【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本申請涉及抗焦谷氨酸淀粉樣蛋白-β/抗轉鐵蛋白受體(tfr)抗體、抗體綴合物、編碼抗體的核酸和表達載體、含有表達載體的重組細胞以及包含抗體的組合物。還提供了制備抗體的方法、使用抗體治療包括神經系統障礙(例如，淀粉樣蛋白相關障礙)的病癥的方法，以及使用抗體診斷神經系統障礙的方法。
技術介紹
1、阿爾茨海默病(ad)是退行性腦障礙，其特征在于漸進性的記憶、認知、推理、判斷和情感穩定性的喪失，該喪失逐漸導致極度精神衰退和最終的死亡。阿爾茨海默病是老年人漸進式心智衰退(失智癥)的常見原因。阿爾茨海默病在世界范圍內都已發現，并且代表了主要的公共健康問題。據估計僅在美國該疾病當前影響超過約五百萬人。目前它是不可治愈的，并且任何治療均不有效地預防ad或逆轉其癥狀或過程。
2、患有ad的個體的腦顯示出稱作淀粉樣蛋白斑、淀粉樣蛋白血管病(淀粉樣蛋白在血管中沉積)和神經原纖維纏結的特征性病變。一般在腦的對于記憶和認知功能重要的幾個區域中發現大量的這些病變，特別是淀粉樣斑塊和神經元纖維纏結。淀粉樣斑塊和淀粉樣血管病也表征患有三體型21(唐氏綜合征)、彌漫性路易體疾病和遺傳性腦出血伴荷蘭型淀粉樣變性(hchwa-d)的個體的腦。
3、淀粉樣蛋白斑的主要組分是多種淀粉樣蛋白-β(aβ)肽，它們由β-淀粉樣蛋白前體蛋白質(app)的切割產生。假設aβ肽在腦中的沉積是導致ad的疾病級聯中的早期且必要的步驟。淀粉樣蛋白前體蛋白和早老蛋白基因中鑒定出導致改變的aβ產生并導致家族早期起始ad的突變提供了改變的淀粉樣蛋白代謝是構成該疾病基礎的
4、在第三個殘基上具有焦谷氨酸的淀粉樣蛋白-β肽(3pe?aβ)是沉積在ad患者腦中的主要物質。3pe?aβ存在于ad中的幾乎所有彌散性和成熟斑塊中，是代謝穩定的并且可在斑塊接種(seeding)和穩定兩者中起作用(cynis等人，molecular?neurodegeneration,2016；11:48)。尚未報道csf或血漿中3pe?aβ的可檢測量，因此表明靶肽是病理特異性的(demattos等人，neuron,2012；76:1-13)。選擇性地結合到3pe?aβ的抗體可用于免疫療法。
5、雖然血腦屏障(bbb)阻止有害物質進入腦并且對于腦穩態是必需的，但是它對于將藥物有效地遞送到腦構成難以克服的障礙。大分子諸如單克隆抗體和其他生物治療劑對于治療/檢測中樞神經系統(cns)中的病理具有巨大的治療/診斷潛力。然而，它們進入腦中的途徑被bbb阻止。先前的研究已表明，僅非常小百分比(約0.1％)的注射在血流中的igg能夠穿透bbb進入cns區室中(felgenhauer,klin.wschr.52:1158-1164,1974)。由于該抗體在cns內的低濃度，這將限制任何藥理作用。
6、已經研究了許多方法來改善治療性單克隆抗體(mab)的腦遞送，包括使用受體介導的轉胞吞作用(rmt)。rmt利用bbb的腔側上大量表達的受體轉運通過腦內皮細胞。先前建立用于將治療性mab遞送到腦中的臨床可行平臺的嘗試一直專注于抗體工程以提高轉胞吞作用的效率，并且通過觀察結合效價、ph依賴性和親和力取得了進展(綜述于goulatis等人，2017,curr?opin?struct?biol?45:109-115)。然而，轉移到nhp和臨床中則受到來自靶標介導的藥物處置(tmdd)的快速外周清除和來自急性網織紅細胞耗竭的安全性的限制(gadkar，2016,eur?j?pharm?biopharm.2016年4月；101:53-61)。轉鐵蛋白受體(tfr)，特別是tfr1介導載鐵的轉鐵蛋白(tf)從血液轉運到腦和缺鐵的tf返回到血液(kawabata,freeradical?biology&medicine,133,46-54,2019)?？箃fr1單克隆抗體已經用于將藥物遞送到腦(burkhart等人，progress?in?neurobiology,181,101665,2019)。然而，抗tfr1單克隆抗體的安全性傾向和不良藥代動力學(pk)阻礙了它們作為bbb載劑的臨床開發。
7、因此，需要一種可用于穿過bbb并靶向3pe?aβ以進行免疫治療的抗焦谷氨酸淀粉樣蛋白-β/抗tfr抗體或其抗原結合片段。
技術實現思路
1、如所體現和全面描述的，本專利技術涉及結合到在第三個殘基上具有焦谷氨酸的淀粉樣蛋白-β(3pe?aβ)并結合到轉鐵蛋白受體(tfr)的多特異性抗體及其抗原結合片段，產生結合到3pe?aβ和tfr的多特異性抗體或其抗原結合片段的方法，使用此類多特異性抗體或其抗原結合片段的測定方法，以及本專利技術的多特異性抗體或其抗原結合片段在制造用于治療神經系統障礙諸如阿爾茨海默病和其他β-淀粉樣蛋白相關疾病、延遲其發作或逆轉其至少一種病理或癥狀的藥物方面的用途。
2、在一個總的方面，本申請涉及一種多特異性抗體或其抗原結合片段，該多特異性抗體或其抗原結合片段包含至少一個能夠特異性結合到焦谷氨酸淀粉樣蛋白-β的第一抗原結合區和能夠特異性結合到轉鐵蛋白受體(tfr)的第二抗原結合區。在某些實施方案中，(a)第一抗原結合區包含(i)第一重鏈可變區(vh1)，該vh1包含重鏈互補決定區1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3，它們分別包含seq?id?no:8或16、9或17和10的氨基酸序列；和(ii)第一輕鏈可變區(vl1)，該vl1包含輕鏈互補決定區1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3，它們分別包含seq?idno:11、12和13的氨基酸序列；并且(b)第二抗原結合區包含(i)第二重鏈可變區(vh2)，該vh2包含重鏈互補決定區1(hcdr1)、hcdr2和hcdr3，它們分別包含seq?id?no:1、2和3的氨基酸序列；和(ii)第二輕鏈可變區(vl2)，該vl2包含輕鏈互補決定區1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3，它們分別包含seq?id?no:4、5和6的氨基酸序列。
3、在某些實施方案中，vh1包含與seq?id?no:14具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且vl1包含與seq?id?no:15具有至少90％同一性的氨基酸序列。在某些實施方案中，vh1包含seq?id?no:14的氨基酸序列；并且vl1包含seq?id?no:15的氨基酸序列。
4、在某些實施方案中，第二抗原結合區包含含有vh2和vl2的單鏈片段可變(scfv)抗體或其抗原結合片段。scfv可例如包含與seq?id?no:7具有至少90％同一性的氨基酸序列。在某些實施方案中，scfv包含seq?id?no:7的氨基酸序列。
5、在某些實施方案中，多特異性抗體或其抗原結合片段包含兩個第一抗原結合區。多特異性抗體或其抗原結合片段可例如包含(i)第一重鏈(hc1)，該hc1包含vh1、包含第一fc區(fc1)的第一重鏈恒定區、和scfv；(ii)第二重鏈(hc2)，該hc2包含vh1和包含第二本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種多特異性抗體或其抗原結合片段，所述多特異性抗體或其抗原結合片段包含至少一個能夠特異性結合到焦谷氨酸淀粉樣蛋白-β的第一抗原結合區和能夠特異性結合到轉鐵蛋白受體(TfR)的第二抗原結合區，其中：
2.根據權利要求1所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述VH1包含與SEQ?IDNO:14具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且
3.根據權利要求1所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述VH1包含SEQ?IDNO:14的氨基酸序列；并且所述VL1包含SEQ?ID?NO:15的氨基酸序列。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述第二抗原結合區包含含有所述VH2和所述VL2的單鏈片段可變(scFv)抗體或其抗原結合片段。
5.根據權利要求4所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scFv包含與SEQID?NO:7具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.根據權利要求5所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scFv包含SEQ?IDNO:7的氨基酸序列。
7.根據
8.根據權利要求7所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，所述多特異性抗體或其抗原結合片段包含：
9.根據權利要求8所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scFv經由接頭，更具體地經由包含SEQ?ID?NO:27的氨基酸序列的接頭連接到所述第一重鏈恒定區的羧基末端。
10.根據權利要求8或9所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中與野生型Fc區相比，所述Fc1和所述Fc2各自包含一個或多個異二聚體突變，諸如分別為第一經修飾的異二聚體CH3結構域和第二經修飾的異二聚體CH3結構域；具體地，所述Fc1包含位置T350、L351、F405和Y407處的氨基酸修飾，并且所述Fc2包含位置T350、T366、K392和T394處的氨基酸修飾，其中位置T350處的所述氨基酸修飾是T350V、T350I、T350L或T350M；位置L351處的所述氨基酸修飾是L351Y；位置F405處的所述氨基酸修飾是F405A、F405V、F405T或F405S；位置Y407處的所述氨基酸修飾是Y407V、Y407A或Y407I；位置T366處的所述氨基酸修飾是T366L、T366I、T366V或T366M，位置K392處的所述氨基酸修飾是K392F、K392L或K392M，并且位置T394處的所述氨基酸修飾是T394W，并且其中根據如Kabat中所述的EU索引進行氨基酸殘基的編號，更具體地，所述Fc1包含氨基酸修飾T350V、L351Y、F405A和Y407V，并且所述Fc2包含氨基酸修飾T350V、T366L、K392L和T394W。
11.根據權利要求8或9所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中與野生型Fc區相比，所述Fc1和所述Fc2各自包含一個或多個異二聚體突變，諸如分別為第一經修飾的異二聚體CH3結構域和第二經修飾的異二聚體CH3結構域，其中所述Fc1包含位置T364、L366和Y406處的氨基酸修飾，并且所述Fc2包含位置T365處的氨基酸修飾，其中位置T364處的所述氨基酸修飾是T364S；位置L366處的所述氨基酸修飾是L366A；位置Y406處的所述氨基酸修飾是Y406V；位置T365處的所述氨基酸修飾是T365W，并且其中根據如Kabat中所述的EU索引進行氨基酸殘基的編號，更具體地，所述Fc1包含氨基酸修飾T364S、L366A和Y406V，并且所述Fc2包含氨基酸修飾T365W。
12.根據權利要求8至11中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述Fc1和所述Fc2中的至少一者包含增強所述多特異性抗體或其抗原結合片段與新生兒Fc受體(FcRn)的結合的一個或多個突變，優選地，所述一個或多個突變增強在酸性pH下的所述結合，更優選地，所述Fc1和所述Fc2中的所述至少一者具有M252Y/S254T/T256E(YTE)突變，其中根據如Kabat中所述的EU索引進行氨基酸殘基的編號。
13.根據權利要求8至12中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述Fc1和所述Fc2中的至少一者包含減少或消除效應子功能的一個或多個突變，優選地所述Fc1和所述Fc2中的所述至少一者在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331和P329處具有一個或多個氨基酸修飾，諸如L234A、L235A和P331S中的一個、兩個或三個...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種多特異性抗體或其抗原結合片段，所述多特異性抗體或其抗原結合片段包含至少一個能夠特異性結合到焦谷氨酸淀粉樣蛋白-β的第一抗原結合區和能夠特異性結合到轉鐵蛋白受體(tfr)的第二抗原結合區，其中：
2.根據權利要求1所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述vh1包含與seq?idno:14具有至少90％同一性的氨基酸序列；并且
3.根據權利要求1所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述vh1包含seq?idno:14的氨基酸序列；并且所述vl1包含seq?id?no:15的氨基酸序列。
4.根據權利要求1至3中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述第二抗原結合區包含含有所述vh2和所述vl2的單鏈片段可變(scfv)抗體或其抗原結合片段。
5.根據權利要求4所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scfv包含與seqid?no:7具有至少90％同一性的氨基酸序列。
6.根據權利要求5所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scfv包含seq?idno:7的氨基酸序列。
7.根據權利要求1至6中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述多特異性抗體或其抗原結合片段包含兩個第一抗原結合區。
8.根據權利要求7所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，所述多特異性抗體或其抗原結合片段包含：
9.根據權利要求8所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述scfv經由接頭，更具體地經由包含seq?id?no:27的氨基酸序列的接頭連接到所述第一重鏈恒定區的羧基末端。
10.根據權利要求8或9所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中與野生型fc區相比，所述fc1和所述fc2各自包含一個或多個異二聚體突變，諸如分別為第一經修飾的異二聚體ch3結構域和第二經修飾的異二聚體ch3結構域；具體地，所述fc1包含位置t350、l351、f405和y407處的氨基酸修飾，并且所述fc2包含位置t350、t366、k392和t394處的氨基酸修飾，其中位置t350處的所述氨基酸修飾是t350v、t350i、t350l或t350m；位置l351處的所述氨基酸修飾是l351y；位置f405處的所述氨基酸修飾是f405a、f405v、f405t或f405s；位置y407處的所述氨基酸修飾是y407v、y407a或y407i；位置t366處的所述氨基酸修飾是t366l、t366i、t366v或t366m，位置k392處的所述氨基酸修飾是k392f、k392l或k392m，并且位置t394處的所述氨基酸修飾是t394w，并且其中根據如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號，更具體地，所述fc1包含氨基酸修飾t350v、l351y、f405a和y407v，并且所述fc2包含氨基酸修飾t350v、t366l、k392l和t394w。
11.根據權利要求8或9所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中與野生型fc區相比，所述fc1和所述fc2各自包含一個或多個異二聚體突變，諸如分別為第一經修飾的異二聚體ch3結構域和第二經修飾的異二聚體ch3結構域，其中所述fc1包含位置t364、l366和y406處的氨基酸修飾，并且所述fc2包含位置t365處的氨基酸修飾，其中位置t364處的所述氨基酸修飾是t364s；位置l366處的所述氨基酸修飾是l366a；位置y406處的所述氨基酸修飾是y406v；位置t365處的所述氨基酸修飾是t365w，并且其中根據如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號，更具體地，所述fc1包含氨基酸修飾t364s、l366a和y406v，并且所述fc2包含氨基酸修飾t365w。
12.根據權利要求8至11中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述fc1和所述fc2中的至少一者包含增強所述多特異性抗體或其抗原結合片段與新生兒fc受體(fcrn)的結合的一個或多個突變，優選地，所述一個或多個突變增強在酸性ph下的所述結合，更優選地，所述fc1和所述fc2中的所述至少一者具有m252y/s254t/t256e(yte)突變，其中根據如kabat中所述的eu索引進行氨基酸殘基的編號。
13.根據權利要求8至12中任一項所述的多特異性抗體或其抗原結合片段，其中所述fc1和所述fc2中的至少一者包含減少或消除效應子功能的一個或多個突變，優選地所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：S·辛格，楊丹青，B·達斯格普塔，R·南俊達，A·茲沃拉克，W·愛德華茲，B·德爾羅薩里奧，T·凱利，
申請(專利權)人：詹森藥業有限公司，
類型：發明
國別省市：
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