【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物質能源領域，具體涉及一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法。
技術介紹
1、生物質能源相較傳統化石能源在環保性和經濟性上有得天獨厚的優勢，以微藻為原料制備的生物柴油在燃燒性能上與化石燃油具有相似的物理化學性質（碳鏈長度、能量密度等），但燃燒效率和減少sox、nox等有毒氣體排放方面均優于化石燃油，更趨于可持續發展理念。目前利用微藻制備生物柴油仍面臨許多限制和挑戰，最大的困難是原料藻種油脂產率相對較低導致下游加工成本（如提純、轉化等）居高不下。
2、通過育種能有效提高微藻油脂產率，降低后續加工的經濟成本。等離子體誘變育種在操作上較為簡單的同時還具有杰出的誘變效率，是一種應用前景廣闊的育種技術。另一方面，誘變具有隨機性，以往特征微藻誘變的篩選包括直接指標（如油脂含量、比生長率等）、直接指標組合對比或表型功能性篩選，存在測試量大、篩選周期長、效率低下的問題。近年來也出現利用自動化設備高通量篩選的方法，盡管此類方法篩選速度快、效率高，但其昂貴的設備成本是廣泛應用的最大阻礙。
技術實現思路
1、本專利技術的目的在于提供一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，解決了現有的高產油微藻的篩選方法存在效率低或成本高的缺陷。
2、為了達到上述目的，本專利技術采用的技術方案是：
3、本專利技術提供的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，?包括以下步驟：
4、步驟1，將待誘變藻液培養至對數期，得到藻液培養液，
5、步驟2，利用等離子體將藻液進行誘變，得到誘變藻落；
6、步驟3，將得到的誘變藻落進行稀釋，得到稀釋后的藻液；
7、步驟4，將得到的稀釋后的藻液均勻涂布于含有抑制劑的固體培養基上進行培養，得到突變藻株；
8、步驟5，從得到的突變藻株中篩選得到高產油突變藻株；
9、其中，含有抑制劑的固體培養基制備方法是：
10、將碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚添加至液體培養基中，形成含有抑制劑的固體培養基。
11、優選地，步驟1中，藻液的濃度為（1～2）×106個/ml。
12、優選地，步驟2中，利用等離子體將藻液進行誘變，得到誘變藻落，具體方法是：
13、將藻液放入等離子體反應釜中，以設定的輸入電壓、電流和空氣流量對藻液進行不同時間的誘變，得到不同時間對應的初始誘變藻液；
14、計算不同時間對應的初始誘變藻液的致死率；
15、從致死率大于設定閾值的初始誘變藻液中獲取得到誘變藻落。
16、優選地，步驟3中，將得到的誘變藻液進行稀釋，得到稀釋后的藻液，具體方法是：
17、將得到的誘變藻落放置滅菌后的甘油保護液中進行暗適應，得到稀釋后的藻液，其中，稀釋后的藻液濃度為（0.5～1）×104個/ml。
18、優選地，所述甘油保護液由甘油和bg-11液體培養基組成，其中，甘油保護液中的甘油體積分數為10%。
19、優選地，碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚添加至液體培養基后分別濃度為0.001?mm/l、0.2mm/l和0.12?mm/l。
20、優選地，步驟5，從得到的突變藻株中篩選得到高產油突變藻株，具體方法是：
21、將得到的突變藻株接種于bg-11液體培養基中并置于恒溫光照培養箱內進行分批培養，在對突變藻株進行培養過程中，利用三指標篩選原則篩選得到高產油突變藻株。
22、優選地，三指標篩選原則具體是：
23、以比生長速率大于正常株的10%，且以相對熒光值大于正常株20%為第一篩選原則；
24、以比生長速率和相對熒光值的乘積值大于對照株的35%為第二篩選原則。
25、一種產油微藻，基于所述方法篩選得到。
26、一種用于篩選產油微藻的組合抑制劑，包括碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚，其中，碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚添加至液體培養基后濃度分別為0.001?mm/l?、0.2mm/l和0.12mm/l。
27、與現有技術相比，本專利技術的有益效果是：
28、本專利技術提供的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，通過dbd等離子體對藻液進行誘變，并利用添加組合抑制劑的固體培養基進行初篩和三指標篩選原則復篩的方法，在提高篩選效率、減少測試工作量的前提下能保證篩選的準確性，對篩選設備的要求較低，使該專利技術的適用性廣泛，任何實驗室均可完成。
29、進一步的，碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚三種酶抑制劑組合添加至bg-11培養基作為初篩能過濾掉一部分特征油脂積累潛力弱的藻株（能在抑制劑固體平板上長出的藻落，說明誘變提高了相應酶活性，突破了抑制，具有強大的特征油脂積累潛力）。
30、進一步的，本專利技術利用dbd等離子體先通過致死率獲得最佳誘變時間，同時根據抑制劑液體培養和固體培養效果確定組合添加至固體篩選培養基的濃度，建立組合抑制劑固體培養基初篩平臺。在此基礎上對最佳誘變時間下的突變藻株進行抑制劑初篩和綜合指標精確篩選，獲得了最終高產油突變藻株。相比較目前已有的篩選方法，該篩選辦法可以減少指標測試帶來的工作量，節省篩選時間，可以更有效地篩選出目標藻株。
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1.一種用于篩選產油微藻的組合抑制劑，其特征在于，包括碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚，其中，碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚添加至液體培養基后濃度分別為0.001?mM/L?、0.2mM/L和0.12?mM/L。
2.一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟1中，藻液的濃度為（1～2）×106個/mL。
4.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟2中，利用等離子體將藻液進行誘變，得到誘變藻落，具體方法是：
5.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟3中，將得到的誘變藻液進行稀釋，得到稀釋后的藻液，具體方法是：
6.根據權利要求5所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，所述甘油保護液由甘油和BG-11液體培養基組成，其中，甘油保護液中的甘油體積分數為10%。
7.根據權利要求2
8.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟5，從得到的突變藻株中篩選得到高產油突變藻株，具體方法是：
9.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，三指標篩選原則具體是：
10.一種產油微藻，其特征在于，基于權利要求2所述方法篩選得到。
...【技術特征摘要】
1.一種用于篩選產油微藻的組合抑制劑，其特征在于，包括碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚，其中，碘乙酸、精喹禾靈和芝麻酚添加至液體培養基后濃度分別為0.001?mm/l?、0.2mm/l和0.12?mm/l。
2.一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，包括以下步驟：
3.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟1中，藻液的濃度為（1～2）×106個/ml。
4.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟2中，利用等離子體將藻液進行誘變，得到誘變藻落，具體方法是：
5.根據權利要求2所述的一種組合抑制劑協同等離子體誘變篩選產油微藻的方法，其特征在于，步驟3中，將得到的誘變藻液進行稀釋，得到稀釋后的藻液，具體方法...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李鵬飛，鄒濤圳，張卓婷，何緒豪，李瑞丹，
申請(專利權)人：江西理工大學，
類型：發明
國別省市：
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