本發明專利技術公開了MAGI3基因在調控成肌細胞增殖和分化中的應用。本發明專利技術首次發現過表達MAGI3能夠顯著促進小鼠C2C12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化；敲低MAGI3的表達后能夠抑制小鼠C2C12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化。本發明專利技術揭示了MAGI3對小鼠C2C12細胞及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化具有重要調控作用，為今后進一步研究MAGI3基因在成肌細胞增殖和分化的作用機制及其家畜產肉性狀改良奠定基礎。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物學，具體地說，涉及magi3基因在調控成肌細胞增殖和分化中的應用。
技術介紹
1、骨骼肌又稱橫紋肌，由數以千計具有收縮能力的肌細胞群組成，并由結締組織所覆蓋和接合在一起，約占哺乳動物體重的40%，是機體主要的代謝活動場所，在機體能量代謝穩態調控中扮演著重要的角色。骨骼肌的形成主要依賴于細胞的分化與融合等復雜有序的過程。骨骼肌衛星細胞位于肌膜和基底膜之間，一般情況下，骨骼肌衛星細胞處于靜止狀態，當肌細胞受到損傷刺激或誘導時，衛星細胞才被激活，由單核的骨骼肌衛星細胞通過增殖分化形成多核的肌管細胞，進而形成新的肌纖維細胞。
2、成肌細胞增殖分化是影響畜禽生長發育和產肉量的關鍵因素之一，解析骨骼肌衛星細胞增殖分化作用及調控機制對于揭示影響肌肉生長發育的調控機制、提高畜禽的產肉性能及遺傳改良均有重要意義。
3、magi3（membrane?associated?guanylate?kinase,?ww?and?pdz?domaincontaining?3）是一種編碼蛋白的基因，屬于maguk家族，在細胞間連接處充當支架蛋白，從而調節各種細胞過程和信號傳導途徑。已有研究表明，在神經膠質瘤中，magi3的表達水平與腫瘤的抑制作用相關。此外，magi3基因在結直腸癌中的功能研究揭示magi3通過降解c-myc來調節結直腸癌的發生和發展。前期研究發現不同發育階段的綿羊骨骼肌組織中magi3差異表達，且目前magi3在小鼠c2c12細胞及綿羊骨骼肌衛星細胞增殖分化中的作用尚不明確，有待進一步研究。
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p>4、闡明magi3調控成肌細胞增殖和分化的作用，對于提高肉用家畜產肉性狀及品種改良等具有重要意義。因此，有必要進一步探究magi3調控成肌細胞增殖和分化作用。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供magi3基因在調控成肌細胞增殖和分化中的應用。
2、為了實現本專利技術目的，第一方面，本專利技術提供magi3基因或含有該基因的生物材料在調控成肌細胞增殖和分化中的應用。
3、其中，來自小鼠的magi3基因在ncbi中的gene?id為99470，來自綿羊的magi3基因在ncbi中的gene?id為101118910。
4、進一步地，所述調控為正調控。
5、具體地，過表達magi3基因以促進小鼠c2c12或綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化；抑制或敲低magi3基因以抑制小鼠c2c12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化。
6、進一步地，所述過表達的方式可選自以下1）~5），或任選的組合：
7、1）通過導入具有所述基因的質粒；
8、2）通過增加細胞染色體上所述基因的拷貝數；
9、3）通過改變細胞染色體上所述基因的啟動子序列；
10、4）通過將強啟動子與所述基因可操作地連接；
11、5）通過導入增強子。
12、所述質粒為真核表達載體，優選pcdna3.1（+）。
13、進一步地，所述抑制或敲低的方式可選自shrna、sirna、dsrna、mirna、cdna、反義rna/dna、低分子化合物、肽、抗體、crispr、talen、zfn基因編輯技術中的至少一種。
14、例如，用于抑制magi3基因表達的物質為干擾magi3基因表達的sirna。
15、優選地，對于小鼠magi3基因，編碼所述sirna的核苷酸序列為：
16、sirna-mmu-1：5′-gcaagtcatcagagataat-3′（seq?id?no:1）
17、sirna-mmu-2：5′-ccatcagaatgtgcagaat-3′（seq?id?no:2）
18、優選地，對于綿羊magi3基因，所述sirna的序列為：
19、sirna-oar-1：5′-ggacuacaucugucagcaa-3′（seq?id?no:3）
20、5′-uugcugacagauguagucc-3′（seq?id?no:4）
21、sirna-oar-2：5′-gcugauacugggucuucaa-3′（seq?id?no:5）
22、5′-uugaagacccaguaucagc-3′（seq?id?no:6）
23、第二方面，本專利技術提供一種用于抑制小鼠c2c12細胞增殖和分化的試劑，有效成分為sirna，編碼所述sirna的核苷酸序列為：
24、sirna-mmu-1：5′-gcaagtcatcagagataat-3′
25、sirna-mmu-2：5′-ccatcagaatgtgcagaat-3′
26、第三方面，本專利技術提供一種用于抑制綿羊骨骼肌衛星細胞增殖和分化的試劑，有效成分為sirna，所述sirna的序列為：
27、sirna-oar-1：5′-ggacuacaucugucagcaa-3′
28、5′-uugcugacagauguagucc-3′
29、sirna-oar-2：5′-gcugauacugggucuucaa-3′
30、5′-uugaagacccaguaucagc-3′
31、借由上述技術方案，本專利技術至少具有下列優點及有益效果：
32、本專利技術首次發現過表達magi3能夠顯著促進小鼠c2c12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化；敲低magi3的表達后能夠抑制小鼠c2c12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化。進而提出magi3蛋白或其編碼基因或含有其編碼基因的生物材料在調控小鼠c2c12細胞及綿羊骨骼肌衛星細胞增殖和分化中的應用。本專利技術揭示了magi3對小鼠c2c12細胞及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化具有重要調控作用，為今后進一步研究magi3基因在成肌細胞增殖和分化的作用機制及其家畜產肉性狀改良奠定基礎。
本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.MAGI3基因在調控成肌細胞增殖和分化中的應用；
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述調控為正調控。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，過表達MAGI3基因以促進小鼠C2C12或綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化；抑制或敲低MAGI3基因以抑制小鼠C2C12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述過表達的方式選自以下1）~5），或任選的組合：
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述質粒為真核表達載體，優選pcDNA3.1（+）。
6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述抑制或敲低的方式選自shRNA、siRNA、dsRNA、miRNA、cDNA、反義RNA/DNA、低分子化合物、肽、抗體、CRISPR、TALEN、ZFN基因編輯技術中的至少一種。
7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，對于小鼠MAGI3基因，編碼所述siRNA的核苷酸序列為：
8.用于抑制小鼠C2C12細胞增殖和分化的試劑，其特征在于，有效成分為siRNA，編碼所述siRNA的核苷酸序列為：
9.用于抑制綿羊骨骼肌衛星細胞增殖和分化的試劑，其特征在于，有效成分為siRNA，所述siRNA的序列為：
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【技術特征摘要】
1.magi3基因在調控成肌細胞增殖和分化中的應用；
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述調控為正調控。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，過表達magi3基因以促進小鼠c2c12或綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化；抑制或敲低magi3基因以抑制小鼠c2c12及綿羊骨骼肌衛星細胞的增殖和分化。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述過表達的方式選自以下1）~5），或任選的組合：
5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述質粒為真核表達載體，優選pcdna3.1（+）。
6.根據權利要...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙倩君，何思琦，陳倩，馬月輝，浦亞斌，
申請(專利權)人：中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：
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