【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及aβ1-42檢測，具體為一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒及其制備方法。
技術介紹
1、阿爾茨海默病(alzheimer’s?disease，ad)也稱為老年癡呆癥，是發生在老年期或老年前期的一種慢性、持續性、退化性的腦變性疾病。阿爾茨海默病的病理特征主要包括大腦皮質和海馬區域的細胞外出現以β-淀粉樣蛋白(beta-amyloid,aβ)為核心的老年斑、細胞內神經原纖維纏結等病變。
2、aβ是由淀粉樣前體蛋白經β-和γ-分泌酶的蛋白水解作用而產生的含有39～43個氨基酸的多肽，aβ的大量沉積，是導致ad病人腦內老年斑周邊神經元變性和死亡的主要原因。aβ的種類分為aβ1-39、aβ1-40、aβ1-41、aβ1-42和aβ1-43。其中，aβ1-42的神經毒性作用在阿爾茨海默病ad的病程進展中發揮著主要作用，ad患者會產生大量的aβ1-42，而aβ1-42完整的c端可誘發細胞產生毒性，并且能夠破壞血腦屏障，使腦組織內的大分子物質進入血管。在對病因研究的分析中，aβ的神經毒性已得到公認，因此檢測血清中的aβ水平可用于輕度ad的輔助診斷。
3、目前，常用的aβ1-42檢測方法主要有酶聯免疫分析法和磁微粒化學發光免疫分析法。其中，利用酶聯免疫分析法進行aβ1-42含量測定時的檢測靈敏度低，檢測范圍窄，耗時長，受操作人員影響大。利用磁微粒化學發光免疫分析法進行aβ1-42含量測定時，大多使用生物素-親和素體系進行捕獲抗體與生物素包被，再與鏈霉親和素磁珠結合；由于人血清中aβ1-42含量
4、據此，目前急需一種可最大程度保持抗體的免疫活性，大大提高檢測靈敏度的用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒及其制備方法。
技術實現思路
1、本專利技術所要解決的技術問題在于提供一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒及其制備方法，其可避免采用現有磁微粒化學發光免疫分析方法時，因“抗體與生物素的偶聯過程”以及“標記抗體與標記物的偶聯過程”中抗體免疫活性受到破壞而帶來的檢測靈敏度低的技術問題。
2、本專利技術采用以下技術方案解決上述技術問題：
3、一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，所述試劑盒包括彼此獨立的r1試劑和r2試劑；
4、所述r1試劑包括：磁微粒包被的雞抗鼠igy抗體與aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體形成的r1復合物，r1緩沖液；
5、所述r2試劑包括：生物素-親和素復合物與aβ1-42鼠抗人igg檢測抗體形成的r2復合物，r2緩沖液；其中，所述生物素-親和素復合物由鏈霉親和素化的protein?a與生物素化的吖啶酯結合構成；
6、所述試劑盒采用雙抗體夾心法，將待檢臨床樣本與r1試劑和r2試劑進行孵育時，樣本中的待測物aβ1-42與r1復合物、r2復合物形成三明治夾心結構復合物，吖啶酯在激發液的作用下會發出特定波長的光，利用全自動化學發光免疫分析儀進行發光值的檢測，根據aβ1-42濃度-發光值的標準曲線，計算得到待檢臨床樣本中的待測物aβ1-42的含量。
7、優選的，所述r1試劑中，磁微粒的表面修飾有-cooh或-nh2或-sh官能團，磁微粒的粒徑為0.5μm～20μm，磁微粒與雞抗鼠igy抗體的質量比為1：(0.01-0.1)，磁微粒包被的雞抗鼠igy抗體與aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體的質量比為1：(0.02-0.1)；
8、優選的，磁微粒包被的雞抗鼠igy抗體與aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體的質量比為1：0.04。
9、優選的，所述r1試劑中，r1緩沖液為pbs緩沖液，且所述pbs緩沖液中添加(1-5)％-bsa、(0.5-2)％proclin300和(0.1-1)％tween-20。
10、優選的，所述r2試劑中，生物素-親和素復合物與aβ1-42鼠抗人igg檢測抗體的質量比為1：(0.2-0.8)。
11、優選的，所述r2試劑中，r2緩沖液為pbs緩沖液，且所述pbs緩沖液中添加(0.5-0.8)％bsa、(0.5～1.5)％蔗糖、(0.05-1)％proclin300和(0.01-0.1)％tween-20。
12、優選的，所述r1試劑中，aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體的終濃度為(0.5-1.2)μg/ml；
13、所述r2試劑中，aβ1-42鼠抗人igg檢測抗體的終濃度為(0.5-1.2)μg/ml。
14、優選的，所述試劑盒還包括aβ1-42校準品；
15、所述aβ1-42校準品為通過校準品緩沖液配制的不同濃度aβ1-42標準溶液，aβ1-42抗原終濃度分別為1500pg/ml、750pg/ml、150pg/ml、50pg/ml、10pg/ml、0pg/ml。
16、優選的，所述校準品緩沖液為小牛血清溶液，且所述小牛血清溶液中添加(0.05～0.2)％proclin300。
17、一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：
18、步驟一，將磁微粒與雞抗鼠igy抗體進行結合，制備得到磁微粒試劑半成品；
19、步驟二，將磁微粒試劑半成品與aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體進行結合，于溫度37℃下混勻，制成r1復合物，將r1復合物投入到r1緩沖液中，制備得到r1試劑；
20、步驟三，制備生物素-親和素復合物：將生物素化吖啶酯加入到鏈霉親和素化protein?a中，于溫度37℃下避光混勻，充分反應，過超濾管純化，取純化液，用1×pbs稀釋；
21、步驟四，將生物素-親和素復合物與aβ1-42鼠抗人igg檢測抗體進行結合，于溫度37℃下緩慢混勻，制成r2復合物，將r2復合物投入到r2緩沖液中，制備得到r2試劑；
22、步驟五，校準品制備：將aβ1-42抗原標準品采用校準品緩沖液分別配制為不同濃度的aβ1-42標準溶液。
23、一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟：
24、標準曲線的繪制：將r1試劑、r2試劑與aβ1-42校準品同時加入發光反應杯中，37℃充分反應，在磁場中進行固液分離并洗滌后，加入發光底物溶液，充分反應后，利用全自動化學發光免疫分析儀進行發光值的檢測，并繪制標準曲線，得到aβ1-42濃度-發光值的標準曲線；
25、樣品檢測：將r1試劑、r2試劑與樣品同時加入發光反應杯中，37℃充分反應，在磁場中進行固液分離并洗滌后，加入發光底物溶液，充分反應后，利用全自動化學發光免疫分析儀進行發光值的檢測，根據aβ1-42濃度-發光值的標準曲線，計算得到樣品中aβ1-42的含量。
26、與現有技術本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括彼此獨立的R1試劑和R2試劑；
2.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，磁微粒的表面修飾有-COOH或-NH2或-SH官能團，磁微粒的粒徑為0.5μm～20μm，磁微粒與雞抗鼠IgY抗體的質量比為1：(0.01-0.1)，磁微粒包被的雞抗鼠IgY抗體與Aβ1-42鼠抗人IgG捕獲抗體的質量比為1：(0.02-0.1)。
3.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，R1緩沖液為PBS緩沖液，且所述PBS緩沖液中添加(1-5)％BSA、(0.5-2)％Proclin300和(0.1-1)％TWEEN-20。
4.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述R2試劑中，生物素-親和素復合物與Aβ1-42鼠抗人IgG檢測抗體的質量比為1：(0.2-0.8)。
5.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁
6.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，Aβ1-42鼠抗人IgG捕獲抗體的終濃度為(0.5-1.2)μg/mL；
7.根據權利要求1所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括Aβ1-42校準品；
8.根據權利要求7所述的用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述校準品緩沖液為小牛血清溶液，且所述小牛血清溶液中添加(0.05～0.2)％Proclin300。
9.根據權利要求1-8任一項所述的一種用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
10.根據權利要求1-8任一項所述的一種用于Aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒的使用方法，其特征在于，包括以下步驟：
...【技術特征摘要】
1.一種用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括彼此獨立的r1試劑和r2試劑；
2.根據權利要求1所述的用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述r1試劑中，磁微粒的表面修飾有-cooh或-nh2或-sh官能團，磁微粒的粒徑為0.5μm～20μm，磁微粒與雞抗鼠igy抗體的質量比為1：(0.01-0.1)，磁微粒包被的雞抗鼠igy抗體與aβ1-42鼠抗人igg捕獲抗體的質量比為1：(0.02-0.1)。
3.根據權利要求1所述的用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述r1試劑中，r1緩沖液為pbs緩沖液，且所述pbs緩沖液中添加(1-5)％bsa、(0.5-2)％proclin300和(0.1-1)％tween-20。
4.根據權利要求1所述的用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試劑盒，其特征在于，所述r2試劑中，生物素-親和素復合物與aβ1-42鼠抗人igg檢測抗體的質量比為1：(0.2-0.8)。
5.根據權利要求1所述的用于aβ1-42的新型磁微粒化學發光檢測試...
【專利技術屬性】
技術研發人員：寧吉英，朱雨，張甲波，徐運，張金東，
申請(專利權)人：安徽伊普諾康生物技術股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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