【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物醫藥，具體涉及一種基于活細胞cba法的mog-igg自身抗體檢測試劑盒。
技術介紹
1、大量研究證實，血清mog-igg抗體是mogad（抗髓鞘少突膠質細胞糖蛋白免疫球蛋白g抗體相關疾病）的生物學標志物，具有致病性。目前臨床mog-igg抗體檢測方法為固定細胞cba法，其與活細胞cba法的區別在于底物細胞的狀態。固定細胞cba法底物細胞在與臨床樣本孵育前需要先進行固定，會導致抗原的空間構象破壞，影響其敏感性和特異性。
技術實現思路
1、鑒于此，本專利技術提供了一種基于活細胞cba法的mog-igg自身抗體檢測試劑盒，能夠穩定表達mog抗原，并保留mog抗原的完整空間構象，提高mog-igg自身抗體檢測靈敏度。
2、為達到上述目的，本專利技術采用以下技術方案：
3、本專利技術提供了一種基于活細胞cba法的mog-igg自身抗體檢測試劑盒，包括未經固定的gfp-mog-hek293活細胞株細胞片。
4、優選地，還包括pbs緩沖液、熒光二抗。
5、優選地，所述gfp-mog-hek293細胞株的制備方法包括以下步驟：
6、s1、構建gfp-mog重組質粒；
7、s2、將所述gfp-mog重組質粒進行質粒轉化、抽提，獲得gfp-mog慢病毒質粒；
8、s3、培養hek293細胞；
9、s4、將所述gfp-mog慢病毒質粒轉染hek293細胞后，培養篩選，獲得gfp-mog-he
10、優選地，在步驟s1中，構建gfp-mog重組質粒的具體步驟為：首先在mog目的基因兩端加設ecori/bamhi酶切位點；在lenti-cmv-mcs-3xflag-pgk-puro載體中插入ecori/bamhi酶切位點；通過dna?ligation?kit將mog目的基因插入載體中，獲得gfp-mog質粒。
11、優選地，在步驟s3中，培養hek293細胞時，將hek293細胞接種在含有10ml完全培養基的100mm細胞培養皿中進行培養。
12、優選地，完全培養基包括dmem、fbs以及p/s，其中，fbs占總體積的10%，p/s占總體積的1%。
13、優選地，在步驟s4中，所述gfp-mog慢病毒質粒轉染hek293細胞的步驟為：待hek293細胞生長密度達到60-80%時，將s2得到的慢病毒加入到培養hek293細胞的培養皿中，并加入聚凝胺，進行細胞慢病毒轉染；和/或，
14、在步驟s4中，轉染后，培養篩選的步驟為：感染72h后，加入終濃度為2ug/ml的嘌呤霉素，此后每隔2-3天換一次含2ug/ml嘌呤霉素的新鮮完全培養基，培養2周。
15、優選地，聚凝胺加入的最終濃度為5μg/ml；和/或，
16、轉染時間為12-20h。
17、優選地，未經固定的gfp-mog-hek293活細胞株細胞片的制備方法的步驟為：篩選成功的穩定表達mog的gfp-mog-hek293細胞株接種在6孔板中，使其貼壁生長至80-90%。
18、優選地，6孔板中鋪有載玻片，細胞株在載玻片上貼壁生長。細胞接種密度為1x106cells/ml，完全培養基包括dmem、fbs以及p/s，其中，fbs占總體積的10%，p/s占總體積的1%。
19、與現有技術相比，本專利技術的有益效果為：
20、（1）本專利技術的試劑盒中的gfp-mog-hek293細胞株可穩定表達mog抗原，并保留mog抗原的完整空間構象，提高mog-igg自身抗體檢測靈敏度。
21、（2）本專利技術提供的活細胞cba法檢測mog-igg技術，所獲得的gfp-mog-hek293細胞株可長期穩定培養，實現血清樣本的即時檢測，顯著縮短檢測時間。
本文檔來自技高網...【技術保護點】
1.一種基于活細胞CBA法的MOG-IgG自身抗體檢測試劑盒MOG-IgG自身抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括未經固定的GFP-MOG-HEK293活細胞株細胞片。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括PBS緩沖液、熒光二抗。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述GFP-MOG-HEK293細胞株的制備方法包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，在步驟S1中，構建GFP-MOG重組質粒的具體步驟為：首先在MOG目的基因兩端加設EcoRI/BamHI酶切位點；在Lenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro載體中插入EcoRI/BamHI酶切位點；通過DNA?Ligation?Kit將MOG目的基因插入載體中，獲得GFP-MOG質粒。
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，在步驟S3中，培養HEK293細胞時，將HEK293細胞接種在含有10mL完全培養基的100mm細胞培養皿中進行培養。
6.根據權利要求5所述的試劑盒，其特征在于，完全培養基包括DMEM、F
7.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，在步驟S4中，所述GFP-MOG慢病毒質粒轉染HEK293細胞的步驟為：待HEK293細胞生長密度達到60-80%時，將S2得到的慢病毒加入到培養HEK293細胞的培養皿中，并加入聚凝胺，進行細胞慢病毒轉染；和/或，
8.根據權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，聚凝胺加入的最終濃度為5ug/mL；和/或，
9.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，未經固定的GFP-MOG-HEK293活細胞株細胞片的制備方法的步驟為：篩選成功的穩定表達MOG的GFP-MOG-HEK293細胞株接種在6孔板中，使其貼壁生長至80-90%。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，6孔板中鋪有載玻片，細胞株在載玻片上貼壁生長。
...【技術特征摘要】
1.一種基于活細胞cba法的mog-igg自身抗體檢測試劑盒mog-igg自身抗體檢測試劑盒，其特征在于，包括未經固定的gfp-mog-hek293活細胞株細胞片。
2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，還包括pbs緩沖液、熒光二抗。
3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述gfp-mog-hek293細胞株的制備方法包括以下步驟：
4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，在步驟s1中，構建gfp-mog重組質粒的具體步驟為：首先在mog目的基因兩端加設ecori/bamhi酶切位點；在lenti-cmv-mcs-3xflag-pgk-puro載體中插入ecori/bamhi酶切位點；通過dna?ligation?kit將mog目的基因插入載體中，獲得gfp-mog質粒。
5.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，在步驟s3中，培養hek293細胞時，將hek293細胞接種在含有10ml完全培養基的100mm細...
【專利技術屬性】
技術研發人員：周勇，孫丹，曹盼，
申請(專利權)人：邁諾武漢醫學生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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