【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于分子生物學及遺傳育種，具體涉及一種與甘藍型油菜種子脂肪酸組分顯著關聯的位點qfac.c9-1的分子標記及應用。
技術介紹
1、目前，油菜育種的主要目標包括抗性、產量和品質。這些性狀都是復雜的數量性狀，受眾多基因共同調控而且易受環境條件的影響，傳統的育種方法和技術手段很難實現這些性狀的精準改良和突破。隨著分子標記技術的快速進步和基因編輯等新興生物技術的廣泛運用，使得這些性狀的分子改良成為可能。
2、油菜品質性狀主要包括油菜種子含油量與蛋白質含量、油中各脂肪酸組分含量、油菜籽餅粕中硫代葡萄糖苷(硫苷)及其組分含量、纖維素與植酸含量等等。油菜種子脂肪酸組分主要包括棕櫚酸(c16:0)、硬脂酸(c18:0)、油酸(c18:1)、亞油酸(c18:2)、亞麻酸(c18:3)、花生烯酸(20:1)及芥酸(22:1)七種。脂肪酸合成系統首先是合成鏈長十八碳及十六碳的飽和脂肪酸后，飽和脂肪酸再經去飽和系統產生不飽和脂肪酸，或在脂肪酸延長酶基因(fae?l)的調控下，經超長鏈脂肪酸合成系統合成二十碳烯酸或芥酸。油酸作為一種單不飽和脂肪酸，無論食用還是工業用價值都較高。作為食用油，提高菜籽油中的油酸含量，可以減少肥胖人群的心血管疾病發生率，降低血液中低密度脂蛋白膽固醇含量，預防動脈硬化；高油酸油可以阻止脂質氧化，延長油的保質期，延長貨架時間；此外，高油酸菜籽油在被加熱時可以保證被加熱到較高溫度時少冒煙，縮短烹飪時間，降低損耗量；高油酸菜籽油能保證菜油熱穩定性，同時還能保證食物被煎炸后具有良好的香味(熊秋芳等，2014)。工業
3、利用連鎖和/或關聯定位的方法(鮑丙浩等，2021；蔡東芳等，2016；李施蒙，2016；劉列釗，2014；蒙姜宇，2019；楊盛強，2010；葉桑，2019；張潔夫，2008；burn等，2011；chen等，2018；li等，2014；smooker等，2011；wang等，2015；yan等，2011；zhao等，2008)，油菜中已定位到一批控制種子脂肪酸組分含量的數量性狀基因位點(qtl)。其中兩個主效qtl位于a8和c3染色體上，對應fae1的不同拷貝(li等，2014)。然而，這些qtl不足以解釋油菜種質資源種脂肪酸組份含量的變異，這表明仍有新的脂肪酸組分含量調控位點亟待發掘。
4、本專利技術利用油菜核心關聯群體和高密度snp基因型數據對種子脂肪酸組分進行8個環境下的全基因組關聯分析，旨在找到新的穩定的關聯位點，并據此開發實用的高通量低成本的分子標記，用于對油菜種子脂肪酸組成的分子改良。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是在于提供了檢測甘藍型油菜c09染色體上第3,592,310位堿基的試劑在甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種中的應用。
2、本專利技術另一個目的在于提供了檢測甘藍型油菜c09染色體上第3,592,310位堿基的引物在甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種中的應用。
3、本專利技術的最后一個目的在于提供了甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種的方法。
4、為了達到上述目的，本專利技術采取以下技術措施：
5、甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量顯著關聯parms標記的獲得：
6、(1)提取本團隊構建的甘藍型油菜核心關聯群體331份材料(li等，2020)的總dna，利用油菜60k?snp芯片(clarke等，2016)對每個樣本進行基因型分析。
7、(2)利用illumina?beadstudio基因分型軟件(http://www.illumina.com/)計算群體材料在每個位點的標記雜合率(heterozygous?rate)、缺失率(missing?rate)、最小等位基因頻率(minor?allele?frequency)。去掉無多態性、缺失比列高、無純合基因型、等位基因頻率低、雜合基因型頻率高、位置不確定和多拷貝標記，最后獲得24508個高質量snp標記用于后續分析。
8、(3)將本團隊構建的甘藍型油菜核心關聯群體331份材料分別在南昌2014、武漢2012-2016、鄭州2013-2014八個環境種植(代號為n14,w12,w13,w14,w15,w16,z13,z14)，成熟期每個小區收獲10株晾干脫粒，用近紅外儀法測定脂肪酸組分含量(qiu等，2006)：包括、花生烯酸(ara)、芥酸(eru)、亞油酸(lol)、亞麻酸(lon)、油酸(ole)、棕櫚酸(pal)、硬脂酸(ste)。
9、(4)結合核心關聯群體的脂肪酸組成性狀表型數據、基因型數據和群體結構，利用tassel?5.0軟件(bradbury?et?al.,2007)進行關聯分析。最終在油菜darmorv4參考基因組c09染色體上獲得與多種脂肪酸組分顯著關聯的位點qfac.c9-1，其峰值snp標記bn-scaff_17190_1-p9206位于第3,592,310位堿基處(堿基為a或g)，可以在八個環境中被重復檢測到。
10、(5)提取油菜c09染色體第3,592,310位堿基上下游各100b本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.檢測甘藍型油菜C09染色體上第3,592,310位堿基的試劑在甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種中的應用。。
2.根據權利要求1所述的應用，所述的試劑為引物。
3.根據權利要求2所述的應用，所述的引物為：qFAC.C9-1R：TATGCTTGTTCCAACGGGTCT；qFAC.C9-1Ft：gaaggtgaccaagttcatgctTCCAGTCCACTTTGACAAAGCT；qFAC.C9-1Fc：gaaggtcggagtcaacggattCCAGTCCACTTTGACAAAGCC。
4.一種甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種的方法，所述的方法包括檢測甘藍型油菜C09染色體上第3,592,310位堿基，所述的檢測的方法包括：測序法、TaqMan探針法、AS-PCR法、分子信標法、高分辨率溶解曲線法、CAPS法、SNaPshot法、KASP法、PARMS法、基因芯片法、質譜法；
【技術特征摘要】
1.檢測甘藍型油菜c09染色體上第3,592,310位堿基的試劑在甘藍型油菜種子脂肪酸組分含量篩選育種中的應用。。
2.根據權利要求1所述的應用，所述的試劑為引物。
3.根據權利要求2所述的應用，所述的引物為：qfac.c9-1r：tatgcttgttccaacgggtct；qfac.c9-1ft：gaaggtgaccaagttcatgcttccagtccactttgacaaagct；qfa...
【專利技術屬性】
技術研發人員：師家勤，王漢中，王新發，劉貴華，王瑩，孫慶斌，
申請(專利權)人：中國農業科學院油料作物研究所，
類型：發明
國別省市：
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