【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及疫苗制備，尤其涉及一種雞毒支原體高密度發酵培養工藝。
技術介紹
1、雞毒支原體(mycoplasma?galliscepticum，mg)是一種引起雞呼吸道感染疾病的支原體，感染后的主要臨床表現為流鼻涕、流眼淚、咳嗽，嚴重時表現為呼吸困難或張口呼吸，可聽到濕性啰音。隨著養雞規模加大、飼養方式改變和飼養密度提高，雞毒支原體感染發病率越來越高，主要影響雛雞生長和使成年雞產蛋減少，造成養雞業經濟上的重大損失，危害性日益突出，受到養雞業者的普遍關注。雞毒支原體感染一般一次感染會終生處于持續性感染的帶菌狀態，其主要傳播方式是雞與雞之間的水平接觸式傳播，即隨呼吸道分泌物排出，通過飛沫和塵埃經呼吸道感染。另外，垂直傳播也是其傳播的主要方式。
2、目前，國家要求原種雞場對支原體、馬立克、禽白血病等多種疾病盡快完成凈化，近年來，隨著疫苗使用技術的不斷改進和種源禽白血病凈化示范成功推廣，禽流感、新城疫、傳染性法氏囊病、馬立克氏病及禽白血病均得到了有效控制，然而，雞群中支原體感染的問題日益突出。雖然各養殖場已經在生物安全隔離和其他多項控制措施上采取了多種防范，但疫苗免疫混亂，常用的mg疫苗就有ts-11、6/85、f株3種活苗，除此之外，還有另一種r型滅活苗，由于沒有針對每一種疫苗株的精準檢測，所以導致雞場雞毒支原體發病或者檢測種雞場是否攜帶雞毒支原體病原，并區分是疫苗還是野毒感染時，很多檢測機構和養殖集團內部的檢測團隊無從下手。
3、最重要的是，雞毒支原體的高密度培養非常困難，例如對營養需求高，尤其是對ph要求
4、因此，如何提供一種可以大規模培養雞毒支原體的方法，以解決上述技術問題，是本領域技術人員亟需解決的問題。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種雞毒支原體高密度發酵培養工藝。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種雞毒支原體高密度發酵培養方法，包括如下步驟：
4、a、將雞毒支原體種子接種于培養基中培養，再接種傳代一次后，得到培養液；
5、b、將步驟a得到的培養液接種于培養基中培養44～50h，在培養至20～24h時和32～36h時，分別調節發酵液ph至7.5～7.6；培養完成后，待發酵液ph值下降至6.5時停止發酵；
6、步驟a和b所述培養基包括如下組分：10～20g胰蛋白胨、3～5g大豆蛋白胨、2～3g氯化鈉、3～4g磷酸氫二鉀、2.0～3.0g葡萄糖、2～4g酵母浸粉、1～2g絲肽粉、1～2mg維生素b12、1～2g?l-谷氨酰胺、6～10g谷胱甘肽、5～9g輔酶1、2～3g鳥氨酸、2～3g酪氨酸、5～7ml胎牛血清、加水補充至1l。
7、優選的，所述培養基的制備方法為：將除胎牛血清外的各組分混合，滅菌后，加入胎牛血清，調節ph即可。
8、優選的，所述滅菌的溫度為115～123℃，時間為12～16min。
9、優選的，所述調節ph至7.5～7.7。
10、優選的，步驟a所述培養的溫度為36.5～37.5℃。
11、優選的，步驟a所述培養的時間為20～24h。
12、優選的，步驟a所述接種的比例為8～12％(v：v)。
13、優選的，步驟b所述接種的比例為4～6％(v：v)；步驟b所述培養的溫度為37～38℃。
14、優選的，步驟b所述ph的調節劑為：碳酸氫鈣和硫酸鋁；所述碳酸氫鈣和硫酸鋁的質量比為10：5～7。
15、本專利技術還提供了所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法制備得到的雞毒支原體在制備雞毒支原體疫苗中的應用。
16、與現有技術相比，本專利技術具有如下的有益效果：
17、本專利技術在培養過程中，并沒有選擇常規類型的培養基，本專利技術所提供的培養基還添加了雞毒支原體生長激活劑，包括輔酶1、鳥氨酸和酪氨酸，上述組分的添加對雞毒支原體的生長起到了激活作用，促進了雞毒支原體的擴繁。培養基中所添加的絲肽粉具有保護作用，可以緩和外界刺激對于支原體生長的影響。谷胱甘肽可保護細胞免受氧化應激影響，并有助于細胞內外形成有利的氧化還原環境，這就有利于雞支原體快速度過遲緩期，雞支原體的繁殖速度加快，進而達到高密度培養的目的。
18、具體的，輔酶1(也稱為nad+或煙酰胺腺嘌呤二核苷酸)在生物體內廣泛參與氧化還原反應，是多種酶促反應的必需輔因子。在雞毒支原體的代謝過程中，輔酶1促進了某些關鍵代謝途徑的順利進行，為細胞的生長和分裂提供了必要的能量和中間產物，從而有利于菌體數量的增加，起到了生長激活作用。
19、鳥氨酸和酪氨酸：這兩種氨基酸是蛋白質的基本組成單位，對于微生物的生長至關重要。它們不僅作為蛋白質合成的原料，還參與其他生物活性物質的合成。在雞毒支原體的培養過程中，添加鳥氨酸和酪氨酸補充了培養基中氨基酸的不足，滿足了菌體生長對氨基酸的需求，進而促進了菌體的生長和繁殖，起到了氨基酸的營養支持作用。
20、在本專利技術中，輔酶1、鳥氨酸和酪氨酸通過協同作用，共同優化雞毒支原體的生長環境。輔酶1促進能量代謝和關鍵酶的活性，鳥氨酸和酪氨酸提供必要的氨基酸營養，三者共同作用，使得雞毒支原體能夠在高密度培養條件下快速生長和繁殖。
21、進一步的，三種組分的添加對菌體生理狀態也有積極的影響：高密度培養不僅要求菌體數量的增加，還要求菌體保持良好的生理狀態。輔酶1、鳥氨酸和酪氨酸的添加有助于維持菌體的膜完整性、蛋白質合成和能量代謝等生理過程，使菌體在高密度培養條件下仍能保持較高的生長速率和活力。輔酶1、鳥氨酸和酪氨酸通過促進能量代謝、提供必要的氨基酸營養以及優化生長環境等多方面的作用，有助于增加雞毒支原體的菌密度，實現高密度培養的目標。
22、申請人發現，在擴大培養期間，適當的調節培養液的ph值有助于刺激雞毒支原體的生長，并可顯著提高培養效果，且ph調節劑的選擇也非常重要，只有選擇本專利技術的ph條件劑才能達到最佳的培養效果。
23、本專利技術方法可進行雞毒支原體的高密度培養，雞毒支原體的免疫原性高，制備得到的疫苗的保護效果好，提高了疫苗的保護效果。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述培養基的制備方法為：將除胎牛血清外的各組分混合，滅菌后，加入胎牛血清，調節pH即可。
3.根據權利要求2所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述滅菌的溫度為115～123℃，時間為12～16min。
4.根據權利要求2所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述調節pH至7.5～7.7。
5.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟a所述培養的溫度為36.5～37.5℃。
6.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟a所述培養的時間為20～24h。
7.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟a所述接種的比例為8～12％(V：V)。
8.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟b所述接種的比例為4～6％(V：V)；步驟b所述培養的溫度為37～
9.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟b所述pH的調節劑為：碳酸氫鈣和硫酸鋁；所述碳酸氫鈣和硫酸鋁的質量比為10：5～7。
10.權利要求1～9任一項所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法制備得到的雞毒支原體在制備雞毒支原體疫苗中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，包括如下步驟：
2.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述培養基的制備方法為：將除胎牛血清外的各組分混合，滅菌后，加入胎牛血清，調節ph即可。
3.根據權利要求2所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述滅菌的溫度為115～123℃，時間為12～16min。
4.根據權利要求2所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，所述調節ph至7.5～7.7。
5.根據權利要求1所述的雞毒支原體高密度發酵培養方法，其特征在于，步驟a所述培養的溫度為36.5～37.5℃。
6.根據權利要求1所述的雞毒支...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭莉莉，陳蕊，王守杰，祝寧，郭曉樂，李曉彤，
申請(專利權)人：青島博霖生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。