【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物制品檢測領域。具體地說，本專利技術涉及一種生物制品中甘油含量的測定方法。
技術介紹
1、甘油，又名丙三醇，化學式為c3h8o3，無色、無臭、味甜，外觀呈澄明黏稠液態(tài)。生物制品因甘油的性能常被加入生物制品中進行保護，但甘油的加入量有一定限制，2020版中國藥典二部規(guī)定：胰島素注射液、精蛋白鋅胰島素注射液每100ml中可加甘油1.4～1.8g、苯酚0.25g。甘油果糖氯化鈉注射液：每1000ml，可添加甘油90-110g。因此，對生物制品最終加入甘油的量需要進行檢測監(jiān)控。
2、目前生物制品樣品中甘油的測定方法主要有包括：1)化學法：即在水溶液中將甘油與高碘酸鉀反應生成甲酸，再以標準氫氧化鈉中和生成的甲酸，即可得游離甘油的含量；該方法雖然成本較低，但操作繁瑣，耗時長，且有時偶然誤差極大；2)酶測定法：只與溶液中的甘油進行特異性反應，專一性強，但需要的試劑昂貴，不利于工業(yè)應用和大量樣品的檢測；3)氣相色譜法：精確度高，最靈敏，操作步驟復雜，檢測成本較高。
3、因此，本領域需要開發(fā)一種針對生物制品中甘油含量的低成本、快速、準確和安全的檢測方法，保證生物制品的過程質量管控。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于克服現有的生物制品中甘油檢測方法存在的一些缺陷，提出一種低成本、易操作、高準確度和安全的生物制品中甘油含量的測定方法。
2、在本專利技術的第一方面，提供了一種測定樣品中甘油含量的方法，其包括步驟：
3、1)在甘油脫氫酶存
4、2)檢測步驟1)產生的nadh，從而計算得到樣品中甘油含量或濃度。
5、在另一優(yōu)選例中，所述的甘油脫氫酶濃度為1-20mm，優(yōu)選為5-15mm，更優(yōu)選為10-12mm。
6、在另一優(yōu)選例中，所述的nad+濃度為1-200mm，優(yōu)選為50-150mm，更優(yōu)選為100-120mm。
7、在另一優(yōu)選例中，所述的甘油脫氫酶和nad+的摩爾比例為100:1～1:100，優(yōu)選為50:1～1:50，更優(yōu)選為10:1～1:10。
8、在另一優(yōu)選例中，步驟1)的反應時間為10-60min，較佳地為20-45min，更佳地為30-40min。
9、在另一優(yōu)選例中，步驟1)的反應溫度為25-45℃，較佳地為30-40℃，更佳地為35-37℃。
10、在另一優(yōu)選例中，步驟2)的檢測為比色法檢測。
11、在另一優(yōu)選例中，步驟2)的檢測使用酶標儀進行。
12、在另一優(yōu)選例中，在步驟2)中，所述檢測nadh通過檢測樣品在340nm處的吸光度進行。
13、在另一優(yōu)選例中，在步驟2)中，包括步驟：將nadh檢測結果換算為甘油的含量或濃度。
14、在另一優(yōu)選例中，在步驟2)中，將nadh檢測結果(例如通過比色法測得的吸光度)與標準品或標準曲線比較，從而換算得到樣品中甘油的含量或濃度。
15、在另一優(yōu)選例中，所述標準曲線是通過以下方法獲得：
16、(a)配置濃度在0-2mm(優(yōu)選0.1-2mm)內的0-10份甘油溶液，在甘油脫氫酶存在的條件下與nad+反應，從而產生nadh；
17、(b)通過比色法測量步驟(a)得到的溶液的吸光度；
18、(c)繪制吸光度和甘油濃度的標準曲線。
19、在另一優(yōu)選例中，在步驟2)之后，還包括以下步驟：
20、判斷甘油濃度是否超過線性檢測范圍，如超過，則將待測樣品稀釋或濃縮后，重復步驟1)-2)。
21、在另一優(yōu)選例中，所述的線性檢測范圍為0.01mm-5.0mm，優(yōu)選為0.1mm-2.0mm。
22、在另一優(yōu)選例中，所述測定樣品中甘油含量的方法的檢測靈敏度為0.1mm；優(yōu)選0.08mm；最優(yōu)選0.05mm。
23、在另一優(yōu)選例中，所述待測樣品為生物制品。
24、在另一優(yōu)選例中，所述待測樣品為注射液。
25、在另一優(yōu)選例中，所述待測樣品包括：胰島素注射液、甘油果糖氯化鈉注射液。
26、應理解，在本專利技術范圍內中，本專利技術的上述各技術特征和在下文(如實施例)中具體描述的各技術特征之間都可以互相組合，從而構成新的或優(yōu)選的技術方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
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1.一種測定樣品中甘油含量的方法，其包括步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脫氫酶濃度為1-20mM，優(yōu)選為5-15mM，更優(yōu)選為10-12mM。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NAD+濃度為1-200mM，優(yōu)選為50-150mM，更優(yōu)選為100-120mM。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脫氫酶和NAD+的摩爾比例為100:1～1:100，優(yōu)選為50:1～1:50，更優(yōu)選為10:1～1:10。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述檢測NADH通過檢測樣品在340nm處的吸光度進行。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)之后，還包括以下步驟：
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的線性檢測范圍為0.01mM-5.0mM，優(yōu)選為0.1mM-2.0mM。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述測定樣品中甘油含量的方法的檢測靈敏度為0.1mM；優(yōu)選0.08mM；最優(yōu)選0.05mM。
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10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述待測樣品包括：胰島素注射液、甘油果糖氯化鈉注射液。
...【技術特征摘要】
1.一種測定樣品中甘油含量的方法，其包括步驟：
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脫氫酶濃度為1-20mm，優(yōu)選為5-15mm，更優(yōu)選為10-12mm。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的nad+濃度為1-200mm，優(yōu)選為50-150mm，更優(yōu)選為100-120mm。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述的甘油脫氫酶和nad+的摩爾比例為100:1～1:100，優(yōu)選為50:1～1:50，更優(yōu)選為10:1～1:10。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，所述檢測nadh通過檢測...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：馬全剛，楊志行，劉佳蘇，吳娜，
申請(專利權)人：湖州申科生物技術股份有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：
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