【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及免疫，特別涉及抗tpo的單克隆抗體及其制備方法和應用。
技術介紹
1、甲狀腺過氧化物酶(tpo)是一類大分子膜結合糖蛋白(103kd)，由933個氨基酸組成，位于甲狀腺卵泡細胞的頂膜中，僅在甲狀腺細胞中表達，是催化甲狀腺激素合成的關鍵酶。它的結構由細胞外結構區、跨膜區和細胞內結構區三部分組成。
2、tpo參與濾泡細胞頂端的甲狀腺激素合成，甲狀腺激素合成過程中扮演著重要的角色，大多數tpo就在甲狀腺細胞內降解。如果甲狀腺過氧化物酶的活性受到抑制或者被免疫系統攻擊，就可能導致甲狀腺激素合成障礙，進而引發甲狀腺疾病。當甲狀腺過氧化物酶抗體高時，意味著人體的免疫系統已經產生了對甲狀腺腺體的攻擊，這通常與自身免疫性甲狀腺疾病相關。如手術、外傷、感染和其它原因導致tpo外泄，引起自身免疫性反應，機體產生抗tpo的自身抗體，即甲狀腺過氧化酶抗體(tpo-ab)。且該酶可與tg協同作用將l-酪氨酸碘化，并將一碘酪氨酸和二碘酪氨酸聯結成為甲狀腺激素t4、t3和rt3。檢測該類抗體的主要適應證為自身免疫性甲狀腺疾病(包括突眼性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎等)，對該類疾病診斷具有重要意義。
3、tpo是一種潛在的自身抗原，tpo抗體是甲狀腺過氧化物酶抗體，即tpo-ab，是機體針對tpo而產生的自身抗體。同時，tpo-ab是一種含有血紅蛋白輔基的糖蛋白，存在于甲狀腺細胞的微粒體上。在橋本甲狀腺炎、graves病和特發性黏液水腫患者中多明顯升高，尤其以橋本甲狀腺炎明顯。在約65％graves病患者、95％的橋本甲狀腺炎或
4、總之，tpo-ab為自身免疫性甲狀腺病患者體內一種主要自身抗體，對于臨床診斷具有重要意義。它是診斷慢性自身免疫性甲狀腺疾病診斷的金標準。且tpo-ab可以激活補體，被認為是導致甲狀腺功能失調和甲狀腺功能減退的主要致病原因。此外，tpo檢測結果的準確性很大程度上由抗體性能所決定，一種反應性強、穩定性高的抗體將有助準確和快速檢測tpo水平。現有技術中單克隆抗體的制備過程很繁瑣，耗時比較長，所產生的單克隆抗體效價低，不能滿足臨床需要。
技術實現思路
1、有鑒于此，本專利技術提供了抗tpo的單克隆抗體及其制備方法和應用。本專利技術提供了一種利用噬菌體表面展示技術篩選獲得的人源抗tpo病毒抗體，包括重鏈和輕鏈；所述重鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.71、seq?id?no.72、seq?id?no.73所示的氨基酸序列；所述輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.74、seq?id?no.75、seq?idno.76所示的氨基酸序列。其中，抗tpo全人源單克隆抗體th507和th512，純度均＞90％，瞬時表達量分別為150mg/l和120mg/l，均能夠特異性識別tpo重組抗原，可與抗原發生顯著的酶聯免疫反應，且37℃加速穩定性滿足試劑盒使用需求，其作為質控品可在甲功tpo項目檢測中發揮重要作用。
2、為了實現上述專利技術目的，本專利技術提供以下技術方案：
3、本專利技術提供了抗tpo的單克隆抗體，包括重鏈和輕鏈；所述重鏈的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次為gxxfxxxdxx、xxxxxxxnxx、xxxxxxxaxdi；所述輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次為sgdxlpkqyay、kdxerps、qsadxsgxxxv；所述x為g、a、v、l、i、f、w、y、d、h、n、e、k、q、m、r、s、t、c、p、u、o中的任意一種氨基酸。
4、在本專利技術的一些具體實施方案中，所述單克隆抗體包括如下任意項：
5、(i)、所述重鏈的cdr1具有如seq?id?no.1或seq?id?no.17所示的氨基酸序列；和/或
6、所述重鏈的cdr2具有如seq?id?no.2或seq?id?no.18所示的氨基酸序列；和/或
7、所述重鏈的cdr3具有如seq?id?no.3或seq?id?no.19所示的氨基酸序列；和/或
8、(ii)、所述輕鏈的cdr1具有如seq?id?no.9或seq?id?no.25所示的氨基酸序列；和/或
9、所述輕鏈的cdr2具有如seq?id?no.10或seq?id?no.26所示的氨基酸序列；和/或
10、所述輕鏈的cdr3具有如seq?id?no.11或seq?id?no.27所示的氨基酸序列；或
11、(iii)、如(i)或(ii)所述的氨基酸序列經取代、缺失或添加一個或多個氨基酸獲得的氨基酸序列，且與(i)或(ii)所述的氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；或
12、(iv)、與如(i)至(iii)任一項所述的氨基酸序列具有90％以上同一性的氨基酸序列。
13、在本專利技術的一些具體實施方案中，所述單克隆抗體包括如下任意項：
14、(i)、所述重鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.1、seq?id?no.2和seqid?no.3所示的氨基酸序列；和
15、所述輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.9、seq?id?no.10和seq?idno.11所示的氨基酸序列；或
16、(ii)、所述重鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.17、seq?id?no.18和seq?id?no.19所示的氨基酸序列；和
17、所述輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3依次具有如seq?id?no.25、seq?id?no.26和seq?idno.27所示的氨基酸序列；或
18、(iii)、如(i)或(ii)所述的氨基酸序列經取代、缺失或添加一個或多個氨基酸獲得的氨基酸序列，且與(i)或(ii)所述的氨基酸序列功能相同的氨基酸序列；或
19、(iv)、與如(i)至(iii)任一項所述的氨基酸序列具有90％以上同一性的氨基酸序列。
20、在本專利技術的一些具體實施方案中，所述單克隆抗體包括如下任意項：
21、(i)、所述重本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.抗TPO的單克隆抗體，其特征在于，包括重鏈和輕鏈；所述重鏈的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依次為GXXFXXXDXX、XXXXXXXNXX、XXXXXXXAXDI；所述輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3的氨基酸序列依次為SGDXLPKQYAY、KDXERPS、QSADXSGXXXV；所述X為G、A、V、L、I、F、W、Y、D、H、N、E、K、Q、M、R、S、T、C、P、U、O中的任意一種氨基酸。
2.如權利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，包括如下任意項：
3.編碼如權利要求1或2所述單克隆抗體的核酸分子。
4.表達載體，其特征在于，包括如權利要求3所述的核酸分子。
5.宿主，其特征在于，包括如權利要求4所述的表達載體。
6.如權利要求1或2所述單克隆抗體的制備方法，其特征在于，培養如權利要求5所述的宿主，收獲上清液，分離純化獲得所述單克隆抗體。
7.如下任意項在制備檢測TPO的產品中的應用：
8.如下任意項在制備診斷、預防和/或治療甲狀腺功能的產品中的應用：
9.藥物
10.試劑組合或試劑盒，其特征在于，包括如下任意項：(I)、如權利要求1或2所述的單克隆抗體；和/或
...【技術特征摘要】
1.抗tpo的單克隆抗體，其特征在于，包括重鏈和輕鏈；所述重鏈的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次為gxxfxxxdxx、xxxxxxxnxx、xxxxxxxaxdi；所述輕鏈的cdr1、cdr2和cdr3的氨基酸序列依次為sgdxlpkqyay、kdxerps、qsadxsgxxxv；所述x為g、a、v、l、i、f、w、y、d、h、n、e、k、q、m、r、s、t、c、p、u、o中的任意一種氨基酸。
2.如權利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，包括如下任意項：
3.編碼如權利要求1或2所述單克隆抗體的核酸分子。
4.表達...
【專利技術屬性】
技術研發人員：李桂林，崔亞敏，彭亞杰，董艷娜，王桂芳，田曉平，趙巧輝，付光宇，楊增利，
申請(專利權)人：鄭州伊美諾生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：
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