【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物工程領域，尤其涉及促甲狀腺激素受體的突變體及其制備方法和應用。
技術介紹
1、促甲狀腺激素受體(thyroid-stimulating?hormonereceptor,tshr存在于甲狀腺濾泡上皮細胞和其他多種細胞的質膜上，是一種7次跨膜糖蛋白受體，屬于g蛋白偶聯受體。tshr能和促甲狀腺激素(thyroid-stimulating?hormone,ts?h)結合，是t淋巴細胞和自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmune?thyroiddisease,aitd)tshr抗體(tshr?antibody,trab)最常見的抗原靶點。tshr共764個氨基酸，分為膜內區、跨膜區和膜外區；膜外區含有418個氨基酸，是tsh和trab的識別和結合部位。tshr胞外區(ecd)：11個半胱氨酸，5對二硫鍵。
2、人體內主要有三種與tshr相關的抗體：tsab：能激活tsh類似tsh的生物效應，引起甲狀腺功能亢進，自身抗體表位6-168aa；tsbab：與tshr結合后阻斷tsh與受體的結合并抑制tsh的生物學效應，引起甲狀腺功能減退；自身抗體表位261-370aa；中性tsh受體抗體：既不激活也不阻斷其它配體對tshr的作用。
3、tshr自身抗體檢測臨床意義：anti-tshr是甲狀腺細胞膜tsh受體的自身抗體，具有和tsh相似的甲狀腺刺激功能，不受負反饋系統的控制，刺激甲狀腺功能trab是引起graves病患者甲亢和甲亢復發的重要原因之一。graves病患者用藥療效評估，抗甲狀腺藥物治療期間t
4、tshr為7次跨膜蛋白，抗原和抗體的結合依賴抗原構象活性，因此成功表達具有活性的抗原頗具挑戰。目前tshr采用細胞直接使用去垢劑粗提，檢測試劑因精密性較差，尤其是低值區界值(≤2.0iu/l)附近濃度變異較大在10％～12％左右，較差儀器能到16％，導致界值附近樣本初復測不一致，出現陰陽反差。主要原因有兩方面：一個是低值區反應梯度較小，另一個是發光值變異較大(常規表現2.5％～5％)。反應梯度主要受原材料tshr的限制；發光值變異較大的原因之一為試劑溫敏，主要是tshr的穩定性差導致，當溫育盤變化±1℃，信號值偏差在15％-20％，濃度值偏差較大，界值附近偏差約50％，在溫控效果較差的儀器上表現更明顯；另一個原因可能是在粗純tshr為粗品，且效價低，投料比例高(1/25～1/30)，可能引入一些雜質。
5、為了提升穩定性，改善溫敏；提高使用效價，降低投料比；精純抗原，避免引入雜質；開發性能更優的tshr成為必要。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了促甲狀腺激素受體的突變體及其制備方法和應用。本專利技術提供的突變體提高了蛋白的穩定性，改善了溫敏性，同時提高了梯度和效價等功能，且不改變與酶標抗體及自身抗體結合的能力。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了促甲狀腺激素受體的突變體，將所述促甲狀腺激素受體野生型氨基酸的第321位～第360位氨基酸中的一個或多個刪除。
4、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體，將所述促甲狀腺激素受體野生型氨基酸的第321位～第360位氨基酸刪除。
5、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體具有：
6、(1)、如seq?id?no:1所示的氨基酸序列；或
7、(2)、如(1)所示的氨基酸序列經取代、缺失或添加一個或多個氨基獲得的氨基酸序列，且與(1)所示的氨基酸序列功能相同或相似的氨基酸序列；或
8、(3)、與(1)或(2)所示的氨基酸序列至少有80％同一性的氨基酸序列。
9、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體的序列如seq?id?no:1所示：
10、
11、
12、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體中所述促甲狀腺激素受體野生型氨基酸序列如seq?id?no:3所示：
13、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體的n端或c端還包括標簽蛋白；所述標簽蛋白包括：his、gst、mbp、strep、flag或fc中的一種或多種。
14、在本專利技術的一些實施方案中，上述突變體中的所述標簽蛋白為：flag。
15、本專利技術還提供了編碼上述突變體的核酸分子。
16、在本專利技術的一些實施方案中，上述核酸分子具有：
17、(4)、如seq?id?no:2所示的核苷酸序列；或
18、(5)、如(4)所示的核苷酸序列經取代、缺失或添加一個或多個堿基獲得的核苷酸序列，且與(4)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
19、(6)、與(4)或(5)所示的核苷酸序列至少有80％同一性的核苷酸序列。
20、在本專利技術的一些實施方案中，上述核酸分子的序列如seq?id?no:2所示：
21、
22、本專利技術還提供了重組載體，包括：上述核酸分子以及可接受的基因元件。
23、本專利技術還提供了宿主，轉化和/或轉染上述重組載體。
24、本專利技術還提供了上述突變體的制備方法，獲得上述宿主、培養、粗純、復溶、精純、平衡、解離后，獲得所述突變體。
25、在本專利技術的一些實施方案中，上述制備方法中，所述復溶包括膜蛋白去垢的步驟；所述膜蛋白去垢采用去污劑；所述去污劑包括：十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三甲基溴化銨、脫氧膽酸鈉、膽酸鈉、n-辛基-β-d-吡喃葡萄糖苷、十二烷基β-d-麥芽糖苷、tritonx-100、tritonx-114、吐溫-20、chaps和chapso中的一種或多種。
26、本專利技術還提供了上述突變體、上述核酸分子、上述重組載體、上述宿主和/或上述制備方法獲得的突變體在如下任意項中的應用；
27、(i)、制備檢測分析物tshr自身抗體的產品；和/或
28、(ii)、檢測分析物tshr自身抗體；和/或
29、(iii)、制備檢測tshr單克隆抗體或患者trab的產品；和/或
30、(iv)、制備吸收循環中的患者trab的藥物；和/或
31、(v)、制備篩選小分子片段以鑒別新的小分子的藥物骨架。。
32、在本專利技術的一些實施方案中，突變體29(突變體mut-29)的氨基酸序列是在野生型如seq?id?no:3序列的基礎上將443位的h突變為n。
33、在本專利技術的一些實施方案中，突變體11(突變體mut-11)的氨基酸序列是在野生型如seq?id?no:3序列的基礎上將59位的l突變為f。
34、在本專利技術的一些實施方案中，突變體18(突變體mut-18)的氨基酸本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.促甲狀腺激素受體的突變體，其特征在于，將所述促甲狀腺激素受體野生型氨基酸的第321位～第360位氨基酸中的一個或多個刪除。
2.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，其具有：
3.如權利要求1或2所述的突變體，其特征在于，所述突變體的N端或C端還包括標簽蛋白；所述標簽蛋白包括：GST、MBP、Flag或FC中的一種或多種。
4.編碼如權利要求1至3任一項所述突變體的核酸分子。
5.如權利要求4所述的核酸分子，其特征在于，其具有：
6.重組載體，其特征在于，包括：如權利要求4或5所述的核酸分子以及可接受的基因元件。
7.宿主，其特征在于，轉化和/或轉染如權利要求6所述的重組載體。
8.如權利要求1至3任一項所述突變體的制備方法，其特征在于，獲得如權利要求7所述的宿主、培養、粗純、復溶、精純、平衡、解離后，獲得所述突變體。
9.如權利要求8所述的制備方法，其特征在于，所述復溶包括膜蛋白去垢的步驟；所述膜蛋白去垢采用去污劑；所述去污劑包括：十二烷基硫酸鈉、十六烷基三甲基溴化銨、十二烷基三
10.如權利要求1至3任一項所述的突變體、如權利要求4或5所述的核酸分子、如權利要求6所述的重組載體、如權利要求7所述的宿主和/或如權利要求8或9所述制備方法獲得的突變體在如下任意項中的應用；
...【技術特征摘要】
1.促甲狀腺激素受體的突變體，其特征在于，將所述促甲狀腺激素受體野生型氨基酸的第321位～第360位氨基酸中的一個或多個刪除。
2.如權利要求1所述的突變體，其特征在于，其具有：
3.如權利要求1或2所述的突變體，其特征在于，所述突變體的n端或c端還包括標簽蛋白；所述標簽蛋白包括：gst、mbp、flag或fc中的一種或多種。
4.編碼如權利要求1至3任一項所述突變體的核酸分子。
5.如權利要求4所述的核酸分子，其特征在于，其具有：
6.重組載體，其特征在于，包括：如權利要求4或5所述的核酸分子以及可接受的基因元件。
7.宿主，其特征在于，轉化和/或轉染如權利要求6所述的重組載體。
8.如權利要求1至3任...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李桂林，張偉濤，李松瑞，牛珮云，雷恩，李玲玲，趙艷芳，聶銘杰，田曉平，趙巧輝，付光宇，楊增利，吳學煒，
申請(專利權)人：鄭州伊美諾生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。