【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及菌類人工栽培領域，尤其涉及黃靛牛肝菌人工菌根苗及其合成方法。
技術介紹
1、黃靛牛肝菌(butyriboletus?roseoflavus)屬于蘑菇綱(agaricomycetes)牛肝菌目(boletales)，牛肝菌科(boletaceae)黃肉牛肝菌屬(butyriboletus)，是浙江慶元縣特色菌根菌，也是深受當地人們喜愛的美味食用菌。黃靛牛肝菌在自然條件下主要與黃山松形成外生菌根。由于其為外生菌根菌，即必須與樹木建立共生關系才可以完成生活史，形成地上部分的子實體。因此，室內栽培存在一定困難。此外，目前資源破壞嚴重、野生資源的減少與消費者的需求逐年增高，導致黃靛牛肝菌供不應求。為了解決此問題，一方面需要保護野生資源，合理開發利用野生資源；另一方面研究人工栽培新技術才是解決供不應求最根本的辦法，但是研究人工栽培技術首先必須解決菌根的人工合成問題。
2、因此，現有技術還有待于改進和發展。
技術實現思路
1、基于上述現有技術的不足，本專利技術的目的在于提供黃靛牛肝菌人工菌根苗及其合成方法，旨在提供黃靛牛肝菌人工菌根苗，進而實現黃靛牛肝菌的人工栽培。
2、本專利技術的技術方案如下：
3、本專利技術的第一方面，提供一種黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法，所述黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法包括以下步驟：
4、s1、將黃靛牛肝菌的母種在固體培養基中進行培養，生長出菌絲后，通過分子生物學方法對菌絲進行鑒定；
5、s2、
6、s3、確定步驟s2所得黃靛牛肝菌菌液中的菌絲為黃靛牛肝菌后，將黃靛牛肝菌菌液接種至馬尾松無菌苗的根部，經過3～12個月的培養，培育出黃靛牛肝菌人工菌根苗。
7、本專利技術提供的黃靛牛肝菌人工菌根苗合成方法，先在固體培養基中培養以減少污染，然后將得到的菌絲轉入到液體培養基中繼續培養進行增殖，最后接種至馬尾松無菌苗的根部，進而實現菌絲的快速增殖和人工菌根的形成，并通過分子生物學方法確保菌種的純凈性，從而解決了黃靛牛肝菌野生資源短缺和市場需求增長的矛盾。本專利技術建立了人工菌根苗合成的穩定模型，可以此為依據建立人工菌根苗圃并配套合理移植的黃靛牛肝菌仿野生栽培關鍵技術，為黃靛牛肝菌就地保育和人工栽培提供技術基礎，還能夠為其他菌類的人工栽培提供參考。
8、可選地，所述固體培養基為smn固體培養基，所述smn固體培養基包括以下質量份的組分：
9、松針100～200份、葡萄糖10～20份、六水氯化鐵1/50～4/50份、氯化鈉1/50～4/50份、氯化鈣1/20～4/20份、磷酸二氫鉀1/2～1份、磷酸二氫銨1/4～3/4份、七水硫酸鎂3/20～7/20份、復合維生素b1/1000000～5/1000000份、瓊脂粉10～20份、麥芽膏3～6份和水1000～2000份。
10、本專利技術中，所述smn固體培養基相比其他固體培養基(如mmn固體培養基，其與smn固體培養基的區別僅在于不含有松針100～200份；又如pmn固體培養基，其與smn固體培養基的區別僅在于將smn固體培養基中的松針100～200份替換為馬鈴薯200～400份；又如pda固體培養基，其包括以下質量份的組分：馬鈴薯200～400份、葡萄糖20～40份、瓊脂粉18～40份和水1000～2000份)更適用于黃靛牛肝菌的培養與生長，不易產生污染，可獲得長勢良好的菌絲，為黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成提供了技術基礎。
11、可選地，所述液體培養基為smn液體培養基，所述smn液體培養基包括以下質量份的組分：
12、松針100～200份、葡萄糖10～20份、六水氯化鐵1/50～4/50份、氯化鈉1/50～4/50份、氯化鈣1/20～4/20份、磷酸二氫鉀1/2～1份、磷酸二氫銨1/4～3/4份、七水硫酸鎂3/20～7/20份、復合維生素b1/1000000～5/1000000份、麥芽膏3～6份和水1000～2000份。
13、本專利技術中，所述smn液體培養基相比其他液體培養基更適用于黃靛牛肝菌的培養與生長，在短時間內即可獲得較多長勢良好的菌絲，生長周期短，且生長環境(如溫度、ph等)容易控制。同時得到的菌液便于將黃靛牛肝菌接種在植物根部，得到黃靛牛肝菌人工菌根苗。本專利技術提供的smn液體培養基為黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成提供了技術基礎，有利于實現黃靛牛肝菌的人工栽培。
14、可選地，步驟s1中，將黃靛牛肝菌的母種在固體培養基中進行培養，生長出菌絲的步驟具體包括：
15、s11、將黃靛牛肝菌的母種置于pda試管斜面培養基中培養，長出菌絲后，轉移至含有玻璃紙和smn固體培養基的培養皿中，在20～30℃(例如，20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等，優選地為25℃)培養箱中暗培養；
16、s12、選取菌絲生長良好的區域，在無菌條件下，將菌絲轉移到含有玻璃紙和smn固體培養基的培養皿中在20～30℃(例如，20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等，優選地為25℃)的溫度下暗培養，得到純凈的菌絲；
17、其中，pda試管斜面培養基包括以下質量份的組分：
18、馬鈴薯200～400份、葡萄糖20～40份、瓊脂粉18～40份和水1000～2000份。
19、可選地，步驟s2中，將所述菌絲轉移到液體培養基中進行培養，得到黃靛牛肝菌菌液的步驟具體包括：
20、待步驟s12中生長在smn固體培養基上的黃靛牛肝菌菌落大小生長到培養皿1/3～2/3大小時，挑選生長狀況良好、無污染的黃靛牛肝菌菌落作為接種材料，切割后轉移至smn液體培養基中，置于溫度為20～30℃(例如，20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃或30℃等，優選地為25℃)、轉速為150～180rpm(例如可以為150rpm、160rpm、170rpm或180rpm等)的振蕩恒溫培養箱中暗培養，進行菌絲的進一步增殖，得到黃靛牛肝菌菌液。
21、可選地，步驟s3中，將黃靛牛肝菌菌液接種至馬尾松無菌苗的根部，經過3～12個月的培養，培育出黃靛牛肝菌人工菌根苗的步驟具體包括：
22、提供生長在營養土中的馬尾松無菌苗；
23、在無菌條件下，將黃靛牛肝菌菌液注入到馬尾松無菌苗的根部周圍的營養土中，在無菌、充足水分、溫度為20～25℃(例如可以為20℃、21℃、22℃、23℃、24℃或25℃等，優選地為25℃)、濕度為60％～70％以及光照的條件下培養5～10天后，再次將黃靛牛肝菌菌液注入到馬尾松無菌苗的根部周圍的營養土中，在無菌、充足水分、溫度為20～25℃(例如可以為20℃、21℃、22℃、23℃本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法，其特征在于，所述黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述固體培養基為SMN固體培養基，所述SMN固體培養基包括以下質量份的組分：
3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述液體培養基為SMN液體培養基，所述SMN液體培養基包括以下質量份的組分：
4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，步驟S1中，將黃靛牛肝菌的母種在固體培養基中進行培養，生長出菌絲的步驟具體包括：
5.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟S2中，將所述菌絲轉移到液體培養基中進行培養，得到黃靛牛肝菌菌液的步驟具體包括：
6.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，步驟S3中，將黃靛牛肝菌菌液接種至馬尾松無菌苗的根部，經過3～12個月的培養，培育出黃靛牛肝菌人工菌根苗的步驟具體具體包括：
7.根據權利要求6所述的合成方法，其特征在于，所述提供生長在營養土中的馬尾松無菌苗的步驟具體包括：
8.根據權利要求1所述的合成
9.根據權利要求6所述的合成方法，其特征在于，所述營養土包括以下質量份的組分：
10.一種黃靛牛肝菌人工菌根苗，其特征在于，通過如權利要求1-9任一項所述的合成方法而獲得。
...【技術特征摘要】
1.一種黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法，其特征在于，所述黃靛牛肝菌人工菌根苗的合成方法包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述的合成方法，其特征在于，所述固體培養基為smn固體培養基，所述smn固體培養基包括以下質量份的組分：
3.根據權利要求2所述的合成方法，其特征在于，所述液體培養基為smn液體培養基，所述smn液體培養基包括以下質量份的組分：
4.根據權利要求3所述的合成方法，其特征在于，步驟s1中，將黃靛牛肝菌的母種在固體培養基中進行培養，生長出菌絲的步驟具體包括：
5.根據權利要求4所述的合成方法，其特征在于，步驟s2中，將所述菌絲轉移到液體培養基中進行培養，得到黃靛牛肝菌菌液的步驟具體包括：
6.根據權利要求1所述的合成方法，其特...
【專利技術屬性】
技術研發人員：冀瑞卿，張泉旺，陳俊良，李長田，李玉，孫孟瑩，劉進，陳鵬，
申請(專利權)人：吉林農業大學，
類型：發明
國別省市：
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