本發明專利技術屬于基因工程技術領域，具體涉及一種抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體及應用。本發明專利技術提供一種抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體，所述抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體具有如SEQ?ID?NO:1所示的重鏈序列和如SEQ?ID?NO:2所示的輕鏈序列。本發明專利技術抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體不僅具有高度的特異性和敏感性，而且制備過程簡便、成本低廉，為ASFV的快速診斷提供了新的有力工具。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程，具體涉及一種抗asfv?p30蛋白單克隆抗體及應用。
技術介紹
1、非洲豬瘟（asf）是由非洲豬瘟病毒（asfv）引起的一種豬傳染病。asfv是一種有囊膜的單分子線狀雙鏈dna病毒，屬于雙鏈dna病毒目、非洲豬瘟病毒科、非洲豬瘟病毒屬的唯一成員，也是目前已知的唯一的蟲媒dna病毒。
2、asfv具有高度接觸性傳染的特點，可通過軟蜱或直接接觸感染豬及其產品進行傳播，并且在環境中持續存在。asfv的基因組全長約為170-190kb，包含150-167個開放閱讀框（orfs），編碼約150-200種蛋白質，其中約50種為結構蛋白。在這些結構蛋白中，p72、p54和p30等蛋白因其重要的生物學功能和免疫原性而備受關注。
3、p30蛋白是asfv的一種膜蛋白，由cp204l基因編碼，在病毒感染早期表達，能夠引起機體產生免疫反應，因此具有重要的抗原性。研究表明，針對p30蛋白的抗體能夠抑制病毒內化，說明p30蛋白參與了病毒進入細胞的過程。
4、盡管asfv對養豬業造成了巨大的經濟損失，但目前尚未開發出有效的疫苗和藥物來預防或治療asf。因此，開發快速、準確、高效的asfv檢測技術對于及時發現疫情、控制疾病傳播具有重要意義。單克隆抗體因其特異性強、高效、靈敏、便捷、成本低等特點，在病毒檢測領域具有廣泛應用前景。在此背景下，本專利技術致力于開發針對asfv的單克隆抗體，以期在asfv的快速診斷、致病機制和免疫機制等方面取得突破。
技術實現思路
1、本專利技術基于上述背景，通過深入研究asfv的p30蛋白，成功開發了一種能夠有效檢測asfv的單克隆抗體。該抗體不僅具有高度的特異性和敏感性，而且制備過程簡便、成本低廉，為asfv的快速診斷提供了新的有力工具。該研究成果的發表，不僅豐富了asfv檢測技術的理論基礎，也為asfv的防控和疫苗研制提供了新的思路和方法。
2、為了達到上述目的，本專利技術提供如下技術方案：
3、第一方面，本專利技術提供一種抗asfv?p30蛋白單克隆抗體，所述抗asfv?p30蛋白單克隆抗體具有如seq?id?no:1所示的重鏈序列和如seq?id?no:2所示的輕鏈序列。
4、優選的，
5、所述重鏈序列具有如seq?id?no:3所示的重鏈恒定區；
6、所述輕鏈序列具有如seq?id?no:4所示的輕鏈恒定區；
7、第二方面，提供一種多核苷酸，所述多核苷酸：
8、a)編碼本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體；
9、b)具有如seq?id?no:5所示的第一核苷酸序列；和/或
10、c)具有如seq?id?no:6所示的第二核苷酸序列；和/或
11、d)與a)或b)或c)互補。
12、優選的，
13、所述第一核苷酸序列具有如seq?id?no:7所示的第一恒定區；
14、所述第二核苷酸序列具有如seq?id?no:8所示的第二恒定區。
15、需要說明的是，術語“第一”和“第二”在核苷酸序列或恒定區時僅用于描述目的，用以區分所限定的物質；而不以任何方式限定次序或主次，也不限定物質特定種類。
16、第三方面，提供一種雜交瘤細胞株1e6，所述雜交瘤細胞株1e6分泌本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體。
17、第四方面，提供一種試劑盒，所述試劑盒包括本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體或本專利技術所述的雜交瘤細胞株1e6。
18、第五方面，提供一種膠體金檢測試紙條，所述膠體金檢測試紙條包括底板、包被膜、樣品墊、金標墊及吸水墊，其中，
19、在所述包被膜上沿樣品的流經方向依次設有一條檢測線和一條質控線；
20、所述檢測線上包被有protein?a蛋白；
21、所述質控線上包被有本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體。
22、第六方面，提供一種包裝盒，所述包裝盒包括本專利技術所述的膠體金檢測試紙條和樣品稀釋液。
23、優選的，所述樣品稀釋液的制備方法為：稱取0.2543g十二水合磷酸氫二鈉、0.0452g二水合磷酸二氫鈉和0.85g氯化鈉，量取80ml純水倒入燒杯，攪拌均勻，使用ph計測量ph值，加入0.1mol/l鹽酸滴定液調ph值至7.4，用純水定容至100ml，0.22μm濾器過濾除菌。
24、本專利技術的包裝盒根據需要可包括容器、芯片、使用說明書、緩沖劑、免疫助劑和/或用于進行診斷/檢測所需的其他材料、結構和/或試劑。
25、本專利技術的包裝盒中用于進行診斷/檢測所需的其他材料包括但不限于，除本專利技術的抗體外的其他抗asfv?p30蛋白抗體、與asfv?p30蛋白結合的抗原和/或asfv?p30蛋白。上述其他材料可以以本領域常規的方式存在，例如，以溶解或干燥形式存在于容器中，包被在固相載體上(例如，膜、板、珠、粒子(如磁粒子)等)，以溶解或干燥形式存在于芯片的腔室中，但本專利技術不限于此。
26、本專利技術的包裝盒中用于進行診斷/檢測所需的其他結構包括但不限于用于取樣結構、用于進行對照結構和/或用于觀察檢測過程或結果的結構。
27、本專利技術的包裝盒中用于進行診斷/檢測所需的其他試劑包括但不限于洗滌劑、顯色劑和/或終止劑。
28、第七方面，提供本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體在制備用于非洲豬瘟病毒診斷的試劑盒中的應用。
29、第八方面，提供本專利技術所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體在制備用于非洲豬瘟病毒診斷的膠體金檢測試紙條中的應用。
30、在本專利技術中，術語“抗體”是指免疫球蛋白分子，還涉及重組地或合成地產生/合成的抗體。術語“單克隆抗體”是指獲自基本上同種抗體的群體的抗體，即除可能的可以少量存在的自然發生的突變之外，構成群體的個體抗體是相同的。針對單抗原位點，單克隆抗體是高度特異的。單克隆抗體是有利的，因為它們可以通過雜交瘤細胞株培養獲得，并且基本上不受其他免疫球蛋白的污染。
31、相對于現有技術，本專利技術的有益效果在于：
32、首先，其抗體效價很高，有著很好的免疫效果；其次，本專利技術的抗體與csfv、prrsv、pcv2、prv無交叉反應，具有很好的特異性結合能力；再次，臨床實驗表明本專利技術的單克隆抗體可用于非洲豬瘟病毒診斷的膠體金檢測試紙條，檢測靈敏度可達96.7%，檢測特異性可達100%。
33、也就是說，本專利技術的單克隆抗體在抗體效價、交叉反應性和檢測效果等多個方面均展現出了很好的性能，從而本專利技術提供了一種經系統性評價可用于體外診斷且綜合能力突出的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體。
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【技術保護點】
1.一種抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體具有如SEQ?ID?NO:1所示的重鏈序列和如SEQ?ID?NO:2所示的輕鏈序列。
2.根據權利要求1所述的抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體，其特征在于，
3.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸：
4.根據權利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，
5.一種雜交瘤細胞株1E6，其特征在于，所述雜交瘤細胞株1E6分泌權利要求1或2所述的抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體。
6.一種試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括權利要求1所述的抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體或權利要求5所述的雜交瘤細胞株1E6。
7.一種膠體金檢測試紙條，其特征在于，所述膠體金檢測試紙條包括底板、包被膜、樣品墊、金標墊及吸水墊，其中，
8.一種包裝盒，其特征在于，所述包裝盒包括權利要求7所述的膠體金檢測試紙條和樣品稀釋液。
9.權利要求1所述的抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體在制備用于非洲豬瘟病毒診斷的試劑盒中的應用。
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p>10.權利要求1所述的抗ASFV?P30蛋白單克隆抗體在制備用于非洲豬瘟病毒診斷的膠體金檢測試紙條中的應用。...
【技術特征摘要】
1.一種抗asfv?p30蛋白單克隆抗體，其特征在于，所述抗asfv?p30蛋白單克隆抗體具有如seq?id?no:1所示的重鏈序列和如seq?id?no:2所示的輕鏈序列。
2.根據權利要求1所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體，其特征在于，
3.一種多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸：
4.根據權利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，
5.一種雜交瘤細胞株1e6，其特征在于，所述雜交瘤細胞株1e6分泌權利要求1或2所述的抗asfv?p30蛋白單克隆抗體。
6.一種試劑盒，其特征在于，所...
【專利技術屬性】
技術研發人員：張滿義，周照斌，南雨辰，梁軍，
申請(專利權)人：西北農林科技大學深圳研究院，
類型：發明
國別省市：
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