【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學領域，具體涉及一種能夠識別柯薩奇病毒a組6型（coxsackievirus?a6，cv-a6）的中和單克隆抗體10g8及其應用。
技術介紹
1、引起手足口病的病毒屬于小核糖核酸病毒科（picornavirus）腸道病毒屬（enteroviruse），為單股正鏈rna病毒，包括柯薩奇病毒a組的2、4、5、6、7、9、10、16型等，b組的1、2、3、4、5、6、13型等，腸道病毒71型（human?enterovirus?71,ev-a71），埃可病毒（echoviruses）等。早期研究發現ev-a71是手足口病（hand?foot?and?mouth?disease，hfmd）的主要致病原,?近年來hfmd腸道病毒病原譜發生了改變，近幾年的流行病學資料顯示，cv-a6引起的hfmd病例正逐年持續升高，已成為引起hfmd暴發的主要病原體。
2、中和抗體更能反應病毒的抗原性、免疫原性和功能，因此，開發靶向識別cv-a6結構蛋白的中和單克隆抗體對疫苗研發的質控、臨床樣本的檢測和實驗室病毒鑒別具有重要意義。
技術實現思路
1、鑒于此，本專利技術通過將純化的滅活cv-a6原液免疫小鼠，然后進行脾臟淋巴細胞和骨髓瘤細胞的融合，并篩選獲得雜交瘤細胞10g8，進一步獲得單克隆抗體10g8。該單克隆抗體與10g8現有的cv-a6單克隆抗體不同，結合不同的中和位點，其能夠識別cv-a6且具有中和活性，可用于cv-a6病毒定量，且反應病毒的含量和功能，對疫苗研發的質
2、本專利技術目的之一在于提供一種識別cv-a6的中和單克隆抗體10g8，所述中和單克隆抗體10g8的六個cdr區具體如下：
3、（1）重鏈cdr1的氨基序列如seq?id?no.1所示：gftlknya；
4、（2）重鏈cdr2的氨基序列如seq?id?no.2所示：vssggst；
5、（3）重鏈cdr3的氨基序列如seq?id?no.3所示：ereeggyaeawfay；
6、（4）輕鏈cdr1的氨基序列如seq?id?no.4所示：qsivqsngnty；
7、（5）輕鏈cdr2的氨基序列為seq?id?no.5所示：evs；
8、（6）輕鏈cdr3的氨基序列為seq?id?no.6所示：fqgshvpft。
9、進一步的，所述單克隆抗體10g8的重鏈可變區全長氨基酸如seq?id?no.7所示，或與seq?id?no.7所示氨基酸序列有95％以上同源性的氨基酸序列；
10、所述單克隆抗體10g8的輕鏈可變區全長氨基酸如seq?id?no.8所示，或與seq?idno.8所示氨基酸序列有95％以上同源性的氨基酸序列。
11、在一些具體實施例中，優選的，所述seq?id?no.7具體為：evklvesggglvkpggslklscaasgftlknyamswvrqtpekrlewvasvssggstyyldsvkgrftvsrdnarnilylqmsslrsedtamyycereeggyaeawfaywgqgtlvtvsa。
12、在一些具體實施例中，優選的，所述seq?id?no.8具體為：avlmtqtplsltvslgdqasiscrssqsivqsngntylewylqksgqspklllyevsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshvpftfgsgtkleik。
13、進一步的，編碼seq?id?no.7所示氨基酸序列的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；編碼seq?id?no.8所示氨基酸序列的核苷酸序列如seq?id?no.10所示。
14、在一些具體實施例中，優選的，所述seq?id?no.9具體為：gaagtgaagctggtggagtctgggggaggcttagtaaagcctggagggtccctgaaactctcctgtgcagcctctggattcaccttaaaaaactatgccatgtcttgggttcgccagactccagagaagaggctggagtgggtcgcatccgttagtagtggtggtagcacctactatttagacagtgtgaagggccgattcaccgtctccagagataatgccaggaacatcctgtacctgcaaatgagcagtctgaggtctgaggacacggccatgtattactgtgaaagagaagaaggcggttacgccgaggcctggtttgcttactggggccaagggactctggtcactgtctctgca。
15、在一些具體實施例中，優選的，所述seq?id?no.10具體為：gctgttttgatgacccaaactccactctccctgactgtcagtcttggagatcaagcctccatctcttgcagatctagtcagagcattgtacaaagtaatggaaacacctatttagaatggtacctgcagaaatcaggccagtctccaaagctcctgctttatgaagtttccaaccgcttttctggggtcccagacaggttcagtggcagtggatcagggacagatttcacactcaagatcagcagagtggaggctgaggatctgggagtttattactgctttcagggttcacatgttccattcacgttcggctcggggacaaagttggaaataaaa。
16、進一步的，所述單克隆抗體10g8為igm型抗體。
17、本專利技術目的之二在于提供一種編碼上述單克隆抗體10g8的核苷酸序列。
18、本專利技術目的之三在于提供一種表達載體，所述載體含有編碼上述的單克隆抗體的核酸分子。
19、本專利技術目的之四在于提供一種宿主細胞，所述宿主細胞含有上述的核苷酸序列，或含有上述的表達載體。
20、本專利技術目的之五在于提供一種抗體偶聯物，所述抗體偶聯物包含上述的單克隆抗體或其抗原結合片段及標記物。
21、本專利技術目的之六在于提供上述的單克隆抗體在制備檢測cv-a6試劑或試劑盒中的應用。
22、本專利技術目的之七在于提供上述的單克隆抗體在制備抑制、預防和治療cv-a6所引起的疾病的藥物中的應用。
23、與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：
24、（1）本專利技術提供的單克隆抗體10g8可與偶聯物（辣根過氧化酶或異硫氰酸熒光素等）結合用于直接或間接檢測、快速診斷；如可用于開發檢測由cv-a6感染引起的臨床樣品的檢測試劑或試劑盒，也可用于臨床病毒分離株實驗室鑒定抗體，同時還可用于制備預防性疫苗生產中間品及產品含cv-a6抗原的定量檢測試劑。
25、（2）本專利技術提供的單克隆抗體10g8體現出優異的被動保護治療效果，當給注射致死量毒株的小鼠本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種識別CV-A6的中和單克隆抗體10G8，其特征在于，所述單克隆抗體10G8的六個CDR區具體如下：
2.根據權利要求1所述的單克隆抗體10G8，其特征在于，所述單克隆抗體10G8的重鏈可變區全長氨基酸如SEQ?ID?NO.7所示，或與SEQ?ID?NO.7所示氨基酸序列有95％以上同源性的氨基酸序列；
3.根據權利要求2所述的單克隆抗體10G8，其特征在于，編碼SEQ?ID?NO.7所示氨基酸序列的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示；
4.根據權利要求1-3任一項所述的單克隆抗體10G8，其特征在于，所述單克隆抗體10G8為IgM型抗體。
5.編碼權利要求1~4任一項所述單克隆抗體10G8的核苷酸序列。
6.一種表達載體，其特征在于，所述載體含有編碼權利要求1~4任一項所述的單克隆抗體的核酸分子。
7.一種宿主細胞，其特征在于，所述宿主細胞含有權利要求5所述的核苷酸序列，或含有權利要求6所述的表達載體。
8.一種抗體偶聯物，其特征在于，所述抗體偶聯物包含權利要求1~4任一項所述的單克隆
9.權利要求1~4任一項所述的單克隆抗體在制備檢測CV-A6試劑或試劑盒中的應用。
10.權利要求1~4任一項所述的單克隆抗體在制備抑制、預防和治療CV-A6所引起的疾病的藥物中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種識別cv-a6的中和單克隆抗體10g8，其特征在于，所述單克隆抗體10g8的六個cdr區具體如下：
2.根據權利要求1所述的單克隆抗體10g8，其特征在于，所述單克隆抗體10g8的重鏈可變區全長氨基酸如seq?id?no.7所示，或與seq?id?no.7所示氨基酸序列有95％以上同源性的氨基酸序列；
3.根據權利要求2所述的單克隆抗體10g8，其特征在于，編碼seq?id?no.7所示氨基酸序列的核苷酸序列如seq?id?no.9所示；
4.根據權利要求1-3任一項所述的單克隆抗體10g8，其特征在于，所述單克隆抗體10g8為igm型抗體。
5.編碼權利...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳曉琦，吳嘉慧，孫一好，王文輝，孟勝利，郭靖，王澤鋆，申碩，
申請(專利權)人：武漢生物制品研究所有限責任公司，
類型：發明
國別省市：
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