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    一種CPZ免疫組織化學抗體及應用制造技術

    技術編號:43817441 閱讀:16 留言:0更新日期:2024-12-27 13:30
    本申請涉及抗體技術領域,公開了一種CPZ免疫組織化學抗體及應用,所述抗體包括氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2或SEQ?ID?NO:6所示的重鏈可變區,以及氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:8所示的輕鏈可變區。本申請制備后的抗體能夠協助鑒別診斷肝細胞癌和肝內膽管癌,最終有效地將CPZ用于肝臟惡性腫瘤和良性腫瘤的鑒別中,提高了肝細胞癌的診斷準確性。

    【技術實現步驟摘要】

    本申請涉及抗體,更具體地說,它涉及一種cpz免疫組織化學抗體及應用。


    技術介紹

    1、免疫組織化學是利用抗原與抗體間的特異性結合原理和特殊的標記技術,對組織和細胞內的特定抗原或抗體進行定位、定性或定量檢測的技術。免疫組織化學技術具有特異性強、敏感性高、定位準確、形態與功能相結合等特點,有利于病理學領域的深入研究,在現代病理診斷中起重要作用。

    2、病理科日常工作使用的免疫組織化學抗體品種達數百種,對人類疾病的診斷和治療發揮著重要的作用。隨著人類對疾病認識的不斷提高,病理科應用的抗體種類也逐漸增加。在近十年人類基因組計劃完成和蛋白質譜計劃推進的過程中,越來越多抗體的潛在價值等待被發掘,等待不斷擴展和添加到病理科抗體應用的目錄中。

    3、免疫組織化學中所使用的抗體,又稱為一抗(primary?antibody),根據其制備方式可分為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體因其特異性高廣受免疫組化使用者的青睞,在病理科使用的抗體中占絕大多數。

    4、單克隆抗體在制備過程中,會產出很多種克隆,大部分克隆特異性不強,因此,需要篩選特異性強的克隆。克隆篩選是十分專業的工作,不但需要臨床一線高年資專業病理醫生,還需要豐富的不同陽性強度和陽性范圍的臨床標本,才有可能挑選出特異和穩定的亞克隆細胞株。

    5、羧肽酶(carboxypeptidases,cps)是一類肽鏈端解酶,主要在肽鏈的游離羧基末端發揮作用,通過水解從蛋白質和多肽的c端釋放單個氨基酸。根據羧肽酶不同的催化機制,可將其分為絲氨酸羧肽酶(酸性羧肽酶)、半胱氨酸羧肽酶(組織蛋白酶x)和金屬羧肽酶(metallocarboxypeptidases,mcps),前兩者研究相對較少。mcps多在家蠶等昆蟲中報道,對其食物蛋白質的消化吸收起較為重要的作用。羧肽酶z(carboxypeptidase?z,cpz)是金屬羧肽酶家族的新成員,又稱為金屬碳酰肽酶z,也是一種zn依賴性酶。該酶于1997年在人類中首次被克隆,于1998年在大鼠中被克隆。人類唾液腺中cpz?mrna的主要形式為編碼一個具有641個氨基酸開放閱讀框的蛋白質,并發現了三個變體。除羧肽酶同源性結構域以外,cpz還包含120個殘基的富含半胱氨酸的結構域(crd),該結構域與果蠅和哺乳動物的卷曲蛋白(即wnt受體家族)的氨基酸序列具有20%-30%的同一性。wnt信號通路在拮抗或協同調節腫瘤的增殖、遷移和侵襲中發揮重要作用,推測cpz可能作為wnt信號傳導通路的調節劑。既往報道cpz?mrna在大鼠胎盤中含量豐富,在大鼠腦、肺、胸腺和腎臟中低至中等含量。追溯國內外文獻報道,本專利技術專利首次探索cpz在全身正常組織和多種腫瘤組織中的表達情況,并發掘其在臨床應用潛在的鑒別診斷價值,且具有廣闊的應用前景。因此,本專利技術擬對這一候選分子進行制備和篩選,以期鑒定出敏感性高,特異性優的克隆株,以協助臨床診斷和發掘更多的潛在價值。


    技術實現思路

    1、本專利技術的專利技術目的是:探索cpz在全身正常組織和多種腫瘤組織中的表達情況,發掘其在臨床應用潛在的鑒別診斷價值,以協助臨床診斷。

    2、正常肝組織陽性率為100%,肝細胞癌陽性表達率為91%,且多為胞漿彌漫強陽性,而肝內膽管癌陽性表達率為28%,往往胞漿呈局灶陽性表達或少量腔緣線狀陽性表達,其他肝臟原發腫瘤如肝細胞腺瘤、膽管腺瘤/錯構瘤、彌漫性大b細胞淋巴瘤,以及肝臟轉移性腫瘤陽性率為陰性。綜前所述,cpz是一種極具潛力的肝細胞癌的鑒別診斷指標,并具有進一步探索作為其他器官、系統、組織和細胞水平潛在的鑒別、預測和靶標的價值。因此,本研究組擬對這一候選分子進行制備和篩選。

    3、為了實現上述專利技術目的,第一方面,本專利技術提供了一種cpz免疫組織化學抗體及應用,所述抗體包括氨基酸序列為seq?id?no:2或seq?id?no:6所示的重鏈可變區,以及氨基酸序列為seq?id?no:4或seq?id?no:8所示的輕鏈可變區。

    4、第二方面,本專利技術提供了編碼上述cpz免疫組織化學抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的基因。

    5、進一步地,所述編碼基因,包括:

    6、編碼氨基酸序列為seq?id?no:2所示的重鏈可變區的基因,序列為seq?id?no:1;

    7、編碼氨基酸序列為seq?id?no:6所示的重鏈可變區的基因,序列為seq?id?no:5;

    8、編碼氨基酸序列為seq?id?no:4所示的輕鏈可變區的基因,序列為seq?id?no:3;

    9、編碼氨基酸序列為seq?id?no:8所示的輕鏈可變區的基因,序列為seq?id?no:7。

    10、第三方面,本專利技術提供了所述的cpz免疫組織化學抗體在制備鑒別診斷肝細胞癌和/或肝內膽管癌的產品中的應用。

    11、進一步地,所述鑒別診斷肝細胞癌和/或肝內膽管癌的產品包括檢測試劑盒。

    12、與現有技術相比,本申請具有以下有益效果:

    13、1.本專利技術制備后的抗體能夠協助鑒別診斷肝細胞癌和肝內膽管癌,最終有效地將cpz用于肝臟惡性腫瘤和良性腫瘤的鑒別中,提高了肝細胞癌的診斷準確性。

    14、2.本專利技術利用高產和量產組織芯庫,首次發現cpz在正常組織主要分布于肝臟,與單項檢測arg-1或hep?par-1相比較,無論是單項檢測cpz,或是上述三項指標聯合檢測,對診斷肝細胞癌均有更高的敏感度,更好的診斷準確性,且對診斷低分化肝細胞癌更有幫助。因此,對肝細胞癌的鑒別診斷有互補性。

    本文檔來自技高網...

    【技術保護點】

    1.一種CPZ免疫組織化學抗體,其特征在于,所述抗體包括氨基酸序列為SEQ?ID?NO:2或SEQ?ID?NO:6所示的重鏈可變區,以及氨基酸序列為SEQ?ID?NO:4或SEQ?ID?NO:8所示的輕鏈可變區。

    2.編碼權利要求1所述的CPZ免疫組織化學抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的基因。

    3.根據權利要求2所述的編碼基因,其特征在于,包括:

    4.權利要求1所述的CPZ免疫組織化學抗體在制備鑒別診斷肝細胞癌和/或肝內膽管癌的產品中的應用。

    5.根據權利要求4所述的應用,其特征在于,所述鑒別診斷肝細胞癌和/或肝內膽管癌的產品包括檢測試劑盒。

    【技術特征摘要】

    1.一種cpz免疫組織化學抗體,其特征在于,所述抗體包括氨基酸序列為seq?id?no:2或seq?id?no:6所示的重鏈可變區,以及氨基酸序列為seq?id?no:4或seq?id?no:8所示的輕鏈可變區。

    2.編碼權利要求1所述的cpz免疫組織化學抗體重鏈可變區和輕鏈可變區的...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:侯英勇鄧民英平軼芳王慧美徐晨樊嘉周儉羅榮奎黃雯陳伶俐蔣冬先袁偉姚家美宋琦宿杰阿克蘇
    申請(專利權)人:復旦大學附屬中山醫院
    類型:發明
    國別省市:

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