【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及dna提取，具體涉及一種組織裂解液及提取動物組織dna的方法。
技術介紹
1、動物組織dna提取一般需要進行細胞裂解和dna純化兩步，裂解是使動物組織中的核酸游離在裂解體系中的過程，純化是去除如蛋白質、鹽、糖等其他雜質的過程。目前較常用的dna提取方法都存在一些問題，例如高鹽法提取dna雖然簡便快速，但所得dna純度及穩定性較差，影響后期pcr反應；酚-氯仿抽提法需要較長的消化時間且抽提步驟繁瑣，還有可能引入酚的污染，影響實驗進程。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是針對現有技術中的上述問題，提供一種組織裂解液及提取動物組織dna的方法，能簡單快速裂解動物組織細胞釋放dna，提取方便，用時短。
2、本專利技術技術方案詳述如下：
3、第一方面，本專利技術提供了一種組織裂解液，由以下成分組成：
4、100mm?tris-hcl（三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽），
5、500mm?kcl（氯化鉀），
6、0.45%(wt%)?np40（乙基苯基聚乙二醇），
7、0.45%(wt%)?tween?20（聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯），
8、余量?純水。
9、可選或優選的，上述組織裂解液，ph值為8.3。
10、第二方面，本專利技術提供了一種提取動物組織dna的方法，包括以下步驟：
11、（1）將上述組織裂解液和1%蛋白酶k加入到動物組織中，在56℃條件下裂解細胞1
12、（2）12000rpm離心2分鐘，取上清即為動物組織dna。
13、其中，1%蛋白酶k是按照1g蛋白酶k溶解在100ml純水中的比例制備而成。
14、由于蛋白酶k容易失效，短時間內使用可以將組織裂解液和蛋白酶k混合后放4℃，直接兩者一起用；但長時間情況下，蛋白酶k需放-20℃條件下保存，用時將其溶解在水中，再加到組織裂解液或者直接加到待處理的動物組織中都可以。
15、可選或優選的，上述方法中，每100μl組織裂解液對應處理2~10mg動物組織。
16、可選或優選的，上述方法中，裂解細胞的時間為15分鐘。
17、可選或優選的，上述方法中，加入組織裂解液的用量為100μl。
18、可選或優選的，上述方法中，取上清1μl。
19、與現有技術相比，本專利技術具有如下有益效果：
20、本專利技術的組織裂解液成分簡單，成本低，僅tris-hcl、kcl、np40和tween?20四種成分，無氯仿、異丙醇、乙醇、酚等有機溶劑，不會產生有機溶劑污染；配方中沒有用于使dna與其他分子如rna或蛋白質分離的mg2+，仍然能夠獲得高純度和高穩定性的dna，1μl提取液即可滿足pcr對于dna純度和穩定性的要求。
21、本專利技術裂解液中tris-hcl濃度提高至100mm（常規濃度在10-50mm之間），kcl濃度提高至500mm（常規濃度2.7-50?mm）。提高tris?-?hcl和kcl的濃度對提取動物組織dna有以下作用：
22、tris-hcl方面
23、tris-hcl是一種緩沖液，濃度升高到100mm有助于維持更穩定的ph值。在dna提取過程中，很多酶的活性對ph敏感，合適的ph有助于保證如蛋白酶k等酶的活性，使其更好地分解組織中的蛋白質，讓dna更充分地釋放出來。而且在后續的提取步驟中，穩定的ph環境可以防止dna的化學結構被破壞。
24、kcl方面
25、高濃度的kcl（500mm）有利于破壞細胞結構。它可以改變細胞膜的通透性，使細胞內的dna更容易釋放到裂解液中。同時，kcl還可以通過鹽析作用，使一些蛋白質在高鹽環境下沉淀，減少蛋白質對dna的污染，有助于提高提取dna的純度。
26、本專利技術提供的提取動物組織dna的方法，采用上述組織裂解液，整個操作過程簡單快速，裂解僅需15分鐘，再滅活5分鐘，離心2分鐘即可獲得符合pcr要求的dna上清液。
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1.一種組織裂解液，其特征在于，由以下成分組成：
2.根據權利要求1所述的組織裂解液，其特征在于，pH值為8.3。
3.一種提取動物組織DNA的方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，每100μL組織裂解液對應處理2~10mg動物組織。
5.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，裂解細胞的時間為15分鐘。
6.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，加入組織裂解液的用量為100μL。
7.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，取上清1μL。
【技術特征摘要】
1.一種組織裂解液，其特征在于，由以下成分組成：
2.根據權利要求1所述的組織裂解液，其特征在于，ph值為8.3。
3.一種提取動物組織dna的方法，其特征在于，包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，每100μl組織裂解...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王秀革，黃金明，魏曉超，王金鵬，姜強，鞠志花，肖遙，張亞冉，楊春紅，高亞平，王玉杰，趙文軍，劉文浩，李彥芹，王玲玲，高運東，
申請(專利權)人：山東省農業科學院畜牧獸醫研究所，
類型：發明
國別省市：
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