【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫藥，尤其涉及一種巨噬細胞活化抑制劑及其應用。
技術介紹
1、巨噬細胞(?macrophage，mφ)?是機體內廣泛存在的一類固有的免疫細胞，具有吞噬和清除病原體、加工和提呈抗原、釋放炎性細胞因子、介導免疫反應等多種生物學功能，是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。
2、巨噬細胞在機體的各種組織中均有分布，其在發育早期階段就能通過執行特定免疫反應對抗不同類型病原微生物感染，因此是宿主防御系統必不可少的部分。巨噬細胞被發現在炎性應答中發揮重要的調節作用，其作為炎癥階段的主要吞噬細胞，負責清除機體損傷處組織和細胞的壞死碎片以及病原體等，這些物質對創傷愈合過程都有重要的調控作用。但是，炎癥反應結束后，巨噬細胞如果繼續活化也會對機體產生不利影響。例如，ehrentraut等研究發現，改變巨噬細胞的活化狀態可以調節急性肺損傷的病理發生；barreto等研究發現，光蛋白聚糖可調節巨噬細胞極化，促進骨關節炎的發生。因此，如何調節巨噬細胞的活化，為后續深入探討炎癥及巨噬細胞活化相關疾病的臨床治療提供具有重要意義。
3、β-羥基-β-甲基丁酸（hmb）是支鏈氨基酸亮氨酸分解后形成的具有一定生物活性的代謝產物，是一種人體內天然產生的物質，安全無副作用。hmb在體內能夠促進蛋白質合成和抑制蛋白質分解，從而有助于增加肌肉質量和力量，可用作膳食補充劑，也可用作某些旨在促進傷口愈合的醫療食品的成分。但是，目前并沒有現有技術揭示hmb對巨噬細胞活化的影響。
技術實現思路>
1、本專利技術的目的在于提供一種巨噬細胞活化抑制劑及其應用，利用hmb來抑制巨噬細胞活化，為后續炎癥及巨噬細胞活化相關疾病的臨床治療提供了新的治療藥物。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑中包含hmb。
4、優選的，所述巨噬細胞活化抑制劑還包括藥學上允許的一種或多種輔料。
5、優選的，所述巨噬細胞活化抑制劑可預防、改善或治療因巨噬細胞活化而引發的疾病。
6、本專利技術還提供了一種巨噬細胞活化抑制劑在制備治療巨噬細胞活化相關疾病的藥物上的應用。
7、優選的，所述巨噬細胞活化相關疾病包括：急性肺損傷、感染性疾病、炎癥性腸病。
8、本專利技術還提供了一種外源添加巨噬細胞活化抑制劑hmb來緩解巨噬細胞活化的應用，包括如下步驟：
9、（1）細胞培養：
10、分離培養巨噬細胞，使用lps誘導巨噬細胞活化后，外源添加hmb繼續培養；
11、（2）細胞增殖活力檢測：
12、取步驟（1）外源添加hmb繼續培養結束后的巨噬細胞，采用cck8檢測細胞增殖活力；
13、（3）cd80、cd86表達水平檢測：
14、對步驟（1）外源添加hmb繼續培養結束后的巨噬細胞的cd80、cd86表達水平進行流式檢測；
15、（4）qrt-pcr檢測炎癥因子水平：
16、提取步驟（1）外源添加hmb繼續培養結束后的巨噬細胞的總rna，并檢測其促炎細胞因子il-6、tnf-α、il-1β和inos的表達水平。
17、優選的，步驟（1）所述lps誘導巨噬細胞活化時，lps的用量為100ng/ml誘導時間為24h；步驟（1）所述外源添加hmb繼續培養時，hmb的濃度為25μm?，培養時間為2h。
18、優選的，步驟（3）所述流式檢測的方法為：
19、取培養結束后的巨噬細胞，在facs緩沖液中進行兩次洗滌，并重新懸浮，在添加了fc-γ受體cd16/cd32抗體的facs緩沖液中孵育30分鐘，然后，在4℃避光條件下，將巨噬細胞與偶聯了pe標記的抗cd86抗體以及偶聯了apc標記的抗cd80抗體，以熒光標記的同型igg作為同型對照，稀釋度為1∶100，在facs緩沖液中孵育30分鐘，并通過agilent?novocyte流式細胞儀進行細胞分析。
20、優選的，步驟（4）所述qrt-pcr檢測炎癥因子水平的具體步驟為：
21、trizol法提取巨噬細胞的總rna，核酸蛋白測定儀測定總rna濃度，利用實時熒光定量pcr系統，?按照takara?sybr?premix?ex?taq步驟進行目的基因mrna水平檢測。
22、本專利技術與現有技術相比的有益效果為：
23、hmb作為一種人體內天然產生的物質，安全性極高，無副作用，不會對身體健康產生損害。本專利技術通過實驗證實hmb可抑制巨噬細胞的活化，并通過降低巨噬細胞中il-6、tnf-α、il-1β和inos等促炎細胞因子的產生來減少巨噬細胞的浸潤，降低炎癥反應，進而調節免疫系統的功能，可用于預防或治療巨噬細胞活化相關疾病，為后續炎癥及巨噬細胞活化相關疾病的臨床治療提供了一種新的、安全性高的治療藥物。
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1.一種巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑中包含HMB。
2.根據權利要求1所述巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑還包括藥學上允許的一種或多種輔料。
3.根據權利要求1或2任一項所述巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑可預防、改善或治療因巨噬細胞活化而引發的疾病。
4.一種權利要求1~3任一項所述巨噬細胞活化抑制劑在制備治療巨噬細胞活化相關疾病的藥物上的應用。
5.根據權利要求4所述巨噬細胞活化抑制劑在制備治療巨噬細胞活化相關疾病的藥物上的應用，其特征在于，所述巨噬細胞活化相關疾病包括：急性肺損傷、感染性疾病、炎癥性腸病。
6.一種外源添加巨噬細胞活化抑制劑HMB來緩解巨噬細胞活化的應用，其特征在于，包括如下步驟：
7.根據權利要求6所述外源添加巨噬細胞活化抑制劑HMB緩解巨噬細胞活化的應用，其特征在于，步驟（1）所述LPS誘導巨噬細胞活化時，LPS的用量為100ng/ml，誘導時間為24h；步驟（1）所述外源添加HMB繼續培養時，HMB的濃度為25μ
8.根據權利要求6所述外源添加巨噬細胞活化抑制劑HMB緩解巨噬細胞活化的應用，其特征在于，步驟3）所述流式檢測的方法為：
9.據權利要求6所述外源添加巨噬細胞活化抑制劑HMB緩解巨噬細胞活化的應用，其特征在于，步驟（4）所述qRT-PCR檢測炎癥因子水平的具體步驟為：
...【技術特征摘要】
1.一種巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑中包含hmb。
2.根據權利要求1所述巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑還包括藥學上允許的一種或多種輔料。
3.根據權利要求1或2任一項所述巨噬細胞活化抑制劑，其特征在于，所述巨噬細胞活化抑制劑可預防、改善或治療因巨噬細胞活化而引發的疾病。
4.一種權利要求1~3任一項所述巨噬細胞活化抑制劑在制備治療巨噬細胞活化相關疾病的藥物上的應用。
5.根據權利要求4所述巨噬細胞活化抑制劑在制備治療巨噬細胞活化相關疾病的藥物上的應用，其特征在于，所述巨噬細胞活化相關疾病包括：急性肺損傷、感染性疾病、炎癥性腸病。
6.一...
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊姣，劉嬌，史肖華，鈕丹葉，湯雨，秦銀銀，潘淑波，
申請(專利權)人：蘇州科技城醫院，
類型：發明
國別省市：
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