【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于口服胰島素納米制劑的制備，具體涉及一種基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法及應用。
技術介紹
1、糖尿病是一種慢性代謝性疾病，全球約有4.15億人患有糖尿病，預計未來幾年將呈指數級增長。糖尿病的慢性高血糖與不同器官的長期損害、功能障礙和衰竭有關，尤其是眼睛、腎臟、神經、心臟和血管。糖尿病在臨床上主要分為ⅰ型糖尿病和ⅱ型糖尿病兩種類型。據統計數據顯示，在所有糖尿病患者中，大約95%以上都是以ⅱ型糖尿病為主，只有不到5%為ⅰ型糖尿病，而且隨著年齡的增長，發病率也在逐漸增加。胰島素（insulin，ins）不但是ⅰ型糖尿病的首選藥物，也是部分ⅱ型糖尿病后期的必備藥物。雖然皮下注射胰島素起效快，生物利用度比較高，但是長期注射給病人帶來很大的痛苦，而且費用也較高。口服胰島素具有方便、無痛、模擬內源性胰島素通路、保護胰腺β細胞、減輕長期注射不良反應的作用和提高患者依從性等優勢。
2、由于胃酸、胃腸道酶環境、腸粘膜和腸上皮細胞等屏障作用，口服胰島素的生物利用度不足1%。因此，口服胰島素給藥仍存在巨大的挑戰。研究顯示，納米顆粒可以有效地克服胃腸道屏障，保護蛋白或多肽類藥物免受胃腸道環境的影響，并通過增強藥物內化和滲透來提高其口服生物利用度。
3、凝結芽孢桿菌（bacillus?cululans，bc）是一類被美國食品和藥物管理局認可的“一般公認為安全”的乳酸菌。并且凝結芽孢桿菌的芽孢表面有蛋白質涂層，能夠經受高溫、酸堿、紫外線以及多種化學物質滅殺。芽孢桿菌孢子作為益生菌的休眠生命體，具
技術實現思路
1、本專利技術解決的技術問題是提供了一種基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，該方法制備的口服胰島素納米遞藥系統能夠克服胃腸道中酶屏障、腸道黏液屏障以及腸上皮細胞屏障，從而提高口服胰島素的生物利用度，發揮較好的降血糖作用，因此制備的口服胰島素納米遞藥系統能夠用于制備治療或/和預防糖尿病的口服藥物。
2、本專利技術為解決上述技術問題采用如下技術方案，基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于具體步驟為：
3、步驟s1，將脫氧膽酸溶于無水乙醇中，再與1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺（edc）和n-羥基琥珀酰亞胺（nhs）混合活化羧基，然后加入純化后的芽孢（spore），于室溫攪拌反應，反應完成后透析，離心得到沉淀，沉淀用超純水洗滌，冷凍干燥得到脫氧膽酸修飾益生菌芽孢載體da-spore；
4、步驟s2，在弱酸環境下，將胰島素與脫氧膽酸修飾益生菌芽孢載體da-spore混合攪拌，通過物理吸附合成口服胰島素納米遞藥系統da-spore/ins，該口服胰島素納米遞藥系統da-spore/ins在腸道環境下自發形成脫氧膽酸修飾的胰島素納米粒da-spore/insnps。
5、進一步限定，步驟s1所述純化后的芽孢的具體制備過程為：將凝結芽孢桿菌于37℃孵育48h，用掃描電鏡檢測芽孢桿菌的產孢程度，產孢率達到90%后將混懸液于80℃加熱30min，隨后于4℃離心30min，再用1m?kcl溶液和去離子水洗滌，冷凍干燥得到純化后的芽孢。
6、進一步限定，步驟s1所述脫氧膽酸修飾益生菌芽孢載體da-spore中脫氧膽酸與芽孢的重量百分配比為25wt%~70wt%:30wt%~75wt%。
7、進一步限定，步驟s2所述口服胰島素納米遞藥系統da-spore/ins中脫氧膽酸、芽孢和胰島素的重量百分配比為20wt%~60wt%:30wt%~65wt%:5wt%~45wt%。
8、本專利技術所述的口服胰島素納米遞藥系統在制備治療或/和預防糖尿病口服藥物中的應用。
9、進一步限定，所述口服胰島素納米遞藥系統用于保護胰島素免受胃強酸環境以及胃腸道中胃蛋白酶和胰蛋白酶的破壞，維持口服胰島素納米遞藥系統中胰島素的二級空間活性結構；口服胰島素納米遞藥系統借助芽孢在腸道定向定植并萌發生成益生菌，并脫落蛋白外殼，自發形成脫氧膽酸修飾的胰島素納米粒da-spore/ins?nps；該脫氧膽酸修飾的胰島素納米粒da-spore/ins?nps借助芽孢表面功能蛋白和頂端鈉依賴性膽汁酸轉運蛋白（asbt）的主動轉運作用克服腸道黏液和腸上皮細胞屏障，提高胰島素口服生物利用度和實現胰島素的降血糖作用。
10、進一步限定，所述糖尿病為ⅰ型糖尿病或ii型糖尿病。
11、本專利技術與現有技術相比具有以下優點和有益效果：本專利技術基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建了口服胰島素納米遞藥系統da-spore/ins，該da-spore/ins遞藥系統能夠克服胃腸道蛋白酶的降解，跨過腸道黏液和腸上皮細胞屏障，實現口服胰島素的腸道高效遞送，提高胰島素的口服生物利用度，實現較好的口服降血糖作用。
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1.基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于具體步驟為：
2.?根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于步驟S1所述純化后的芽孢的具體制備過程為：將凝結芽孢桿菌于37℃孵育48h，用掃描電鏡檢測芽孢桿菌的產孢程度，產孢率達到90%后將混懸液于80℃加熱30min，隨后于4℃離心30min，再用1M?KCl溶液和去離子水洗滌，冷凍干燥得到純化后的芽孢。
3.根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于：步驟S1所述脫氧膽酸修飾益生菌芽孢載體DA-Spore中脫氧膽酸與芽孢的重量百分配比為25wt%~70wt%:30wt%~75wt%。
4.根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于：步驟S2所述口服胰島素納米遞藥系統DA-Spore/Ins中脫氧膽酸、芽孢和胰島素的重量百分配比為20wt%~60wt%:30wt%~65wt%:5wt%~45wt%。
5.根據權利要
6.?根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述口服胰島素納米遞藥系統用于保護胰島素免受胃強酸環境以及胃腸道中胃蛋白酶和胰蛋白酶的破壞，維持口服胰島素納米遞藥系統中胰島素的二級空間活性結構；口服胰島素納米遞藥系統借助芽孢在腸道定向定植并萌發生成益生菌，并脫落蛋白外殼，自發形成脫氧膽酸修飾的胰島素納米粒DA-Spore/Ins?NPs；該脫氧膽酸修飾的胰島素納米粒DA-Spore/Ins?NPs借助芽孢表面功能蛋白和頂端鈉依賴性膽汁酸轉運蛋白的主動轉運作用克服腸道黏液和腸上皮細胞屏障，提高胰島素口服生物利用度和實現胰島素的降血糖作用。
7.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：所述糖尿病為Ⅰ型糖尿病或II型糖尿病。
...【技術特征摘要】
1.基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于具體步驟為：
2.?根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于步驟s1所述純化后的芽孢的具體制備過程為：將凝結芽孢桿菌于37℃孵育48h，用掃描電鏡檢測芽孢桿菌的產孢程度，產孢率達到90%后將混懸液于80℃加熱30min，隨后于4℃離心30min，再用1m?kcl溶液和去離子水洗滌，冷凍干燥得到純化后的芽孢。
3.根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于：步驟s1所述脫氧膽酸修飾益生菌芽孢載體da-spore中脫氧膽酸與芽孢的重量百分配比為25wt%~70wt%:30wt%~75wt%。
4.根據權利要求1所述的基于脫氧膽酸修飾益生菌芽孢構建口服胰島素納米遞藥系統的方法，其特征在于：步驟s2所述口服胰島素納米遞藥系統da-spore/ins中脫氧膽酸、芽...
【專利技術屬性】
技術研發人員：梁金英，王全喜，白孟鑫，賀曉丹，張勉，梁競文，畢亞榮，姜尚，汪思妍，馬素英，
申請(專利權)人：新鄉醫學院，
類型：發明
國別省市：
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