【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于多肽藥物和多肽疫苗領(lǐng)域，具體涉及靶向npm1c衍生新抗原的特異性tcr及其在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
1、急性髓細胞白血病(aml)是一類起源于髓樣前體細胞的高度異質(zhì)性和侵襲性惡性疾病，占成人白血病的70％。目前aml臨床治療效果整體較差，5年生存率35％-50％，老年患者更低至5％-10％。基因突變的不斷累積賦予白血病細胞極其復(fù)雜的生存能力，導(dǎo)致其持續(xù)克隆增殖，是aml預(yù)后差的關(guān)鍵。針對基因突變特異性清除白血病細胞克隆，促進免疫平衡，對延長aml患者無病生存期、降低復(fù)發(fā)率具有重要科學(xué)意義。
2、npm1酪氨酸激酶催化域突變(cytoplasmic?npm1?mutations,npm1c)是aml患者中最常見的基因突變，其導(dǎo)致的功能結(jié)構(gòu)異常被認為是aml發(fā)生發(fā)展的重要因素。研究發(fā)現(xiàn)，npm1+/–小鼠表現(xiàn)出基因組不穩(wěn)定并最終發(fā)展為以髓系異常為主的白血病。超過33％的aml患者初診時存在npm1c，復(fù)發(fā)患者體內(nèi)仍可監(jiān)測到持續(xù)性npm1c，與初診時npm1c序列高度重疊。提示靶向清除npm1c對延長aml患者生存期的重要性。然而，目前尚缺乏靶向npm1c的治療方式。
3、npm1c一般發(fā)生于12號外顯子，共有50余種亞型，其中最常見的是a型，即在956-969核苷酸中插入tctg堿基導(dǎo)致開放閱讀框移，使得野生型npm1的7個氨基酸序列(wqwrksl)突變?yōu)閚pm1c上11個不同的氨基酸序列(claveevslrk)。我們前期在aml患者外周血及骨髓浸潤淋巴細胞中檢測到npm1c特異性
4、t細胞免疫反應(yīng)的啟動依賴于tcr對抗原的識別。將抗原特異性tcr人工轉(zhuǎn)導(dǎo)至t細胞構(gòu)建的tcr-t細胞，靶向殺傷腫瘤細胞，改變機體免疫抑制狀態(tài)，誘導(dǎo)特異性免疫反應(yīng)。其中，靶標(biāo)的選擇是關(guān)鍵。新抗原由體細胞基因突變衍生，特異性表達于癌細胞，不引起中樞免疫耐受，具有免疫原性強、安全性好的優(yōu)勢，是免疫細胞治療的理想靶標(biāo)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，npm1c衍生的新抗原與人白細胞抗原h(huán)la-a*02:01結(jié)合，被其遞呈至白血病細胞表面形成phla復(fù)合物，并誘導(dǎo)特異性t細胞免疫反應(yīng)，提示npm1c衍生新抗原是基于t細胞的免疫治療的重要靶標(biāo)。
5、基于npm1c是aml免疫治療良好靶標(biāo)及tcr對新抗原的識別啟動特異性免疫反應(yīng)的事實，過繼性回輸靶向npm1c的tcr-t細胞是提升npm1c特異性t細胞數(shù)量的直接途徑。然而，天然tcr結(jié)構(gòu)的人工轉(zhuǎn)導(dǎo)，存在表達率低、錯配率高等限制。因此需要開發(fā)親和力增強的tcr突變體。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供了靶向npm1c衍生新抗原的特異性tcr及其在腫瘤免疫治療中的應(yīng)用。
2、根據(jù)本專利技術(shù)目的的第一方面，提供一種靶向npm1c衍生新抗原的特異性tcr，
3、所述npm1c衍生的新抗原(多肽序列：aiqdlcmav)，與hla-a*02:01分子結(jié)合并被遞呈至目標(biāo)靶細胞表面形成aiqdlcmav-hla-a*02:01復(fù)合物。
4、所述aiqdlcmav-hla-a*02:01復(fù)合物，被t細胞表面特異性tcr識別，誘導(dǎo)并啟動特異性免疫反應(yīng)。
5、所述tcr具有結(jié)合aiqdlcmav-hla-a*02:01復(fù)合物的特性，所述tcr包含tcrα鏈可變區(qū)和tcrβ鏈可變區(qū)；
6、所述tcrα鏈可變區(qū)的cdr3氨基酸序列為cataggyqgaqklvf(seq?id?no:7)。
7、和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)的氨基酸序列為casslmgqgtyeqyf(seq?id?no:10)。
8、優(yōu)選的，所述tcrα鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)氨基酸序列為：
9、αcdr1：seq?id?no:5；
10、αcdr2：seq?id?no:6；
11、αcdr3：seq?id?no:7。
12、優(yōu)選的，所述tcrβ鏈可變區(qū)的3個互補決定區(qū)氨基酸序列為：
13、βcdr1：seq?id?no:8；
14、βcdr2：seq?id?no:9；
15、βcdr3：seq?id?no:10。
16、優(yōu)選的，以上所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，所述tcrα鏈可變區(qū)的氨基酸序列為與seq?id?no:1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)為與seq?id?no:2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。
17、優(yōu)選的，所述tcr包含α鏈氨基酸序列seq?id?no:17。
18、優(yōu)選的，所述tcr包含β鏈氨基酸序列seq?id?no:18。
19、優(yōu)選的，所述tcr為αβ異源二聚體。
20、優(yōu)選的，所述tcr的α鏈與β鏈之間含有人工鏈間二硫鍵。
21、優(yōu)選的，所述tcr的氨基酸序列如seq?id?no:21所示。
22、本專利技術(shù)的第二方面。提供了一種核酸分子，所述核酸分子包含編碼本專利技術(shù)第一方面所述的tcr分子的核酸序列或其互補序列。
23、優(yōu)選的，所述核酸分子包含編碼tcrα鏈可變區(qū)的核苷酸序列seq?id?no:3。
24、優(yōu)選的，所述核酸分子包含編碼tcrβ鏈可變區(qū)的核苷酸序列seq?id?no:4。
25、優(yōu)選的，所述核酸分子包含編碼tcrα鏈的核苷酸序列seq?id?no:19。
26、優(yōu)選的，所述核酸分子包含編碼tcrβ鏈的核苷酸序列seq?id?no:20。
27、優(yōu)選的，所述核酸分子包含核苷酸序列seq?id?no:22。
28、本專利技術(shù)的第三方面，提供了一種載體，所述的載體含有本專利技術(shù)第二方面所述的核酸分子。
29、優(yōu)選的，所述的載體為病毒載體。
30、更優(yōu)選的，所述的病毒載體為慢病毒載體或逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。
31、本專利技術(shù)的第四方面，提供了一種分離的宿主細胞，所述的宿主細胞中含有本專利技術(shù)第三方面所述的載體或基因組中整合由外源的本專利技術(shù)第三方面所述的核酸分子。
32、本專利技術(shù)的第五方面，提供了一種細胞，所述細胞表達本專利技術(shù)第一方面所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr或其抗原結(jié)合片段，或攜帶本專利技術(shù)第二方面所述的多核苷酸，或含有本專利技術(shù)第三方面所述的載體。
33、優(yōu)選的，所述細胞為t細胞、外周血單個核細胞(pbmc)或干細胞本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
1.一種靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于，包括TCR能夠識別AIQDLCMAV-HLA-A*02:01復(fù)合物，所述TCR包含TCRα鏈可變區(qū)和/或TCRβ鏈可變區(qū)：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：所述TCRα鏈可變區(qū)還包括αCDR1和/或αCDR2互補決定區(qū)，其氨基酸序列為：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：所述TCRβ鏈可變區(qū)還包括_x0016_βCDR1和/或βCDR2互補決定區(qū)，其氨基酸序列為：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：所述TCRα鏈可變區(qū)的氨基酸序列為與SEQ?ID?NO:1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或所述TCRβ鏈可變區(qū)為與SEQ?ID?NO:2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：所述所述TCR包含α鏈氨基酸序列SEQ?ID?NO:17。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：TCR為αβ異源二聚體，α鏈與β鏈之間含有人工鏈間二硫鍵。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR，其特征在于：所述TCR的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:21所示。
9.一種核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含編碼權(quán)利要求1～8所述的TCR分子的核酸序列或其互補序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：包含編碼TCRα鏈可變區(qū)的核苷酸序列SEQ?ID?NO:3。
11.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含編碼TCRα鏈的核苷酸序列SEQ?ID?NO:19。
12.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含編碼TCRβ鏈可變區(qū)的核苷酸序列SEQ?ID?NO:4。
13.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含編碼TCRβ鏈的核苷酸序列SEQ?ID?NO:20。
14.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含核苷酸序列SEQ?IDNO:22。
15.一種載體，其特征在于：所述的載體含有權(quán)利要求9～14任一項所述的核酸分子。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的載體，其特征在于：所述載體為病毒載體。
17.一種分離的宿主細胞，其特征在于：所述的宿主細胞中含有權(quán)利要求15和16所述的載體或基因組中整合由外源的權(quán)利要求9～14任一項所述的核酸分子。
18.一種細胞，其特征在于：所述細胞表達權(quán)利要求1～8所述的靶向NPM1c衍生新抗原的TCR或其抗原結(jié)合片段，或攜帶權(quán)利要求9～14所述的多核苷酸，或含有權(quán)利要求15和16所述的載體。
19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的細胞，其特征在于：所述細胞為T細胞、外周血單個核細胞(PBMC)或干細胞。
20.一種用于治療腫瘤的藥物，所述藥物包含權(quán)利要求1～8所述的靶向NPM1c突變衍生新抗原的TCR或其抗原結(jié)合片段，或權(quán)利要求9～14的多核苷酸，或權(quán)利要求9～14的載體，或權(quán)利要求17所述的細胞，或權(quán)利要求18和19的細胞。
21.權(quán)利要求1～8中任一所述的TCR、或權(quán)利要求9～14的多核苷酸，或權(quán)利要求9～14的載體，或權(quán)利要求17所述的細胞，或權(quán)利要求18和19的細胞的用途，用于治療白血病的藥物中的應(yīng)用。
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于，包括tcr能夠識別aiqdlcmav-hla-a*02:01復(fù)合物，所述tcr包含tcrα鏈可變區(qū)和/或tcrβ鏈可變區(qū)：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述tcrα鏈可變區(qū)還包括αcdr1和/或αcdr2互補決定區(qū)，其氨基酸序列為：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述tcrβ鏈可變區(qū)還包括_x0016_βcdr1和/或βcdr2互補決定區(qū)，其氨基酸序列為：
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述tcrα鏈可變區(qū)的氨基酸序列為與seq?id?no:1具有至少90％序列相同性的氨基酸序列；和/或所述tcrβ鏈可變區(qū)為與seq?id?no:2具有至少90％序列相同性的氨基酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述所述tcr包含α鏈氨基酸序列seq?id?no:17。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述tcr包含β鏈氨基酸序列seq?id?no:18。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：tcr為αβ異源二聚體，α鏈與β鏈之間含有人工鏈間二硫鍵。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向npm1c衍生新抗原的tcr，其特征在于：所述tcr的氨基酸序列如seq?id?no:21所示。
9.一種核酸分子，其特征在于：所述核酸分子包含編碼權(quán)利要求1～8所述的tcr分子的核酸序列或其互補序列。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述核酸分子，其特征在于：包含編碼tcrα鏈可變區(qū)的核苷酸序列seq?id?no:3。...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：周煒均，王侃侃，喻瑾怡，
申請(專利權(quán))人：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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