【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及動物育種領域，具體涉及一種用于選擇成年家豬豬膽汁酸合成能力的snp、檢測方法及其應用。
技術介紹
1、民豬是我國東北地區唯一的地方豬種，較高的肌內脂肪含量被認為是其肉產品品質優異的重要因素。然而，由于操作人員經驗與生豬發育水平等因素的影響，活體b超等檢測技術在實際生產中對于民豬肌內脂肪估算的精確程度遠低于屠宰后測量。但是，對于民豬此類種群規模極小的地方品種，活體留種又應優先于屠宰取樣。因此，開發微創(或無創)的肉質表型衡量技術與多維度遺傳標記對于發掘民豬肉質性狀，選育與改良新品種，提高選育精準性與效率性至為重要。
2、豬膽酸(3alpha,6alpha,7alpha-三羥基-5beta-膽烷酸，hyocholic?acid，hca)是成年家豬體內唯一的三羥基膽酸。上世紀60年代之前，hca一直被認為是家豬特有的三羥基膽汁酸，并未在臨床與應用中受到廣泛關注。雖然早在1964年就有關于日糧添加hca改善小鼠膽固醇代謝紊亂方面的報道，但在近半個多世紀里，關于hca與糖脂穩態的關系始終缺乏關注，相關報道鮮見。直至近十年來隨著多組學測序與聯合分析的高速發展，hca作為關鍵信號分子參與調控哺乳動物體內糖脂代謝穩態的作用機理逐漸得到發掘與關注。通過對20頭民豬進行靶向代謝組測序顯示，背最長肌imf含量與血清hca水平呈現正相關關系。添加hca到家畜飼料中，可能會有助于調節家畜的脂肪代謝，從而控制imf的水平，提高肉質的同時保持家畜的健康。在育種過程中，豬膽酸可以作為很好的候選標記分子，選擇那些能夠自然產生較高hca水
3、2021年上海交通大學賈偉教授團隊的兩篇開創性研究為hca在臨床上與糖脂紊亂衍生的代謝綜合征的負相關關系提供了依據。研究解析了hca通過活化腸上皮細胞tgr5與抑制法尼醇x受體信號兩種路徑提高胰高血糖素樣肽-1的分泌，進而加速血糖清除，維持高糖飲食下血糖穩態的分子機理，明確了hca作為家豬在育肥階段可以對飲食誘導的糖尿病產生極強抵抗力的生理基礎。近兩年，在畜牧產業上zhang?b團隊跨物種(灘羊)報道了hca調控脂肪分布，改善脂代謝紊亂的作用。mitsuhiro?watanabe，velazquez-villegas?la和broeders?ep等人在臨床與小鼠模型上的試驗發現，循環系統中的hca類膽汁酸含量與個體肥胖以及代謝綜合征的發生存在顯著地負相關系，深入研究證實tgr5活化后可以通過上調碘甲腺原氨酸脫碘酶ⅱ的表達，促進棕色脂肪細胞有氧呼吸與能量消耗，也可通過激活下游erk/drp1通路增加線粒體分裂與β-氧化，增加白色脂肪細胞能量消耗與轉分化。yuanzhang等人研究發現，lxr活化后可以啟動下游srebp-1c(sterol?regulatory?elementbinding?protein?1c,srebp-1c)，增加肝細胞膽固醇與脂肪酸合成，促進脂肪沉積。kajimura?s,chen?a和marcinkiewicz?a等人研究表明fto可以通過m6a去甲基化修飾多種脂質合成與沉積的關鍵蛋白/酶體的前體mrna成熟，進而促進前體脂肪細胞分化成為成熟的白色脂肪細胞。汪以真教授團隊在豬原代脂肪細胞與3t3-l1細胞上的試驗發現，fto特異性敲除或靶向干擾后，可以通過增加自噬相關蛋白5與7mrna的甲基化水平，增加其被甲基腺苷rna結合蛋白2識別與結合的水平，進而造成mrna降解與翻譯抑制，降低細胞自噬并增加脂肪沉積。
技術實現思路
1、本專利技術提供了一種與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素cyp4a21相關的snp、檢測方法及其應用，本專利技術通過篩選出與民豬和大白豬豬膽酸合成關鍵限速酶相關的基因標記，選擇cyp4a21作為成豬高肉品質育種候選基因，通過尋找豬cyp4a21基因啟動子區域的遺傳變異，提供分子標記及其檢測方法，并應用于豬育種，建立豬分子標記輔助育種方法，為高肉品質豬(高豬膽酸)新品系的選育提供基因標記和技術方法。
2、本專利技術的一種與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素cyp4a21相關的snp在輔助育種中的應用，所述的snp是在提高豬肉品質輔助育種中的應用；所述的snp為cyp4a21基因啟動子區域nc_010448.4:rs99141509的多態性位點，所述的snp的核苷酸序列如seqid?no:1所示。
3、進一步地，所述的多態性為t/c。
4、進一步地，所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體中選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體實現的。
5、進一步地，所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體中選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體實現的，所述的選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體是淘汰cc基因型個體，保留tt基因型個體作為豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體；其中，cc基因型個體為豬膽酸合成量低于tt基因型的個體。
6、進一步地，所述的家豬為民豬或大白豬。
7、進一步地，所述的輔助育種的方法如下：
8、(1)采用cyp4a21f和cyp4a21r引物，通過pcr方法獲取待選育的豬群體的cyp4a21基因啟動子區域基因片段的pcr產物，經測序驗證成功后，對獲取的cyp4a21基因啟動子區域基因的第-1234位點為c等位基因，記為cc基因型個體；對獲取的cyp4a21基因啟動子區域基因的第-1234位點為t等位基因，記為tt基因型個體；
9、(2)去除待選育的豬群體中cc基因型個體，保留tt基因型個體，即完成所述的輔助育種；
10、其中，cyp4a21f和cyp4a21r引物的核苷酸序列如下：
11、cyp4a21f：attatacccttgggtcggtgcact；
12、cyp4a21r：tcagtggacttgtagggcga。
13、本專利技術的一種檢測與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素cyp4a21相關的snp的引物為cyp4a21f和cyp4a21r，核苷酸序列如下：
14、cyp4a21f：attatacccttgggtcggtgcact；
15、cyp4a21r：tcagtggacttgtagggcga。
16、含有本專利技術所述的引物的試劑盒。
17、本專利技術基于snp位點開發的分子標記，是通過檢測豬基因組中cyp4a21基因啟動子區域snp(nc_010448.4:rs99141509)位點的基因型來實現的，即在進行個體遺傳評定的過程中，篩選出snp(nc_010448.4:rs99141509)位點為tt的個體，實現了提高成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶cyp4a21的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素CYP4A21相關的SNP在輔助育種中的應用，其特征在于所述的SNP是在提高豬肉品質輔助育種中的應用；所述的SNP為CYP4A21基因啟動子區域NC_010448.4:rs99141509的多態性位點，所述的SNP的核苷酸序列如SEQID?NO:1所示。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的多態性為T/C。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體中選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體實現的。
4.根據權利要求1或3所述的應用，其特征在于所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體中選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體實現的，所述的選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體是淘汰CC基因型個體，保留TT基因型個體作為豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體；其中，CC基因型個體為豬膽酸合成量低于TT基因型的個體。
5.根據權利要求1、2或3所述的應用，其特征在于所述的家豬為民豬或大白豬。
6.根據權利要求1、2或3所述的應用，其特征在于
7.一種檢測與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素CYP4A21相關的SNP的引物，其特征在于所述的引物為CYP4A21F和CYP4A21R，核苷酸序列如下：
8.含有權利要求7所述的引物的試劑盒。
...【技術特征摘要】
1.一種與成年家豬豬膽酸合成關鍵限速酶-細胞色素cyp4a21相關的snp在輔助育種中的應用，其特征在于所述的snp是在提高豬肉品質輔助育種中的應用；所述的snp為cyp4a21基因啟動子區域nc_010448.4:rs99141509的多態性位點，所述的snp的核苷酸序列如seqid?no:1所示。
2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的多態性為t/c。
3.根據權利要求1所述的應用，其特征在于所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體中選擇出豬膽酸合成能力相對高的仔豬個體實現的。
4.根據權利要求1或3所述的應用，其特征在于所述的提高豬肉品質輔助育種是從待育種的豬群體...
【專利技術屬性】
技術研發人員：榮博涵，龐宇，張娜，林旭，楊秀芹，申振通，
申請(專利權)人：東北農業大學，
類型：發明
國別省市：
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