【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于免疫層析，更具體地，本專利技術涉及基于免疫層析的蒜氨酸快速檢測方法。
技術介紹
1、蒜氨酸(s-烯丙基-l-半胱氨酸亞砜，alliin)是大蒜的標志性含硫氨基酸，占未受損大蒜中總含硫化合物的90％。國內外研究表明，蒜氨酸及其酶解產物(大蒜辣素)在心腦血管疾病預防和提高免疫力等方面都有一定功能。
2、目前，國內外蒜氨酸的檢測方法主要有hplc法及hplc/uplc-ms法，但hplc法需要復雜的樣品前處理過程，并且分析時長較長，通常需要1小時以上。
3、此外，hplc/uplc-ms法雖可縮短分析時間，但仍需要耗時約0.5小時以上。hplc/uplc-ms還具有操作復雜、儀器昂貴、檢測成本高等缺點，對操作人員的技術要求較高。
4、因此，本領域亟需開發一種操作簡單、節約成本、特異性強且檢測時間短的蒜氨酸檢測方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種快速檢測蒜氨酸的方法。
2、本專利技術的第一方面，提供了一種用于檢測蒜氨酸的免疫層析片，包括基底板以及位于基底板上的樣品墊、nc膜和吸水紙，所述nc膜上設置有檢測線t線和質控線c線；
3、其中，所述t線為共價連接蒜氨酸-載體蛋白，結構式為：
4、
5、其中，x為載體蛋白。
6、在另一優選例中，所述載體蛋白為血藍蛋白(klh)或牛血清蛋白(bsa)。
7、在另一優選例中，所述c線為羊抗兔igg抗體或兔抗鼠igg抗
8、在另一優選例中，所述c線為0.1-1mg/ml的羊抗兔igg，t線為0.1-1mg/ml的bsa-蒜氨酸。
9、在另一優選例中，所述nc膜為熒光膜。
10、本專利技術的第二方面，提供了一種用于檢測蒜氨酸的免疫探針，所述免疫探針為膠體金增強子-蒜氨酸抗體。
11、在另一優選例中，所述蒜氨酸抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區的互補決定區cdr(hcdr)和所述輕鏈可變區的互補決定區cdr(lcdr)為：
12、氨基酸序列如seq?id?no:3所示的hcdr1，
13、氨基酸序列如seq?id?no:4所示的hcdr2，
14、氨基酸序列如seq?id?no:5所示的hcdr3，
15、氨基酸序列如seq?id?no:10所示的lcdr1，
16、氨基酸序列如seq?id?no:11所示的lcdr2，和
17、氨基酸序列如seq?id?no:12所示的lcdr3。
18、在另一優選例中，所述抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區為：
19、氨基酸序列如seq?id?no:1所示的重鏈可變區，和氨基酸序列如seq?id?no:8所示的輕鏈可變區。
20、在另一優選例中，所述的重鏈可變區包括所述的三個互補決定區hcdr以及用于連接重鏈可變區hcdr的重鏈可變區的框架區；所述輕鏈可變區包括所述的三個輕鏈互補決定區lcdr以及用于連接輕鏈互補決定區lcdr的輕鏈可變區的框架區。
21、在另一優選例中，所述蒜氨酸抗體選自下組：fab片段、fab'片段、f(ab)'2片段、f(ab)'3片段、fv、單鏈fv抗體(“scfv”)、雙scfv、(scfv)2。
22、在另一優選例中，所述抗體的輕鏈還包括輕鏈恒定區。
23、在另一優選例中，所述的輕鏈恒定區為兔源的。
24、在另一優選例中，所述抗體的重鏈還包括重鏈恒定區。
25、在另一優選例中，所述的重鏈恒定區為兔源的。
26、在另一優選例中，所述的抗體為雙鏈抗體、或單鏈抗體。
27、在另一優選例中，所述的抗體為單克隆抗體。
28、在另一優選例中，所述膠體金增強子的顆粒大小為10-50nm，優選地，30-50nm。
29、在另一優選例中，所述膠體金增強子的顆粒大小為30nm。
30、在另一優選例中，所述免疫探針中，膠體金增強子與蒜氨酸抗體的質量比為1:5-1:10。
31、本專利技術的第三方面，提供了一種蒜氨酸檢測方法，包括步驟：
32、(a)提供本專利技術第一方面所述的免疫層析片；
33、(b)將待測樣品與本專利技術的第二方面所述的免疫探針進行混合，并將混合物上樣于所述免疫層析片的加樣區；和
34、(c)對所述免疫層析片的t線和c線進行觀測，從而獲得對所述樣品中是否含有蒜氨酸的檢測結果。
35、在另一優選例中，所述檢測結果包括定性結果、定量結果、或其組合。
36、在另一優選例中，所述的觀測包括：肉眼觀測、儀器觀測。
37、在另一優選例中，所述的儀器觀測包括：熒光免疫分析儀，例如干式熒光免疫分析儀。
38、在另一優選例中，所述方法是定性或定量方法。
39、在另一優選例中，所述方法的檢測時間為5-30分鐘。
40、在另一優選例中，所述方法的稀釋溶液為超純水或pbs溶液。
41、在另一優選例中，所述樣品包括：大蒜、大蒜相關藥品、保健食品及大健康產品(消毒產品、食品)、細胞、組織樣本。
42、本專利技術的第四方面，提供了一種快速檢測蒜氨酸的試劑盒，包括：
43、(a)一容器及容器含有內如本專利技術第一方面所述的免疫層析片；和
44、(b)一容器及容器內含有如本專利技術第二方面所述的免疫探針；或
45、(c)一容器及容器含有內如本專利技術第一方面所述的免疫層析片，其中，所述免疫層析片的點樣區含有如本專利技術第二方面所述的免疫探針。
46、應理解，在本專利技術范圍內中，本專利技術的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種用于檢測蒜氨酸的免疫層析片，其特征在于，包括基底板以及位于基底板上的樣品墊、NC膜和吸水紙，所述NC膜上設置有檢測線T線和質控線C線；
2.如權利要求1所述的免疫層析片，其特征在于，所述載體蛋白為血藍蛋白或牛血清蛋白。
3.一種用于檢測蒜氨酸的免疫探針，其特征在于，所述免疫探針為膠體金增強子-蒜氨酸抗體。
4.如權利要求3所述的免疫探針，其特征在于，所述蒜氨酸抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區的互補決定區CDR(HCDR)和所述輕鏈可變區的互補決定區CDR(LCDR)為：
5.如權利要求4所述的免疫探針，其特征在于，所述抗體的重鏈可變區和輕鏈可變區為：
6.如權利要求3所述的免疫探針，其特征在于，所述膠體金增強子的顆粒大小為10-50nm。
7.如權利要求3所述的免疫探針，其特征在于，所述免疫探針中，膠體金增強子與蒜氨酸抗體的質量比為1:5-1:10。
8.一種蒜氨酸檢測方法，其特征在于，包括步驟：
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述方法是定性或定量
10.一種檢測蒜氨酸的試劑盒，其特征在于，包括：
...【技術特征摘要】
1.一種用于檢測蒜氨酸的免疫層析片，其特征在于，包括基底板以及位于基底板上的樣品墊、nc膜和吸水紙，所述nc膜上設置有檢測線t線和質控線c線；
2.如權利要求1所述的免疫層析片，其特征在于，所述載體蛋白為血藍蛋白或牛血清蛋白。
3.一種用于檢測蒜氨酸的免疫探針，其特征在于，所述免疫探針為膠體金增強子-蒜氨酸抗體。
4.如權利要求3所述的免疫探針，其特征在于，所述蒜氨酸抗體包括重鏈可變區和輕鏈可變區，其中，所述重鏈可變區的互補決定區cdr(hcdr)和所述輕鏈可變區的互補決定區cdr(lcdr...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李新霞，李蘭蘭，宋百靈，張永威，李久彤，史榮梅，李紫月，杜娟，陸彥炎，
申請(專利權)人：新疆醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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