【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于抗原包被，具體涉及一種有效降低elisa酶免板吸附作用的封閉液。
技術介紹
1、酶免免疫吸附試驗（elisa）是免疫診斷學一項常用的技術，用于檢測液體標本中微量物質的測定方法。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體?(?聚苯乙烯微量反應板?)?表面，使酶標記的抗原抗體反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的?elisa?法有雙抗體夾心法和間接法，前者用于檢測大分子抗原，后者用于測定特異抗體。使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在測定時，把受檢標本（測定其中的抗體或抗原）和酶標抗原或抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質分開，最后結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質的量成一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化變為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據顏色反應的深淺刊物定性或定量分析。由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測定方法達到很高的敏感度。
2、用于包被固相載體的抗原按其來源不同可分為天然抗原、重組抗原和合成多肽抗原三大類。天然抗原可取自動物組織、微生物?培養物等，須經提取純化才能作包被用。包被抗原反應板是整個實驗最重要的組成部分，將抗原或抗體固定在過程稱為包被。換言之，包被即是抗原或抗體結合到固相載體表面的過程。蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基
3、目前常用的封閉液主要是edta、脫脂奶粉、明膠、酪蛋白、糖類組成。制備的抗原包被板密封存放在2-8℃環境內，使用前均先恢復室溫，延長包被板使用壽命。但常規封閉液和稀釋液對檢測aβ并沒有降低的效果，需要專利技術一種對aβ有效降低特異性吸附的的封閉液和稀釋。
4、β?淀粉樣蛋白（aβ?或?abeta）是?β-?和?γ-?分泌酶切割淀粉樣前體蛋白?(app)后形成的一系列蛋白肽，其被認為與阿爾茨海默癥的發病過程相關。大腦中出現?β-淀粉樣蛋白斑塊，即細胞外的蛋白質沉積物，是阿爾茨海默癥的一項主要標志。這些斑塊是由單體aβ?自發聚集成可溶性?aβ?低聚物形成的，后者聚集在一起會形成不溶性原纖維。多數aβ肽的長度為?40?個殘基?(aβ?1–40)，也有一小部分為?42?個殘基?(aβ?1–42)。由于?aβ?1-42?多出的兩個氨基酸導致錯誤折疊并聚集的可能性更大，所以一般認為?aβ?1-42?的有更強的神經毒性。有證據表明aβ?1-42?血漿水平的升高與阿爾茨海默癥相關。
5、elisa方法中封閉液的配方太多且對檢測的aβ?42沒有針對性，所以需要找到提高尿液中的aβ?42?提高靈敏度，降低非特異性結合的封閉液。抗體和蛋白質抗原一般采用ph9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液，也有用ph7.2的磷酸鹽緩沖液及ph7-8的tris-hcl緩沖液作為稀釋液的。通常在elisa板孔中加入包被液后，在4-8℃冰箱中放?置過夜，37℃中保溫2小時被認為具有同等的包被效果。封閉是繼包被之后用高濃度的無關蛋白質溶液再包被的過程。抗原或抗體包被時所用的濃度較低，吸收后固相載體表面尚有未被占據的空隙，封閉就是讓大量不相關的蛋白質充填這些空隙，從而排斥在elisa其后的步驟中干擾物質的再吸附。封閉的手續與包被相類似。最常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或?1%明膠作為封閉劑的。5%脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑，其最大的特點是價廉，可以高濃度使用。高質量的速溶食用低脂奶粉即可直接當作封閉劑使用，?但由于奶粉的成份復雜，而且封閉后的載體不易長期保存，因此在實驗中較少應用。
技術實現思路
1、本專利技術旨在克服現有技術的不足，提供一種有效降低elisa酶免板吸附作用的封閉液。
2、為了達到上述目的，本專利技術提供的技術方案為：
3、所述封閉液為含有2%牛血清白蛋白的磷酸鹽吐溫緩沖液，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中含有0.05%的吐溫-20，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中磷酸鹽的濃度為10mm；所述%為質量百分比含量。
4、優選地，磷酸鹽吐溫緩沖液中還含有0.018%磷酸二氫鈉、0.12%磷酸氫二鈉、0.818%氯化鈉；所述%為質量百分比含量。
5、優選地，磷酸鹽吐溫緩沖液的ph值為7.4。
6、優選地，所述封閉液中還含有5%海藻糖和0.5%pvp；所述%為質量百分比含量。
7、上述有效降低elisa酶免板吸附作用的封閉液可用于制備降低細胞表面fc段非特異性結合的試劑。
8、下面對本專利技術作進一步說明：
9、封閉液中的吐溫-20，其原理認為封閉液中的吐溫-20是一種非離子表面活性劑，由于聚山梨醇分子中有較多的親水性基團一聚氧乙烯基，故親水性強。封閉所有未結合位點而不替代靶蛋白、不結合靶蛋白的表位、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應。
10、封閉液中的bsa（牛血清白蛋白）是是酶的穩定劑，防止酶的分解和非特異性吸附，且最好現配現用,已經配好的溶液即使是在?-20℃?環境中保存，一段時間后也會造成結果偏高。bsa是一種球蛋白，分子量約為66.5kda，表面含有大量的氨基和羧基殘基，并且bsa的空間結構能夠隨著溫度、ph、鹽濃度發生變化，是一種柔性分子。作為常見的封閉蛋白，bsa能夠與親水表面、疏水表面，以及活化的共價結合表面，如活化羧基、氨基、環氧基、甲苯磺酰基等結合，抑制非特異性吸附，是一種理想的固相封閉劑。bsa表面含有大量的羧基本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，所述封閉液為含有2%牛血清白蛋白的磷酸鹽吐溫緩沖液，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中含有0.05%的吐溫-20，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中磷酸鹽的濃度為10mM；所述%為質量百分比含量。
2.如權利要求1所述有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，磷酸鹽吐溫緩沖液中還含有0.018%磷酸二氫鈉、0.12%磷酸氫二鈉、0.818%氯化鈉；所述%為質量百分比含量。
3.如權利要求2所述有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，磷酸鹽吐溫緩沖液的pH值為7.4。
4.如權利要求1至3任一項所述有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，所述封閉液中還含有5%海藻糖和0.5%PVP；所述%為質量百分比含量。
5.如權利要求1至3任一項所述有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液在制備降低細胞表面Fc段非特異性結合的試劑中的應用。
6.如權利要求4所述有效降低ELISA酶免板吸附作用的封閉液在制備降低細胞表面Fc段非特異性結合的試劑中的應用。>...
【技術特征摘要】
1.一種有效降低elisa酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，所述封閉液為含有2%牛血清白蛋白的磷酸鹽吐溫緩沖液，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中含有0.05%的吐溫-20，所述磷酸鹽吐溫緩沖液中磷酸鹽的濃度為10mm；所述%為質量百分比含量。
2.如權利要求1所述有效降低elisa酶免板吸附作用的封閉液，其特征在于，磷酸鹽吐溫緩沖液中還含有0.018%磷酸二氫鈉、0.12%磷酸氫二鈉、0.818%氯化鈉；所述%為質量百分比含量。
3.如權利要求2所述有效降低elisa酶免板...
【專利技術屬性】
技術研發人員：戴正乾，邱春蓮，危亞熵，楊淑媛，
申請(專利權)人：湖南乾康科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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