【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體涉及利用大環類化合物制備抗體-藥物偶聯物的方法。
技術介紹
1、抗體-藥物偶聯物(antibody?drug?conjugate，adc)由與在靶細胞表面表達、且能向細胞內化的抗原結合的抗體上連接具有細胞毒性的藥物得到，包含抗體、連接子和細胞毒性藥物。其中，抗體部分將抗體-藥物偶聯物精準遞送至靶細胞表面，連接子部分負責在靶細胞內或表面釋放細胞毒性藥物，且在血液循環系統中保持穩定，從而促進釋放的細胞毒性藥物在靶細胞內蓄積，并殺死靶細胞。因其在多個適應癥上展現出卓越的臨床特性，當前adc已成為腫瘤學領域的關鍵治療方式，未來市場規模預計將持續增長。
2、在現有用于制備抗體偶聯藥物的方法中，通常需采用大量有機溶劑(含量可高達20vol％)以使連接子-藥物在反應體系中更好地溶解。而大量的有機溶劑的引入會使后續的純化變得困難，例如：溶解半透膜，使蛋白質在填料表面的吸附變得困難等。生產上可以稀釋反應液以使有機溶劑水平回歸至純化設備可以耐受的范圍之內，但這意味著純化設備需要處理的液體量大幅增加，對應的廢液量將以同樣的幅度增加以滿足純化效果。此外，使用部分連接子-藥物進行偶聯時，高含量有機溶劑通常會導致所得混合物中的d6比例較高，對產品質量有較大影響。
3、因此，希望能提供一種改進的抗體-藥物偶聯物的制備方法，在降低有機溶劑用量而提高生產效率的同時，改善生產所需抗體-藥物偶聯物的同質性。
技術實現思路
1、專利技術人通過長期探索實踐，提出了一種
2、本文在一個方面中提供一種抗體-藥物偶聯物的制備方法，包括：
3、(a)在過渡金屬離子存在的情況下，用還原劑處理抗體；和
4、(b)在大環類化合物存在的情況下，使連接子-藥物中間體與步驟(a)中獲得的經還原的抗體偶聯。
5、本文在另一個方面中提供大環類化合物用于改善生產的抗體-藥物偶聯物的同質性的用途。
6、本文在另一個方面中提供大環類化合物用于通過降低抗體-藥物偶聯物的生產過程中的有機溶劑用量以提高生產效率的用途。
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1.一種抗體-藥物偶聯物的制備方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟(b)之后，所述方法進一步包括：(c)添加有效量的氧化劑，以使步驟(b)中未反應的巰基再氧化；更具體地，所述氧化劑選自下組：5,5'-二硫代雙-2-硝基苯甲酸、4,4'-二硫代二吡啶、2,2'-二硫代二吡啶、連四硫酸鈉、脫氫抗壞血酸(DHAA)，及其組合；具體地，氧化劑選自DHAA。
3.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體，及其組合。
4.根據權利要3所述的方法，其中所述抗體是IgG1或IgG4亞型；具體地，所述抗體選自：曲妥珠單抗、利妥昔單抗、達雷妥尤單抗、西妥昔單抗，及其組合。
5.根據權利要求1所述的方法，其中所述過渡金屬離子選自下組：Zn2+、Cd2+、Hg2+、Mn2+、Ni2+、Fe2+、Fe3+、Cu2+，及其組合；更具體地，選自Zn2+。
6.根據權利要求5所述的方法，其中步驟(a)在緩沖體系中進行；具體地，所述緩沖體系選自下組：N-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸緩沖體系(TAPS)、N,N
7.根據權利要求1所述的方法，其中所述還原劑選自下組：三(2-羧乙基)膦(TCEP)或其鹽、二硫蘇糖醇(DTT)、2-巰基乙醇(2-ME)、三(3-羥丙基)膦(THPP)、2-二苯基膦基苯磺酸(diPPBs)、二硫赤蘚醇(DTE)、LiAlH4、Na2S2O3、KBH4、肼，及其組合；具體地，選自三(2-羧乙基)膦或其鹽。
8.根據權利要求1所述的方法，其中所述大環類化合物包括：卟啉、冠醚、柱芳烴、環糊精、杯芳烴及其組合；具體地，所述大環類化合物是環糊精類化合物；更具體地，所述環糊精類化合物選自α-環糊精、羥丙基-α-環糊精、羥丙基-β-環糊精、β-環糊精、羥丙基-γ-環糊精，及其組合。
9.根據權利要求8所述的方法，其中所述環糊精類化合物與抗體的摩爾比為約10:1-1000:1，具體地為約20:1-1000:2，更具體地為約30:1-1000:3。
10.根據權利要求1所述的方法，其中步驟(a)在-10℃至37℃的溫度范圍和pH5至9進行；進一步地，步驟(b)在-10℃至37℃的溫度范圍進行，持續0.5-2小時。
...【技術特征摘要】
1.一種抗體-藥物偶聯物的制備方法，包括：
2.根據權利要求1所述的方法，其中在步驟(b)之后，所述方法進一步包括：(c)添加有效量的氧化劑，以使步驟(b)中未反應的巰基再氧化；更具體地，所述氧化劑選自下組：5,5'-二硫代雙-2-硝基苯甲酸、4,4'-二硫代二吡啶、2,2'-二硫代二吡啶、連四硫酸鈉、脫氫抗壞血酸(dhaa)，及其組合；具體地，氧化劑選自dhaa。
3.根據權利要求1所述的方法，其中所述抗體選自單克隆抗體、多克隆抗體，及其組合。
4.根據權利要3所述的方法，其中所述抗體是igg1或igg4亞型；具體地，所述抗體選自：曲妥珠單抗、利妥昔單抗、達雷妥尤單抗、西妥昔單抗，及其組合。
5.根據權利要求1所述的方法，其中所述過渡金屬離子選自下組：zn2+、cd2+、hg2+、mn2+、ni2+、fe2+、fe3+、cu2+，及其組合；更具體地，選自zn2+。
6.根據權利要求5所述的方法，其中步驟(a)在緩沖體系中進行；具體地，所述緩沖體系選自下組：n-三(羥甲基)甲基-3-氨基丙磺酸緩沖體系(taps)、n,n-雙(2-羥乙基)甘氨酸緩沖體系(bicine)、三羥甲基氨基甲烷緩沖體系(tris)、n-三(羥甲基)甲基甘氨酸緩沖體系(tricine)、n-三(羥甲基)甲基-2-氨基乙烷磺酸緩沖體系(tes)、3-(n-嗎啉基)丙磺酸緩沖體系(mop...
【專利技術屬性】
技術研發人員：王澤坤，毛威芃，李雨鑫，原玉潔，范啟睿，
申請(專利權)人：上海藥明合聯生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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