【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物傳感領域，特別涉及一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒及測定方法與應用。
技術介紹
1、活性氧（ros）是細胞代謝過程中產生的含氧化學物質，包括過氧化氫、超氧陰離子和羥自由基。據報道，在約70%的特發性不育男性中，精漿中的活性氧水平升高，而精漿中過量的活性氧已被證明會對人類精子功能產生負面影響。因此，檢測精漿中的活性氧在評估男性特發性不育癥中起著至關重要的作用。
2、傳統的活性氧檢測方法包括分光光度比色法、碘還原滴定法、高效液相色譜法和熒光測定法。在這些測定方法中，分光光度比色法和碘還原滴定法操作相對簡單，但靈敏度有限；高效液相色譜法和熒光法靈敏度高，但操作復雜且需要一定的反應時間。此外，精漿中的活性氧水平具有濃度低、不穩定、在空氣中半衰期短以及離開人體后隨即消散的特點。因此，迫切需要建立一種快速且高靈敏度的測定方法來精確檢測精漿中的活性氧，從而促進疾病診斷。
3、目前，電化學發光（ecl）檢測技術已得到廣泛發展，施加電壓可誘導迅速發光響應，憑借其固有的高靈敏度和快速響應優勢，電化學發光在開發可行的活性氧檢測策略方面展現出巨大潛力，為解決這一艱巨挑戰提供了可能方案。而金納米簇（auncs）作為一種新型發光體，因其尺寸可控發光、高量子產率、低毒性和良好的水溶性等固有優勢在電化學發光分析領域引起了廣泛關注。如公開號為cn110927226a的專利文件中所公開的一種基于二氧化鈰和納米鉑雙增強魯米諾發光的電化學發光傳感器的構建方法，先后采用了ceo2-au@pt溶液、七肽hgc溶液、一抗ab1
4、然而，諸如上述專利也并未解決對不穩定、易失活的精漿活性氧進行快速且高靈敏度精準定量測定問題，如何實現快速且高靈敏度精準測定精漿中活性氧是本領域技術人員難以解決的問題。
技術實現思路
1、為解決上述
技術介紹
中提到的如何實現快速且高靈敏度精準測定精漿中活性氧的問題，本專利技術一實施例提供一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，包括：
2、底物溶液，所述底物溶液包括過硫酸鉀和磷酸鹽；
3、所述金納米簇膜為haucl4、n-乙酰-l-半胱氨酸和naoh復配后，涂覆于電極表面，干燥形成。
4、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述工作電極為玻碳電極；
5、而所述三電極體系還包括輔助電極和參比電極，所述輔助電極為鉑電極，所述參比電極為飽和氯化銀電極。
6、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述金納米簇溶液的制備步驟如下，
7、s100、將haucl4溶液、n-乙酰-l-半胱氨酸溶液、naoh溶液混合；
8、s101、將s100所述混合溶液在37~45℃下培養3~10?h；
9、s102、將s101所述培養液用透析袋純化，于4℃下保存。
10、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述haucl4溶液濃度為20~25?mg/ml；所述n-乙酰-l-半胱氨酸溶液濃度為0.06~0.10?mol/l；所述naoh溶液濃度為0.5~0.6?mol/l；
11、而所述haucl4溶液、n-乙酰-l-半胱氨酸溶液、naoh溶液按體積比1.5~2.5：15~25：2~4的比例混合。
12、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述底物溶液為70~100?mmol/l?過硫酸鉀1×磷酸鹽緩沖液，ph=7。
13、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒經電還原后可恢復電化學發光信號至測試前水平，繼續用于新測試周期中。
14、本專利技術還提供一種活金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法，采用了如上任一項所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，包括：
15、s200、向所述涂覆有金納米簇膜的電極施加負電壓，對金納米簇進行預還原；
16、s201、將所述三電極體系插入所述底物溶液中，施加瞬時負電壓，產生強烈電化學發光信號，通過電致化學發光儀記錄；
17、s202、向所述底物溶液中添加已知濃度的活性氧標準品，施加瞬時負電壓，電化學發光信號立即猝滅，光強猝滅程度與活性氧標準品濃度正相關，通過電致化學發光儀記錄；
18、s203、更換底物溶液，對所述電極施加負電壓進行電還原，恢復電化學發光信號?；
19、s204、使用不同濃度的活性氧標準品重復步驟s202、s203，以電化學發光信號的變化程度和活性氧標準品濃度作圖繪制標準曲線；
20、s205、向所述底物溶液中添加活性氧待測液，施加瞬時負電壓，電化學發光信號猝滅，通過電致化學發光儀記錄；
21、s206、依據s204所作出的標準曲線，計算出活性氧待測液中活性氧溶液濃度。
22、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述活性氧包括過氧化氫、超氧陰離子和羥自由基中的至少一種。
23、在上述實施例的基礎上，進一步的，所述金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法采用階躍脈沖法進行電化學發光檢測，單個樣品測試周期為11?s。
24、本專利技術還提供一種如上任一項所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法在精漿活性氧快速檢測中的應用。
25、本專利技術具有以下有益效果：
26、本專利技術提供一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，在負電壓條件下，能與共反應劑過硫酸鉀相互反應，產生強烈的電化學發光信號，且這種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒經電還原后可以重復使用，使用方法簡單易上手，有效節約了成本與時間。
27、本專利技術還提供一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法，能通過靶標活性氧與金納米簇及其共反應劑在負電壓條件下的快速循環反應，快速調控金納米簇電化學發光價態，從而快速猝滅金納米簇的電化學發光強度，實現對活性氧的一步法快速靈敏檢測。
28、本專利技術還提供一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法在精漿活性氧快速檢測中的應用，利用即時而靈敏的活性氧快速測定方法有效避免了精漿中活性氧由于濃度低、不穩定、在空氣中半衰期短的特點而導致的不準確性，有效促進疾病的精準診斷。
29、本專利技術的其它特征和有益效果將在隨后的說明書中闡述，并且，部分的技術特征和有益效果可以從說明書中顯而易見地得出，或者是通過實施本專利技術而了解。
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1.一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：
3.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于，所述金納米簇溶液的制備步驟如下：
4.根據權利要求3所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：
5.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：所述底物溶液為70~100?mmol/L過硫酸鉀1×磷酸鹽緩沖液，pH=7。
6.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：所述金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒經電還原后可恢復電化學發光信號至測試前水平，繼續用于新測試周期中。
7.一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法，其特征在于，采用了如權利要求1~6任一項所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，包括以下步驟：
8.根據權利要求7所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法，其特征在于：所述活性氧包括過氧化氫、超氧陰離子和羥自由基中
9.根據權利要求7所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法，其特征在于：所述金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法采用階躍脈沖法進行電化學發光檢測，單個樣品測試周期為11?s。
10.一種如權利要求7~9任一項所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定方法在精漿活性氧快速檢測中的應用。
...【技術特征摘要】
1.一種金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于，包括：
2.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：
3.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于，所述金納米簇溶液的制備步驟如下：
4.根據權利要求3所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：
5.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：所述底物溶液為70~100?mmol/l過硫酸鉀1×磷酸鹽緩沖液，ph=7。
6.根據權利要求1所述的金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒，其特征在于：所述金納米簇電化學發光活性氧快速測定盒經電還原后可恢復電化...
【專利技術屬性】
技術研發人員：洪國粦，程玲軍，蘇燦平，楊園園，何穎豪，陳嘉明，鄒志艷，林振宇，
申請(專利權)人：廈門大學附屬第一醫院廈門市第一醫院，廈門市紅十字會醫院，廈門市糖尿病研究所，
類型：發明
國別省市：
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