【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于動物模型領域，具體涉及一種非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的建立方法和用途。
技術介紹
1、年齡相關性黃斑變性(age-relatedmacular?degeneration,amd)指年齡增長與環境因素共同作用下，視網膜色素上皮層(retinalpigment?epithelium，rpe)代謝異常，光感受器細胞外節膜盤吞噬消化功能下降，細胞外基質在基底膜沉積，逐漸形成玻璃疣，黃斑區形態與功能改變所產生的疾病，是導致視力進行性損害和嚴重視力喪失的一個重要原因。amd患者多為50歲以上，雙眼先后或同時發病，是發達國家老年人口中最常見的致盲性眼病，預計到2040年全球將約3億人患病。臨床上，amd可分為干性amd(也稱非新生血管性amd)和濕性amd(也稱新生血管性amd)兩類，其中干性amd患病率更高，約占amd患者80％。目前對于濕性amd主要通過眼內注射抗血管內皮生長因子(vascular?endothelial?growthfactor,vegf)藥物進行治療。但對于干性amd目前尚未有明確有效的治療方法，并且缺乏穩定的動物疾病模型，限制了對干性amd的治療手段及治療藥物的研究。因此亟需開發相關動物模型，同時明確相關造模技術方法，為相關新藥的臨床研發提供穩定的動物疾病模型。
2、目前通過環境誘導、藥物誘導和基因敲除等方法成功建立了不同種屬(小鼠、大鼠、猴、豬、家兔)的干性amd模型。其中，藥物誘導通過玻璃體腔給藥、視網膜下給藥等方式，重復給藥易破壞眼組織，造成眼內炎、視網膜脫落等不良反應；基因
3、目前已經有利用激光誘導豬眼rpe損傷模型的方法被報道，但是該建模方法采用的動物為豬，豬沒有黃斑區，豬的病理表現與人也存在一定差異，這限制了它們在模擬人類黃斑變性疾病方面的適用性。而非人靈長類動物的眼球解剖結構與人最為相似，且具備黃斑區，是目前較為理想的實驗動物。由于豬眼和非人靈長類動物眼睛的構造不同，適用于豬的rpe損傷模型造模方法并不適用于非人靈長類動物，目前并沒有報道在非人靈長類動物中建立簡單易重復、穩定有效的rpe損傷模型。
4、為了克服上述問題，亟需開發出一種步驟簡單，易重復實現，模型成模率穩定的構建非人靈長類動物rpe損傷模型的方法。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的建立方法和用途。
2、本專利技術提供了一種建立非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
3、(1)將非人靈長類動物麻醉、散瞳；
4、(2)將全視網膜鏡與非人靈長類動物的角膜貼合，調整激光光凝儀的裂隙燈顯微鏡，使操作者能夠觀察到非人靈長類動物的黃斑中心凹、視盤和上下血管弓；
5、(3)利用激光光凝儀對光凝區域進行光凝，至光凝區域出現250-300個一級光斑時結束光凝；所述光凝區域為視盤至黃斑中心凹和上下血管弓之間的、避開黃斑中心凹的區域；所述激光光凝儀的參數設置如下：激光波長為530-534nm，光斑直徑為190-210μm，激光功率為65～95mw，曝光時間為0.07～0.10s，每個激光點能量為4.6～9.5mj。
6、進一步地，所述非人靈長類動物為猴。
7、進一步地，所述猴為食蟹猴或恒河猴。
8、進一步地，所述激光光凝儀的參數設置如下：激光波長為532nm，光斑直徑為200μm，激光功率為70～90mw，曝光時間為0.08～0.09s，即每個激光點能量為5.6～8.1mj。
9、進一步地，所述結束光凝的時機為光凝區域出現280個一級光斑時。
10、進一步地，所述方法還包括以下步驟：
11、(4)對操作眼進行預防感染處理。
12、本專利技術還提供了上述的方法建立的非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型用于治療視網膜色素上皮損傷模所致干性年齡相關性黃斑變性藥物的篩選的用途。
13、本專利技術取得了以下有益效果：
14、本專利技術首次以非人靈長類動物為模型動物，提供了一種利用激光構建非人靈長類動物視網膜色素上皮(rpe)損傷模型的方法。本專利技術方法可利用激光直接損傷rpe，進而導致外層視網膜萎縮。本專利技術構建的rpe損傷動物模型成模率穩定且造成的損傷不可逆。
15、本專利技術使用激光光凝直接對rpe進行損傷，rpe主要功能為對視網膜光感受器細胞進行營養支持，并對視網膜光感受器細胞的代謝產物進行吞噬清除，因此當rpe受損后，其不能發揮正常功能，影響光感受器細胞，從而導致視網膜受損、光凝區域眼底照相可見視網膜呈現地圖樣萎縮，眼底自發熒光照相可見自發熒光強度明顯減弱，視網膜光學相干斷層掃描(optic?coherence?photography,oct)可見rpe層結構紊亂，不連續，外層視網膜萎縮變薄；眼底熒光血管造影(fundus?fluorescein?angiography,ffa)早期可見萎縮區窗樣缺損，晚期表現為高熒光滲漏，多焦視網膜電圖(multifocal?electroretinograms,mferg)可見光凝區域視網膜p1波振幅密度下降，且低于同眼非造模區域(提示光凝區域視功能下降)。
16、臨床上干性amd的發病同樣由于環境、年齡等因素導致rpe功能受損，從而影響視網膜光感受器細胞代謝，代謝產物不能及時被吞噬帶走，長期在rpe層堆積，形成玻璃膜疣(drusen)，導致外層視網膜逐漸萎縮，眼底照相出現地圖樣萎縮；oct見視網膜萎縮變薄，rpe層結構紊亂不連續；ffa同樣出現早期窗樣缺損，晚期高熒光，mferg的p1波振幅密度下降。
17、本專利技術利用激光構建非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的方法不涉及傳統介入性處置的方法，易重復實現，造模成功率高達100％。
18、本專利技術的建模方法步驟簡單，為治療rpe損傷所致干性年齡相關性黃斑變性(dryage-related?macular?degeneration,damd)相關新藥的臨床研發提供了穩定的動物疾病模型。
19、顯然，根據本專利技術的上述內容，按照本領域的普通技術知識和慣用手段，在不脫離本專利技術上述基本技術思想前提下，還可以做出其它多種形式的修改、替換或變更。
20、以下通過實施例形式的具體實施方式，對本專利技術的上述內容再作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本專利技術上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本專利技術上述內容所實現的技術均屬于本專利技術的范圍。
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1.一種建立非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述非人靈長類動物為猴。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述猴為食蟹猴或恒河猴。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述激光光凝儀的參數設置如下：激光波長為532nm，光斑直徑為200μm，激光功率為70～90mW，曝光時間為0.08～0.09s，每個激光點能量為5.6～8.1mJ。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，所述結束光凝的時機為光凝區域出現280個一級光斑時。
6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述方法還包括以下步驟：
7.權利要求1-6任一項所述的方法建立的非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型用于治療視網膜色素上皮損傷模所致干性年齡相關性黃斑變性藥物的篩選的用途。
【技術特征摘要】
1.一種建立非人靈長類動物視網膜色素上皮損傷模型的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述非人靈長類動物為猴。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于，所述猴為食蟹猴或恒河猴。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述激光光凝儀的參數設置如下：激光波長為532nm，光斑直徑為200μm，激光功率為70～90mw，曝光時間為0...
【專利技術屬性】
技術研發人員：馮宇梁，楊家翼，岑小波，楊源，蔡慶霖，
申請(專利權)人：成都華西海圻醫藥科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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