【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及體外胚胎，尤其是涉及漆黃素在制備促進胚胎發育產品中的應用。
技術介紹
1、近年來，體外胚胎生產(ivep)是一項對動物的遺傳改良具有重要意義的重要技術，可用于農業生產、輔助生殖技術和雌性動物的早期胚胎發育。它被認為是通過母系進行遺傳改良的重要工具，因此選擇雌性卵子的質量不亞于人工授精中的高標準精子。數據顯示，2021年度牛胚胎體外培養總數為1,499,136枚，幾乎是體內胚胎數量的4倍。然而，盡管不斷優化體外成熟和發育介質配方，仍然很難模擬最優的胚胎體外培養環境，胚胎的質量和后續發育仍然較低，特別是在豬的體外胚胎生產系統中。因此，不斷發展和優化這些培養體系對提高豬早期胚胎質量具有重要意義。
2、胚胎體外培養是指通過人工模擬胚胎在母體輸卵管和子宮的發育微環境，包括養分充足及ph、適宜的培養基、溫度、濕度得氣體環境等，使通過體外受精或單精子顯微注射等技術獲得的早期胚胎在體外環境中持續發育。這一過程胚胎常常以囊胚的形式植入母體，這樣能獲得較高的胚胎植入率。但是，因為體外環境的氧氣含量比體內高，體外操作的胚胎容易受到氧化應激的影響，且早期胚胎對氧化應激引起的損傷較為敏感。因此考慮在早期胚胎的體外培養基中添加具有抗氧化活性的天然產物以降低胚胎氧化應激水平。現有研究已經證明在體外培養基中添加具有抗氧化活性的物質茴香腦、山奈酚和褪黑素等可以降低胚胎的氧化應激水平，從而提高胚胎的發育率和質量。由于豬的卵母細胞與人的相似之處，本研究使用豬卵母細胞為研究模型進行后續探索。
3、漆黃素(fisetin)是一種具有
技術實現思路
1、本專利技術旨在至少解決現有技術中存在的技術問題之一。為此，本專利技術提出了漆黃素在制備促進胚胎發育產品中的應用，該成分能夠有效促進胚胎發育能力和質量。
2、根據本專利技術的第一方面，提出了漆黃素在制備促進胚胎發育產品中的應用。
3、根據本專利技術的一種優選的實施方式，至少具有以下有益效果：
4、漆黃素(fis)，天然黃酮醇類化合物，可用于癌癥和神經損傷等疾病的研究，其具有如下化學結構式：
5、
6、本專利技術首次公開了漆黃素在制備提高體外胚胎發育能力藥物中的應用，此前未見報道漆黃素與體外胚胎發育能力相關，拓展了漆黃素的應用范圍。
7、本專利技術首次將漆黃素應用于胚胎
，特別是涉及涉及哺乳動物植入前胚胎體外培育技術。本專利技術發現漆黃素在植入前胚胎發育的過程中可以提高胚胎的囊胚形成率，增加胚胎的總細胞數；該成分還可增加早期胚胎細胞的線粒體功能和細胞增殖；該成分還可降低內質網應激標志蛋白grp78水平，防止胚胎發生更多的氧化應激，從而提高體外胚胎培養質量以及發育能力，有利于體外胚胎培養。
8、漆黃素是一種黃酮醇類化合物，也可以用于制藥。對哺乳動物細胞無毒副作用，來源廣泛，容易獲得，在培養基中添加漆黃素，操作簡單，易于控制，效果顯著。
9、漆黃素可用于制備促進胚胎發育的藥物組合物、培養基或試劑盒等，具有良好的應用前景。
10、根據本專利技術的一些實施方式，所述產品為試劑盒、培養基或藥物。
11、根據本專利技術的一些實施方式，所述促進胚胎發育包括提高胚胎質量或提高胚胎發育能力中的至少一種。
12、根據本專利技術的一些實施方式，所述促進胚胎發育包括提高胚胎囊胚率、增加胚胎總細胞數、提高胚胎增殖能力、增強胚胎細胞線粒體功能和降低內質網應激標志蛋白水平中的至少一種。
13、漆黃素可以通過提高囊胚形成率，增加總細胞數，有效保護線粒體功能，促進胚胎增殖能力，同時緩解內質網應激標志無grp78水平，從而有效提高體外胚胎的發育質量以及發育能力。
14、根據本專利技術的一些實施方式，通過提高體外胚胎的囊胚形成率來提高體外胚胎的質量以及發育能力。
15、通過體外胚胎囊胚形成率測試所驗證的，相對于未施用本專利技術產品的情況，施用本專利技術產品使體外胚胎囊胚形成率提高了32.32±15.28％。
16、根據本專利技術的一些實施方式，通過增加體外胚胎的總細胞數來提高體外胚胎的質量以及發育能力。
17、胚胎內總細胞數增加代表胚胎分裂水平提高，進而反映體外胚胎的質量。
18、通過體外胚胎總細胞數測試所驗證的，相對于未施用本專利技術產品的情況，施用本專利技術產品使體外胚胎總細胞數提高了17.07±0.19％。
19、根據本專利技術的一些實施方式，通過增強體外胚胎細胞的線粒體功能來提高體外胚胎的質量以及發育能力。
20、線粒體是細胞代謝活動的中心，參與三磷酸腺苷(atp)的能量生成和許多生物合成，并維持細胞內鈣離子穩態，調節各種酶代謝物、氨基酸和輔助因子的細胞水平。線粒體主要通過氧化磷酸化反應產生能量，再利用三羧酸循環酶產生電子載流子，將電子遞送給電子傳遞鏈，調節氧化還原反應。但是產生活性氧的主要部位也是線粒體，過量的活性氧會導致卵母細胞線粒體功能障礙，使dna、脂質膜和蛋白質發生損傷，以及細胞分裂停止。
21、通過體外胚胎線粒體功能測試所驗證的，相對于未施用本專利技術產品的情況，施用本專利技術產品使體外胚胎線粒體功能提高了14.00±1.29％。
22、根據本專利技術的一些實施方式，通過提高體外胚胎的細胞增殖能力提高體外胚胎的質量以及發育能力。
23、優選地，通過檢測/計算體外胚胎edu陽性細胞數與細胞總數之比計算增殖率評價體外胚胎的增殖水平。
24、細胞增殖是生物體的重要生命特征，細胞以分裂的方式進行增殖，是生物體生長、發育、繁殖和遺傳的基礎。細胞增殖是指細胞在周期調控因子的作用下，通過dna復制、rna轉錄和蛋白質合成等復雜反應而進行的分裂系列過程，其中核dna的復制倍增是整個過程的重要特征。細胞增殖可用于評估細胞的健康狀況、測定對毒性損傷的反應或用作多種刺激的預后和診斷工具。可用標志物通常取決于dna水平或合成、細胞代謝或增殖特異性蛋白。通過在細胞中過表達或干擾某個基因研究基因對細胞增殖能力的影響，進一步研究基因的功能，或對細胞進行藥物處理，研究藥物對增殖的影響。
25、通過體外胚胎增殖能力測試所驗證的，相對于未施用本專利技術產品的情況，施本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.漆黃素在制備促進胚胎發育產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述產品為試劑盒、培養基或藥物。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述促進胚胎發育包括提高胚胎質量或提高胚胎發育能力中的至少一種。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述所述促進胚胎發育包括提高胚胎囊胚率、增加胚胎總細胞數、提高胚胎增殖能力、增強胚胎細胞線粒體功能和降低內質網應激標志蛋白水平中的至少一種。
5.一種促進胚胎發育的產品，其特征在于，所述產品的原料包括漆黃素。
6.根據權利要求5所述的產品，其特征在于，所述產品為試劑盒、培養基或藥物。
7.漆黃素在體外促進豬卵母細胞胚胎發育的產品中的用途。
8.一種體外促進豬卵母細胞胚胎發育的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟：
9.根據權利要求8所述的用途，其特征在于，所述漆黃素的有效量為0.01～1μmol/L；優選地，所述漆黃素的有效量為0.05～0.8μmol/L；更優選地，所述漆黃素的有效量為0.1μmol/L。
【技術特征摘要】
1.漆黃素在制備促進胚胎發育產品中的應用。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于：所述產品為試劑盒、培養基或藥物。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述促進胚胎發育包括提高胚胎質量或提高胚胎發育能力中的至少一種。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述所述促進胚胎發育包括提高胚胎囊胚率、增加胚胎總細胞數、提高胚胎增殖能力、增強胚胎細胞線粒體功能和降低內質網應激標志蛋白水平中的至少一種。
5.一種促進胚胎發育的產品，其特...
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