【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及基因工程，具體地，涉及一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白、重組質粒及應用。
技術介紹
1、禽致病性大腸桿菌(avian?pathogenic?escherichia?coli，apec)是一種腸外致病性大腸桿菌，可引起雞、火雞、鴨和許多其他禽類的各種局部和全身感染，導致氣囊炎、敗血癥、臍炎、輸卵管炎、腹膜炎及大腸桿菌肉芽腫等，是家禽死亡和發(fā)病的主要原因之一，嚴重危害養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展。apec血清型多而復雜，且各血清型之間缺乏有效的交叉免疫保護，這給apec的疫苗防治帶來一定困難。
2、新城疫(newcastle?disease，nd)是由新城疫病毒強毒株引起的以感染禽類為主的一種急性、高度接觸性傳染病?，F(xiàn)有的疫苗雖然降低了新城疫的發(fā)病率和死亡率，但是不能夠完全保護，免疫失敗和免疫帶毒現(xiàn)象長期存在。
3、由于國內外關于禽致病性大腸桿菌ompa-新城疫病毒f嵌合蛋白的研究未見報道，因此，提供一種能夠針對于上述兩種疾病實現(xiàn)聯(lián)動防控的嵌合蛋白是本專利技術亟需解決的問題。
技術實現(xiàn)思路
1、針對上述現(xiàn)有技術，本專利技術的目的在于將禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a和新城疫病毒f蛋白的編碼基因重組并誘導表達，獲得與禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a和新城疫病毒f蛋白相似的免疫原性的嵌合蛋白，實現(xiàn)具有識別禽致病性大腸桿菌和新城疫病毒的雙特異性，為開發(fā)apec和ndv新型雙聯(lián)疫苗提供了方向。
2、為了實現(xiàn)上述目的，本專利技術提供了一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒
3、優(yōu)選地，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的氨基酸序列如seq?idno:1所示。
4、本專利技術還提供了一種用于表達上述所述的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的重組質粒，所述重組質粒包括載體和目的基因，且所述目的基因包括禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a的編碼基因和新城疫病毒f蛋白的編碼基因。
5、優(yōu)選地，所述目的基因為在禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a膜外區(qū)的n端部分的第一編碼基因片段和禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a膜外區(qū)的c端的第二編碼基因片段之間嵌入新城疫病毒f蛋白最長膜外區(qū)的第三編碼基因片段獲得。
6、優(yōu)選地，所述第一編碼基因片段的長度為684bp；
7、和/或，所述第二編碼基因片段的長度為294bp；
8、和/或，所述第三編碼基因片段的長度為1089bp。
9、優(yōu)選地，所述目的基因的核苷酸序列如seq?id?no:2所示。
10、優(yōu)選地，所述重組質粒的構建過程中采用的引物包括如seq?id?no:3和seq?idno:4所示的第一引物對，如seq?id?no:5和seq?id?no:6所示的第二引物對，以及如seq?idno:7和seq?id?no:8所示的第三引物對；
11、和/或，所述重組質粒的構建過程中采用的原核表達載體為pgex-4t-1。
12、本專利技術還提供了一種根據上述所述的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白或根據上述所述的重組質粒表達的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的應用，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白應用于禽致病性大腸桿菌疫苗和/或新城疫病毒疫苗的制備。
13、優(yōu)選地，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白應用禽致病性大腸桿菌和新城疫病毒雙聯(lián)疫苗的制備。
14、本專利技術的技術方案至少具有如下優(yōu)點：
15、1、本專利技術利用原核表達系統(tǒng)成功制得了禽致病性大腸桿菌ompa-新城疫病毒f嵌合蛋白，該嵌合蛋白具有與天然禽致病性大腸桿菌ompa和新城疫病毒f蛋白相似的免疫原性，能夠與apec和ndv抗體特異性結合。該嵌合蛋白用于免疫時，能產生針對apec和ndv感染的雙重免疫保護效果，適用于開發(fā)apec和ndv新型雙聯(lián)疫苗。
16、2、本專利技術制得的以禽致病性大腸桿菌ompa-新城疫病毒f嵌合蛋白為抗原免疫動物得到的多克隆抗體，具有識別大腸桿菌ompa和新城疫病毒f蛋白的雙特異性。
17、3、本專利技術所述禽致病性大腸桿菌ompa-新城疫病毒f嵌合蛋白基于質粒的重組和誘導表達即可實現(xiàn)，其制備方法簡單，適于工業(yè)化大規(guī)模生產，能夠實現(xiàn)產品的標準化，利于不同實驗室之間的結果比較。
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1.一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白由禽致病性大腸桿菌外膜蛋白A的編碼基因和新城疫病毒F蛋白的編碼基因重組后，誘導表達獲得。
2.根據權利要求1所述的一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No:1所示。
3.一種用于表達權利要求1或2所述的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒包括載體和目的基因，且所述目的基因包括禽致病性大腸桿菌外膜蛋白A的編碼基因和新城疫病毒F蛋白的編碼基因。
4.根據權利要求3所述的一種重組質粒，其特征在于，所述目的基因為在禽致病性大腸桿菌外膜蛋白A膜外區(qū)的N端部分的第一編碼基因片段和禽致病性大腸桿菌外膜蛋白A膜外區(qū)的C端的第二編碼基因片段之間嵌入新城疫病毒F蛋白最長膜外區(qū)的第三編碼基因片段獲得。
5.根據權利要求4所述的一種重組質粒，其特征在于，所述第一編碼基因片段的長度為684bp；
6.根據權利要求5所述的一種重組質
7.根據權利要求3所述的一種重組質粒，其特征在于，所述重組質粒的構建過程中采用的引物包括如SEQ?ID?No:3和SEQ?ID?No:4所示的第一引物對，如SEQ?ID?No:5和SEQ?IDNo:6所示的第二引物對，以及如SEQ?IDNo:7和SEQ?ID?No:8所示的第三引物對；
8.一種根據權利要求1或2所述的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白或根據權利要求3-7所述的重組質粒表達的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的應用，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白應用于禽致病性大腸桿菌疫苗和/或新城疫病毒疫苗的制備。
9.根據權利要求8所述的一種應用，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白應用禽致病性大腸桿菌和新城疫病毒雙聯(lián)疫苗的制備。
...【技術特征摘要】
1.一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白由禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a的編碼基因和新城疫病毒f蛋白的編碼基因重組后，誘導表達獲得。
2.根據權利要求1所述的一種禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白，其特征在于，所述禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的氨基酸序列如seq?id?no:1所示。
3.一種用于表達權利要求1或2所述的禽致病性大腸桿菌-新城疫病毒嵌合蛋白的重組質粒，其特征在于，所述重組質粒包括載體和目的基因，且所述目的基因包括禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a的編碼基因和新城疫病毒f蛋白的編碼基因。
4.根據權利要求3所述的一種重組質粒，其特征在于，所述目的基因為在禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a膜外區(qū)的n端部分的第一編碼基因片段和禽致病性大腸桿菌外膜蛋白a膜外區(qū)的c端的第二編碼基因片段之間嵌入新城疫病毒f蛋白最長膜外區(qū)的第三編碼基因片段獲得。
5.根據權利要求4所述的一種重組質粒...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：袁橙，劉劍華，武彩紅，王永娟，劉莉，郭長明，張明，
申請(專利權)人：江蘇農牧科技職業(yè)學院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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