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體為1h5-8-14-5，其中單克隆抗體1h5-8-14-5的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別如seq?id?no.3和seq?id?no.4所示。
2.一種檢測(cè)鴿腺病毒的雙抗體夾心elisa診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括包被有抗hexon蛋白多克隆抗體的酶標(biāo)板、hexon蛋白、hrp標(biāo)記權(quán)利要求1所述的抗鴿腺病毒hexon蛋白單克隆抗體、陰性對(duì)照、顯色液、洗滌液、終止液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，所述抗hexon蛋白多克隆抗體為兔抗hexon蛋白多克隆抗體，使用時(shí)將該多克隆抗體1:1000倍稀釋后包被于酶標(biāo)板。
4.根據(jù)...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：何玉龍，宋育聰，李香平，查銀河，舒建洪，王英博，馮華朋，潘頌佳，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江理工大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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