【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及杏仁加工。具體地說是具有降壓和降血糖效果的多肽及其制備方法和應用。
技術介紹
1、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(angiotensin-i?convert?ing?enzyme，ace)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)中的關鍵酶，能夠催化血管緊張素i(angiotensin?i)轉(zhuǎn)化為血管緊張素i?i(angiotensin?i?i)，后者是一種強效的血管收縮劑，能顯著增加血壓。ace還參與降解緩激肽(bradykinin)，后者具有擴血管作用。因此，ace的活性直接影響血壓調(diào)節(jié)。抑制ace的活性是治療高血壓的重要途徑，ace抑制劑因此被廣泛應用于抗高血壓藥物的開發(fā)。
2、目前，市場上已存在多種ace抑制劑，如替普羅肽等，這些化合物在體外和體內(nèi)實驗中均表現(xiàn)出顯著的ace抑制活性，能夠有效降低血壓。此外，基于食源性肽的天然ace抑制劑因其較少的副作用和良好的生物相容性，受到了廣泛關注。研究表明，一些天然存在的多肽具有較強的ace抑制活性，可作為開發(fā)新型抗高血壓藥物的潛在候選物。
3、盡管現(xiàn)有的ace抑制劑如替普羅肽在降壓方面具有顯著效果，但針對同時具有降壓和降血糖雙重功效的多肽類藥物的研究尚顯不足。此外，現(xiàn)有技術中的多肽藥物可能存在制備工藝復雜、生產(chǎn)成本高、生物利用度低等問題，限制了其臨床應用。
技術實現(xiàn)思路
1、為此，本專利技術所要解決的技術問題在于提供具有降壓和降血糖效果的多肽及其制備方法和應用，所述多肽不僅能夠有效抑制ace活性，降低血壓，還能通過抑制dpp4的
2、為解決上述技術問題，本專利技術提供如下技術方案：
3、一種具有降血壓和降血糖效果的多肽，所述多肽的氨基酸序列如seq?id?no.1、或者seq?id?no.3、或者seq?id?no.4、或者seq?id?no.5、或者seq?id?no.6、或者seq?idno.8、或者seq?id?no.9、或者seq?id?no.10所示。
4、上述的多肽，氨基酸序列如seq?id?no.1所示的多肽和seq?id?no.8所示的多肽均為具有降血壓效果的多肽，氨基酸序列如seq?id?no.10所示的多肽為具有降血糖效果的多肽。
5、上述的多肽的應用，所述應用為將所述多肽中的任一種用于制造具有降血壓和/或降血糖功能的藥物。
6、上述的應用，所述應用為將氨基酸序列如seq?id?no.1或者seq?id?no.8所示的多肽用于制造具有降血壓功能的藥物，將氨基酸序列如seq?id?no.10所示的多肽用于制造具有降血糖功能的藥物。
7、多肽的制備方法，包括以下步驟：
8、s1、杏仁脫苦脫皮并破碎，然后進行亞臨界脫脂，得到脫脂杏仁粉；
9、s2、使用流動的水對脫脂杏仁粉進行除雜；
10、s3、將除雜后的脫脂杏仁粉進行堿溶，而后除去不溶物，對溶液進行酸沉，對酸沉得到的沉淀進行洗滌和干燥，得到杏仁蛋白粉；
11、s4、使用蛋白酶水解杏仁蛋白粉，得到杏仁蛋白水解物；
12、s5、對杏仁蛋白水解物進行純化和冷凍干燥，得到上述的多肽。
13、上述的制備方法，在步驟s1中，亞臨界脫脂時使用的溶劑為丁烷；在步驟s2中，除雜時，使用流動的水對脫脂杏仁粉進行超濾；超濾時使用的超濾膜為3kda超濾膜，超濾時的水溫為4～10℃，超濾時間為22～26小時。使用丁烷作為亞臨界脫脂溶劑可有效去除杏仁中的脂肪，保留蛋白質(zhì)，為后續(xù)的水解提供高效基質(zhì)。使用3kda超濾膜在4～10℃下超濾，有助于除去雜質(zhì)，保留目標蛋白質(zhì)，防止蛋白質(zhì)變性。
14、上述的制備方法，在步驟s3中，堿溶時，脫脂杏仁粉與堿溶反應體系的質(zhì)量/體積比為1g：(15～20)ml，堿溶反應體系的ph為8.8～9.5，堿溶時間為1～3小時；酸沉時使用的酸為鹽酸，鹽酸的濃度為8～12mo?l/l，酸沉反應體系的ph為3.3～4.7。堿溶的ph、反應時間和質(zhì)量/體積比影響蛋白質(zhì)的溶解度和結(jié)構，鹽酸的濃度和酸沉ph調(diào)控蛋白質(zhì)的沉淀效率和產(chǎn)物純度，影響最終多肽的純度。
15、上述的制備方法，在步驟s4中，使用木瓜蛋白酶對杏仁蛋白粉進行水解；水解反應體系中，杏仁蛋白粉的濃度為30～50mg/ml，木瓜蛋白酶的用量與杏仁蛋白粉的質(zhì)量之比為18000～20000u/g；水解反應體系的ph為6.5～7.2，水解反應的溫度為55～65℃，水解反應的時間為3～4小時。在利用蛋白酶水解蛋白質(zhì)制備多肽時，酶的種類、用量和水解條件對產(chǎn)物多肽序列有顯著影響。不同的酶的特異性一般不同，且酶用量影響也會影響蛋白質(zhì)的降解程度，較高濃度酶將加速酶解反應，并產(chǎn)生更短的肽。水解條件如ph、溫度和時間等會影響酶的活性。在上述條件下，使用木瓜蛋白酶水解杏仁蛋白粉，能夠制得具有降壓和降血糖效果的多肽。
16、上述的制備方法，水解反應體系中，杏仁蛋白粉的濃度為40mg/ml，木瓜蛋白酶的用量與杏仁蛋白粉的質(zhì)量之比為20000u/g；水解反應體系的ph為6.5，水解溫度為60℃，水解時間為220分鐘。
17、上述的制備方法，在步驟s5中，對杏仁蛋白水解物進行純化時，使用超濾除去杏仁蛋白水解物中分子量小于3kda的組分，而后對余留組分依次進行凝膠色譜純化和反向色譜分離純化。
18、本專利技術的技術方案取得了如下有益的技術效果：
19、1、本專利技術提供了同時具有降血壓和降血糖效果的多肽，并通過分子對接實驗測試了這些多肽與血管緊張素轉(zhuǎn)化酶ace和二肽基肽酶-ⅳdpp4的結(jié)合能力，實驗結(jié)果表明，這些多肽能夠與ace和dpp4的活性位點結(jié)合，這表明這些多肽能夠抑制ace和dpp4的活性，發(fā)揮降血壓和降血糖的功能。抑制率測試實驗進一步證明了，ylsf和wnprdpq能夠抑制ace和dpp4的活性，hlpl能夠抑制dpp4的活性，且結(jié)合能測試結(jié)果顯示，這三種多肽與ace和dpp4的結(jié)合均較為穩(wěn)定。
20、2、本專利技術提供的多肽能夠與ace、dpp4和其他的一些與調(diào)節(jié)血壓和調(diào)節(jié)血糖有關的酶發(fā)生相互作用，本專利技術為開發(fā)新型治療高血壓、糖尿病等疾病的藥物提供了新的策略，具有重要的臨床應用價值。
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1.一種具有降血壓和降血糖效果的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如SEQID?NO.1、或者SEQ?ID?NO.3、或者SEQ?ID?NO.4、或者SEQ?ID?NO.5、或者SEQ?ID?NO.6、或者SEQ?ID?NO.8、或者SEQ?ID?NO.9、或者SEQ?ID?NO.10所示。
2.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示的多肽和SEQ?ID?NO.8所示的多肽均為具有降血壓效果的多肽，氨基酸序列如SEQ?ID?NO.10所示的多肽為具有降血糖效果的多肽。
3.多肽的應用，其特征在于，所述應用為將權利要求1或2所述多肽中的任一種用于制造具有降血壓和/或降血糖功能的藥物。
4.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述應用為將氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1或者SEQ?ID?NO.8所示的多肽用于制造具有降血壓功能的藥物，將氨基酸序列如SEQ?IDNO.10所示的多肽用于制造具有降血糖功能的藥物。
5.多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權利要求5所述
7.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，在步驟S3中，堿溶時，脫脂杏仁粉與堿溶反應體系的質(zhì)量/體積比為1g：(15～20)mL，堿溶反應體系的pH為8.8～9.5，堿溶時間為1～3小時；酸沉時使用的酸為鹽酸，鹽酸的濃度為8～12mol/L，酸沉反應體系的pH為3.3～4.7。
8.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，在步驟S4中，使用木瓜蛋白酶對杏仁蛋白粉進行水解；水解反應體系中，杏仁蛋白粉的濃度為30～50mg/mL，木瓜蛋白酶的用量與杏仁蛋白粉的質(zhì)量之比為18000～20000U/g；水解反應體系的pH為6.5～7.2，水解反應的溫度為55～65℃，水解反應的時間為3～4小時。
9.根據(jù)權利要求8所述的制備方法，其特征在于，水解反應體系中，杏仁蛋白粉的濃度為40mg/mL，木瓜蛋白酶的用量與杏仁蛋白粉的質(zhì)量之比為20000U/g；水解反應體系的pH為6.5，水解溫度為60℃，水解時間為220分鐘。
10.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，在步驟S5中，對杏仁蛋白水解物進行純化時，使用超濾除去杏仁蛋白水解物中分子量小于3kDa的組分，而后對余留組分依次進行凝膠色譜純化和反向色譜分離純化。
...【技術特征摘要】
1.一種具有降血壓和降血糖效果的多肽，其特征在于，所述多肽的氨基酸序列如seqid?no.1、或者seq?id?no.3、或者seq?id?no.4、或者seq?id?no.5、或者seq?id?no.6、或者seq?id?no.8、或者seq?id?no.9、或者seq?id?no.10所示。
2.根據(jù)權利要求1所述的多肽，其特征在于，氨基酸序列如seq?id?no.1所示的多肽和seq?id?no.8所示的多肽均為具有降血壓效果的多肽，氨基酸序列如seq?id?no.10所示的多肽為具有降血糖效果的多肽。
3.多肽的應用，其特征在于，所述應用為將權利要求1或2所述多肽中的任一種用于制造具有降血壓和/或降血糖功能的藥物。
4.根據(jù)權利要求3所述的應用，其特征在于，所述應用為將氨基酸序列如seq?id?no.1或者seq?id?no.8所示的多肽用于制造具有降血壓功能的藥物，將氨基酸序列如seq?idno.10所示的多肽用于制造具有降血糖功能的藥物。
5.多肽的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
6.根據(jù)權利要求5所述的制備方法，其特征在于，在步驟s1中，亞臨界脫脂時使用的溶劑為丁烷；在步驟s2中，除雜時，使用流動的水對脫脂杏仁粉進行超濾；超濾時使用的超濾膜為3...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：朱緒春，劉紅芝，李鑫昕，王彥波，嚴超，周麟依，
申請(專利權)人：北京工商大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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