【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于血漿中藥物檢測，尤其是涉及一種快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法。
技術(shù)介紹
1、鎮(zhèn)靜催眠類藥物的種類繁多，除經(jīng)典的苯二氮?類藥物（地西泮、阿普唑侖、勞拉西泮、三唑侖、咪達(dá)唑侖、硝西泮、氯硝西泮、氟硝西泮、奧沙西泮和艾司唑侖）外，新型鎮(zhèn)靜催眠類藥物扎來普隆、佐匹克隆及唑吡坦亦被廣泛應(yīng)用。臨床上，過量服用鎮(zhèn)靜催眠類藥物導(dǎo)致的中毒病例十分常見，該類中毒患者可由輕度的鎮(zhèn)靜催眠發(fā)展至昏迷甚至死亡。
2、鎮(zhèn)靜催眠類藥物中毒患者入院后，通常意識不清或昏迷，臨床醫(yī)生難以判斷中毒類型，因此，需采用快速、準(zhǔn)確的定性檢測方法，對該類患者進(jìn)行確診，進(jìn)而開展對癥治療。該類中毒患者的后期血液凈化治療過程中，需定量檢測人血漿中該類藥物的濃度，通過對比血液凈化前后的藥物濃度，來評估治療效果。
3、已有報(bào)道的鎮(zhèn)靜催眠類藥物檢測方法，因具有多種劣勢，致其無法在臨床使用：
4、（1）可檢測的藥物種類不全，缺乏扎來普隆、佐匹克隆及唑吡坦這些新型催眠類藥物。
5、（2）檢測方法不適宜，苯二氮?類藥物中不同藥物的極性相差很小，液相色譜-紫外法無法將該類藥物從色譜上基線分離，而不同藥物的結(jié)構(gòu)相似性使其在紫外光譜上也難以區(qū)分；此外，紫外檢測器靈敏度不足，無法檢測濃度在1μg/ml以下的低濃度樣本。盡管氣相色譜-質(zhì)譜法可有效改善分離度差的問題，但其檢測限集中在0.1-10μg/ml，仍無法解決靈敏度問題。
6、（3）已有報(bào)道的樣本處理方法多采用有機(jī)溶劑液液萃取后吹干復(fù)溶，不僅樣本需求量大，而且前處理復(fù)雜，
7、（4）不同種鎮(zhèn)靜催眠類藥物的治療濃度范圍、中毒預(yù)警濃度不同，已有報(bào)道的檢測線性范圍未完全覆蓋，導(dǎo)致應(yīng)用時無法準(zhǔn)確檢測。
8、（5）鎮(zhèn)靜催眠類藥物檢測如用于中毒患者，首先需要定性鑒別藥物種類，然后進(jìn)行定量檢測，目前臨床上并無可靠的定性判定方法。
9、因此，急需一種前處理方法簡單、線性范圍和靈敏度適宜、成本低廉、可快速精準(zhǔn)定性定量檢測人血漿樣本中13種鎮(zhèn)靜催眠藥的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本專利技術(shù)提供一種快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，以解決
技術(shù)介紹
中的問題。
2、本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案是：一種快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其包括步驟：將供試樣本與內(nèi)標(biāo)沉淀劑混勻，震蕩渦旋得供試樣本上清液，利用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對供試樣本上清液中的鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行定性和定量檢測；
3、超高效液相色譜的條件包括：梯度洗脫；流動相a為甲酸的乙腈溶液，甲酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%~1%；流動相b為含甲酸和甲酸銨的水溶液，甲酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%~1%，甲酸銨的濃度為5~20mm；
4、梯度洗脫時：初始時流動相b的占比≥90%，4min時流動相b的占比降至5%~10%，其中，流動相b占比的降速先慢后快。
5、進(jìn)一步的，超高效液相色譜的條件包括：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流速為0.3~0.5ml/min，柱溫為35~40℃，進(jìn)樣量為2~10μl。
6、進(jìn)一步的，梯度洗脫的條件為：
7、0.0min，流動相a，10%；流動相b，90%；
8、3.0min：流動相a，40%；流動相b，60%；
9、4.0min：流動相a，90%；流動相b，10%；
10、5.0min：流動相a，10%；流動相b，90%；
11、或者，
12、0.0min，流動相a，10%；流動相b，90%；
13、2.5min：流動相a，35%；流動相b，65%；
14、4.0min：流動相a，95%；流動相b，5%；
15、5.0min：流動相a，10%；流動相b，90%。
16、進(jìn)一步的，色譜柱填料的顆粒粒徑為1.7μm。
17、進(jìn)一步的，超高效液相色譜中色譜柱的型號為waters?acquity?beh?c18，色譜柱柱長為50mm，內(nèi)徑為2.1mm。
18、進(jìn)一步的，質(zhì)譜條件為：
19、正離子電噴霧離子源，多反應(yīng)監(jiān)測mrm，毛細(xì)管電壓為0.5~1.0kv，脫溶劑氣溫度400~500℃，脫溶劑氣流量為600~800l/hr，錐孔氣流速為40~60l/hr。
20、進(jìn)一步的，所述方法可檢測的13種鎮(zhèn)靜催眠藥包括：地西泮、阿普唑侖、勞拉西泮、三唑侖、咪達(dá)唑侖、硝西泮、氯硝西泮、氟硝西泮、奧沙西泮、艾司唑侖、佐匹克隆、唑吡坦、扎來普隆；利用所述方法檢測所述13種鎮(zhèn)靜催眠藥時，利用所述方法檢測所述13種鎮(zhèn)靜催眠藥時，內(nèi)標(biāo)沉淀劑中含有內(nèi)標(biāo)物和第二溶劑，內(nèi)標(biāo)物包括地西泮-d5和/或佐匹克隆-d4，第二溶劑中含有乙腈和甲酸，甲酸的體積分?jǐn)?shù)為0.01%~1%。
21、進(jìn)一步的，對供試樣本上清液進(jìn)行定性檢測的步驟包括：
22、配制質(zhì)控樣本，質(zhì)控樣本中含有鎮(zhèn)靜催眠藥標(biāo)準(zhǔn)品和空白血漿；
23、將質(zhì)控樣本和內(nèi)標(biāo)沉淀劑混勻，震蕩渦旋得質(zhì)控樣本上清液，利用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對質(zhì)控樣本上清液中的13種鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行分離和定性檢測，質(zhì)控樣本上清液和供試樣本上清液的檢測條件相同；
24、對比質(zhì)控樣本上清液和供試樣本上清液的檢測結(jié)果，依據(jù)保留時間、雙通道m(xù)rm色譜圖、子離子豐度比逐步判定供試樣本上清液中所含鎮(zhèn)靜催眠藥的種類。
25、進(jìn)一步的，對供試樣本上清液進(jìn)行定量檢測的步驟包括標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)樣本，其操作為：
26、配制標(biāo)準(zhǔn)樣本，標(biāo)準(zhǔn)樣本中含有鎮(zhèn)靜催眠藥標(biāo)準(zhǔn)品和空白血漿；將標(biāo)準(zhǔn)樣本與內(nèi)標(biāo)沉淀劑混勻，震蕩渦旋得標(biāo)準(zhǔn)樣本上清液，利用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對標(biāo)準(zhǔn)樣本上清液中的13種鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行分離和定量檢測，標(biāo)準(zhǔn)樣本上清液和供試樣本上清液的檢測條件相同；
27、以各鎮(zhèn)靜催眠藥的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)- x、各鎮(zhèn)靜催眠藥與內(nèi)標(biāo)物的色譜峰面積比為縱坐標(biāo)- y，采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行線性回歸，加權(quán)因子為1/ x2，分別得到13種鎮(zhèn)靜催眠藥的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程。
28、進(jìn)一步的，所述方法對13種鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行檢測的定量下限分別為：
29、地西泮：62.5ng/ml；
30、阿普唑侖：3.125ng/ml；
31、艾司唑侖：31.25ng/ml；
32、勞拉西泮：12.5ng/ml；
33、三唑侖：3.125ng/ml；
34、咪達(dá)唑侖：62.5ng/ml；
35、硝西泮：6.25ng/ml；
36、氟硝西泮：6.25ng/ml；
37、氯硝西泮：3.125ng/ml；
38、奧沙西泮：31.25ng/ml；
39、唑吡坦：12.5ng/ml；本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
1.一種快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，包括步驟：將供試樣本與內(nèi)標(biāo)沉淀劑混勻，震蕩渦旋得供試樣本上清液，利用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對供試樣本上清液中的鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行定性檢測和定量檢測；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，超高效液相色譜的條件包括：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流速為0.3~0.5mL/min，柱溫為35~40℃，進(jìn)樣量為2~10μL。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，梯度洗脫的條件為：
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，色譜柱填料的顆粒粒徑為1.7μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，超高效液相色譜中色譜柱的型號為Waters?ACQUITY?BEH?C18，色譜柱柱長為50mm，內(nèi)徑為2.1mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5任一所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，質(zhì)譜條件為：
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的快
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，對供試樣本上清液進(jìn)行定性檢測的步驟包括：
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，對供試樣本上清液進(jìn)行定量檢測的步驟包括標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)樣本，其操作為：
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9任一所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，所述方法對13種鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行檢測的定量下限分別為：
...【技術(shù)特征摘要】
1.一種快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，包括步驟：將供試樣本與內(nèi)標(biāo)沉淀劑混勻，震蕩渦旋得供試樣本上清液，利用超高效液相色譜聯(lián)用質(zhì)譜技術(shù)對供試樣本上清液中的鎮(zhèn)靜催眠藥進(jìn)行定性檢測和定量檢測；
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，超高效液相色譜的條件包括：色譜柱填料為十八烷基硅烷鍵合硅膠；流速為0.3~0.5ml/min，柱溫為35~40℃，進(jìn)樣量為2~10μl。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，梯度洗脫的條件為：
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，色譜柱填料的顆粒粒徑為1.7μm。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的快速檢測人血漿中鎮(zhèn)靜催眠藥的方法，其特征在于，超高效液相色譜中色譜柱的型號為waters?acquity?beh?c18，色譜柱柱長為50mm，內(nèi)徑為2.1mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-3、5任一所述的...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：袁恒杰，畢重文，蔡世嬌，李正翔，何慶，
申請(專利權(quán))人：天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院空港醫(yī)院，
類型：發(fā)明
國別省市：
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