【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術屬于納米，涉及一種負載有aap和錳離子的復合納米顆粒的制備方法及其應用。
技術介紹
1、肝細胞癌(hcc)是世界范圍內(nèi)最常見的癌癥之一，也是最主要的原發(fā)性肝癌，同時居世界第六位最普遍的癌癥和第三位致命的癌癥。常見的危險因素包括病毒性肝炎、酗酒和非酒精性脂肪肝。肝癌的發(fā)病率高和轉(zhuǎn)移性強，患者預后常常較差。早期肝癌患者只有5％-15％的患者能夠通過手術切除治療，而到了中晚期，主要以經(jīng)肝動脈化療栓塞和化療藥物如索拉菲尼等治療為主。然而，長期服用化療藥物，效果有限且容易出現(xiàn)耐藥性和毒性的問題。因此，開展積極有效的肝癌防治研究，尋找新的抗肝癌方法，尤為迫切和重要。
2、近年來，納米技術在腫瘤治療領域取得顯著進展，特別是介孔結(jié)構的無機納米載體成為研究熱點。中空介孔二氧化硅納米顆粒(hmsn)結(jié)合了納米介孔材料的優(yōu)勢和較大的中空腔，通過介孔與外界相連接，這些納米顆粒可以通過增強的滲透性和保留性(epr)效應在腫瘤部位積聚，實現(xiàn)了高效的納米藥物負載和釋放。此外，由于其更高的載藥能力、比表面積、可調(diào)的孔徑以及生物相容性，提高了藥物的生物利用度并降低了對正常組織的毒性。
3、因此，與正常細胞相比，腫瘤組織對活性氧(reactive?oxygen?species，ros)的累積具有更高的敏感性。維生素c(vitc)，又稱l-抗壞血酸，是人體必需的營養(yǎng)素之一，參與多種生化反應。研究發(fā)現(xiàn)vitc在抗腫瘤作用中通過產(chǎn)生高濃度的過氧化氫(h2o2)在腫瘤細胞內(nèi)發(fā)揮作用。h2o2破壞脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和dna，導致腫瘤細胞死亡。其還
4、化學動力療法(cdt)涉及使用各種過渡金屬離子催化內(nèi)源性h2o2通過fenton或類似fenton反應生成高度細胞毒性的羥基自由基(·oh)以消滅腫瘤細胞，因其在深部組織缺氧腫瘤治療中具有高療效且對正常組織損害較小而備受關注。因代謝率高、線粒體缺陷等問題，腫瘤細胞具有相對較高的氧化應激水平。然而，vitc在體內(nèi)容易失效，降低了在抗腫瘤作用中的應用價值。
5、因此，積極開展有效的肝癌防治研究，尋找新的抗肝癌方法顯得尤為迫切和重要。
6、目前尚未有負載有aap和錳離子的復合納米顆粒的制備方法和應用在治療肝癌上的報道。
技術實現(xiàn)思路
1、本專利技術的專利技術目的是，針對上述問題，提供了一種負載有aap和錳離子的復合納米顆粒的制備方法及其應用，以中空介孔二氧化硅納米顆粒(hmsn)為載體，負載有抗壞血酸磷酸酯(aap)和錳離子(mn2+)的aap@hmsn-cs-mn2+納米顆粒。納米顆粒在到達腫瘤部位后，受到肝癌細胞中高表達的alp的催化水解作用，釋放出aap，在腫瘤部位，aap被還原生成vitc，誘導腫瘤細胞產(chǎn)生高濃度的h2o2，從而殺傷腫瘤細胞，高濃度的h2o2經(jīng)mn2+催化，通過類fenton反應產(chǎn)生劇毒的·oh，誘導細胞凋亡，最終達到了預期的抗腫瘤效果。
2、為達到上述目的，本專利技術所采用的技術方案是：
3、負載有aap和錳離子的復合納米顆粒的制備方法，包括如下步驟：
4、(1)aap@hmsn-cs的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散，制備成5mg/ml的分散液；超純水中加入抗壞血酸磷酸酯，配制成25mg/ml的抗壞血酸磷酸酯溶液；將10ml中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10ml抗壞血酸磷酸酯溶液依次加入小棕瓶中，攪拌；取殼聚糖溶液加入到上述混合溶液中，攪拌，離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的aap@hmsn-cs粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
5、(2)hmsn-cs-mn2+的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散制備成5mg/ml的分散液；稱取適量的mncl2溶解于超純水中配制成5mg/ml的溶液；將10ml的中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10ml的殼聚糖溶液依次加入小棕瓶中攪拌；取10mlmncl2溶液加入到上述混合溶液中，攪拌；離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的hmsn-cs-mn2+的粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>
6、(3)aap@hmsn-cs-mn2+的制備：超純水中加入aap@hmsn-cs，超聲分散制備成1mg/ml的分散液；在1超純水中加入mncl2，制備成2mg/ml的溶液；將10ml的aap@hmsn-cs分散液與10ml的mncl2溶液依次加入小棕瓶中，攪拌；離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的aap@hmsn-cs-mn2+的粉末，即為負載有aap和錳離子的復合納米顆粒，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
7、進一步說明，在步驟(1)和(2)中，所述殼聚糖溶液的濃度為0.5mg/ml。
8、進一步說明，在步驟(1)、(2)和(3)中，所述攪拌均為37℃恒溫磁力攪拌器中磁力攪拌24h。
9、進一步說明，在步驟(1)、(2)和(3)中，所述離心操作為8000rpm離心10min。
10、進一步說明，在步驟(1)、(2)和(3)中，所述冷凍為-80℃超低溫冰箱冷凍1h。
11、進一步說明，在步驟(1)、(2)和(3)中，所述干燥時間為16-24h。
12、本專利技術的另一個目的在于提供所述的制備方法制得的負載有aap和錳離子的復合納米顆粒材料。
13、本專利技術的另一個目的在于提供所述的制備方法制得的負載有aap和錳離子的復合納米顆粒材料在制備治療肝癌藥物中的應用。
14、由于采用上述技術方案，本專利技術具有以下有益效果：
15、本專利技術如圖1所示使用負載aap和mn2+的中空介孔硅納米顆粒。hmsn具有良好的生物安全性，aap在腫瘤細胞高表達的堿性磷酸酶的作用下，原位產(chǎn)生維生素c，維生素c的高表達從而產(chǎn)生更多的h2o2，放大mn2+的類fenton反應，用于腫瘤的治療。基于aap@hmsn-cs-mn2+的納米催化治療在體內(nèi)實現(xiàn)了顯著增強的抗腫瘤效果，同時避免了對正常組織的顯著損傷。通過本團隊的研究結(jié)果表明，基于aap的納米催化療法是一種很有前途的提高腫瘤治療效果的策略。
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1.負載有AAP和錳離子的復合納米顆粒的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)AAP@HMSN-CS的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散，制備成5mg/mL的分散液；超純水中加入抗壞血酸磷酸酯，配制成25mg/mL的抗壞血酸磷酸酯溶液；將10mL中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10mL抗壞血酸磷酸酯溶液依次加入小棕瓶中，攪拌；取殼聚糖溶液加入到上述混合溶液中，攪拌，離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的AAP@HMSN-CS粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?2)HMSN-CS-Mn2+的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散制備成5mg/mL的分散液；稱取適量的MnCl2溶解于超純水中配制成5mg/mL的溶液；將10mL的中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10mL的殼聚糖溶液依次加入小棕瓶中攪拌；取10mLMnCl2溶液加入到上述混合溶液中，攪拌；離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的HMSN-CS-Mn2+的粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?3)AAP@HMSN-CS-Mn2+的制備：超純水中加入AAP@...
【技術特征摘要】
1.負載有aap和錳離子的復合納米顆粒的制備方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)aap@hmsn-cs的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散，制備成5mg/ml的分散液；超純水中加入抗壞血酸磷酸酯，配制成25mg/ml的抗壞血酸磷酸酯溶液；將10ml中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10ml抗壞血酸磷酸酯溶液依次加入小棕瓶中，攪拌；取殼聚糖溶液加入到上述混合溶液中，攪拌，離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的aap@hmsn-cs粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?2)hmsn-cs-mn2+的制備：超純水中加入中空介孔二氧化硅納米顆粒，超聲分散制備成5mg/ml的分散液；稱取適量的mncl2溶解于超純水中配制成5mg/ml的溶液；將10ml的中空介孔二氧化硅納米顆粒分散液與10ml的殼聚糖溶液依次加入小棕瓶中攪拌；取10mlmncl2溶液加入到上述混合溶液中，攪拌；離心，棄上清，用超純水洗滌3次，冷凍后，放入真空冷凍干燥機干燥，得到的hmsn-cs-mn2+的粉末，4℃保存?zhèn)溆茫?3)aap@hmsn-cs-mn2+的制備：超純水中加入aap@hmsn-cs，超聲分散制備成1mg/ml的分散液；在1超純水中加入mncl2，制備成2mg/ml的溶液；...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：黃勇，鐘莉娉，趙永祥，虞先濬，何堅，徐近，王旭，
申請(專利權)人：廣西醫(yī)科大學，
類型：發(fā)明
國別省市：
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