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【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及分子生物學,具體為一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法。
技術介紹
1、分子鑒定技術指利用生物體dna或rna水平上的多態性進行鑒定、遺傳分析和基因定位,廣義上指可遺傳并可檢測的dna序列或蛋白質,狹義上指反應生物個體或種群間差異的特異性dna片段,基于個體間遺傳物質內核苷酸序列變異,是dna水平遺傳多態性的直接反饋,主要類型包括基于southem雜交的分子標記、以重復序列為基礎的分子標記以及以pcr為基礎的分子標記等,傳統的ssr分型方法如凝膠電泳和毛細管電泳等,通量低且依賴于電泳圖譜的相似程度進行比較,耗時費力且準確性有限,隨著高通量測序技術的發展,ssr分子標記技術也實現了高通量和高進準的分型,為遺傳學研究提供了更高效的工具,高通量ssr分子標記技術基于擴增子測序技術,實現了在單堿基水平上的分型,且能同時對多個品種的數千個ssr點位進行準確分型,降低了分型成本和耗時,提高了分型準確性,該技術避免了傳統分型方法中的電泳圖譜比較,實現了任意兩個品種間的直接比較,極大提高了工作效率,同時其豐富的多態性和高信息量,使得在遺傳育種和基因定位等領域具有顯著優勢;
2、ssr引物的開發難度大,新的ssr引物的開發和合成需要較高的投入,技術難度大,現有ssr標記不足,目前可用的ssr標記數量有限,無法覆蓋所有的功能基因,一定程度上限制了ssr分子標記技術的應用范圍,ssr多態性檢測受限,ssr多態性的檢測核應用在很大程度上依賴于pcr擴增的效果,pcr擴增不理想會直接影響ssr標記的應用效果。
...【技術保護點】
1.一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述高通量SSR分子標記鑒定李雜交后代的方法包括:制備SSR引物體系、運行SSR-PCR擴增程序、進行瓊脂糖凝膠電泳和進行毛細管電泳,所述SSR引物體系包括:去離子水、dNTP、Buffer、F、R0、DNA模板和Taq酶,所述DNA模板的制備方法為:
2.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述DNA模板的制備方法還有:
3.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述對DNA進行提純的步驟為:
4.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述鑒定李雜交后代的方法為:
5.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述毛細管電泳檢測的方法為:
6.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述瓊脂糖凝膠電泳檢測為:
7.根據權利要求1所
8.根據權利要求5所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述甲酰胺通過抑制DNA分子二級結構的形成,使DNA在電泳過程中保持單鏈狀態,甲酰胺通過降低核酸分子間的相互作用,減少DNA和RNA在電泳過程中的構象變化。
9.根據權利要求1所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述SSR-PCR擴增程序為:94℃預變性5min,94℃變形30s,60℃復性45s,72℃延伸50s,為一個循環,共35個循環,最終在72℃延伸5min。
10.根據權利要求6所述的一種高通量SSR分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述瓊脂糖凝膠的濃度為2.0%。
...【技術特征摘要】
1.一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述高通量ssr分子標記鑒定李雜交后代的方法包括:制備ssr引物體系、運行ssr-pcr擴增程序、進行瓊脂糖凝膠電泳和進行毛細管電泳,所述ssr引物體系包括:去離子水、dntp、buffer、f、r0、dna模板和taq酶,所述dna模板的制備方法為:
2.根據權利要求1所述的一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述dna模板的制備方法還有:
3.根據權利要求1所述的一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述對dna進行提純的步驟為:
4.根據權利要求1所述的一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述鑒定李雜交后代的方法為:
5.根據權利要求1所述的一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述毛細管電泳檢測的方法為:
6.根據權利要求1所述的一種高通量ssr分子標記技術鑒定李雜交后代的方法,其特征在于:所述...
【專利技術屬性】
技術研發人員:方波,武崢,趙倩,陳元平,楊麗,李雪,
申請(專利權)人:重慶市農業科學院,
類型:發明
國別省市:
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