【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物檢測，特別是涉及犬冠狀病毒n蛋白的單抗、免疫膠體金試紙條及其制備方法。
技術介紹
1、犬冠狀病毒(canine?coronavirus,ccov)病是一種由犬冠狀病毒引起的急性腸道感染性疾病，在全球廣泛分布，其中中國流行的基因型主要是ccov-iia型。當前，我國寵物飼養量逐年增加，而ccov常與犬細小病毒(cpv)、犬輪狀病毒(crv)、犬瘟熱病毒(cdv)等混合感染，診斷較為困難且容易引起大規模傳播。因此，建立一種快速診斷犬冠狀病毒病的檢測方法具有重要的公共衛生學意義。目前，有幾種方法可用于檢測ccov，elia等利用ii型ccov的重組m蛋白(rmp)建立了elisa檢測法，然而這種方法是耗時耗力的，不適合快速和現場檢測；decaro等開發了一種針對m基因的rt-qpcr檢測方法，用于檢測和定量狗糞便中的ccovrna，該方法靈敏性高，但是通常需要特定的引物、熟練的技術人員和特定的設備。
2、因此，研制一種快速、靈敏的檢測技術意義重大。國內目前用于檢測ccov的技術通常為rt-qpcr、膠體金免疫層析技術和rt-pcr。其中對于犬冠狀病毒膠體金試紙條的研發較少，試紙條價格昂貴、成本較高。因此降低檢測成本，實現技術的國產化，建立一種快速檢測方法意義重大。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是提供犬冠狀病毒n蛋白的單抗、免疫膠體金試紙條及其制備方法，以解決上述現有技術存在的問題。本專利技術研制的試紙條的敏感性優于商品化試紙條。
2、為實現
3、技術方案一：一株雜交瘤細胞株，所述雜交瘤細胞株命名為4a8（hybridoma?cellline?4a8），所述4a8的保藏編號為cctcc?no：c2024304，保藏日期為2024年10月18日，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學。
4、技術方案二：一種所述雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體4a8。
5、進一步地，所述單克隆抗體4a8的重鏈亞型為igg2a，輕鏈亞型為κ鏈。
6、技術方案三：所述的單克隆抗體4a8的制備方法，利用所述的雜交瘤細胞株4a8分泌產生。
7、技術方案四：一種所述的雜交瘤細胞株或所述的單克隆抗體4a8在制備犬冠狀病毒的檢測試劑或檢測試劑盒中的應用。
8、技術方案五：一種所述的雜交瘤細胞株或所述的單克隆抗體4a8在制備防治感染犬冠狀病毒導致疾病的藥物中的應用。
9、技術方案六：一種所述的雜交瘤細胞株或所述的單克隆抗體4a8在制備犬冠狀病毒的疫苗中的應用。
10、技術方案七：一種用于檢測犬冠狀病毒n蛋白的免疫膠體金試紙條，所述免疫膠體金試紙條以權利要求2或3所述的單克隆抗體4a8為金標抗體。
11、技術方案八：所述的免疫膠體金試紙條的制備方法，包括將單克隆抗體4b6噴于nc膜上作為檢測線的步驟，所述單克隆抗體4b6是由4b6雜交瘤細胞株分泌，所述4b6雜交瘤細胞株（hybridoma?cell?line?4b6）的保藏編號為cctccno：c2024305，保藏日期為2024年10月18日，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學；所述單克隆抗體4b6的重鏈亞型為igg1，輕鏈亞型為κ鏈。
12、進一步地，所述制備方法還包括將羊抗鼠igg用劃線稀釋液稀釋，按照1.0ml/cm噴于nc膜上檢測線下作為質控線的步驟。
13、本專利技術公開了以下技術效果：
14、本專利技術以原核表達并純化的ccov-n蛋白免疫小鼠，進一步篩選出具有特異性的抗ccov-n單克隆抗體。通過配對篩選，選擇了4a8作為金標抗體，4b6作為攔截抗體，建立了ccov膠體金試紙條檢測方法，該方法方便、靈敏性好，符合率高，可用于臨床ccov感染的快速檢測，以期為ccov感染的早期診斷提供依據。本專利技術開發的膠體金試紙條易于操作，同時可以節省時間和成本，因為它們不需要熟練的技術人員或特殊設備，可以在15min內直接確定結果。與pcr方法相比，膠體金試紙條操作簡單、快捷，結果肉眼可見，可以用于動物醫院、大規模犬場、小型門診機構、偏遠地區等，實現在臨床上的快速檢測。
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1.一株雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株命名為4A8，所述4A8的保藏編號為CCTCC?NO：C2024304，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學。
2.一種如權利要求1所述雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體4A8。
3.根據權利要求2所述的單克隆抗體4A8，其特征在于，所述單克隆抗體4A8的重鏈亞型為IgG2a，輕鏈亞型為κ鏈。
4.一種如權利要求2或3所述的單克隆抗體4A8的制備方法，其特征在于，利用權利要求1所述的雜交瘤細胞株4A8分泌得到。
5.一種如權利要求1所述的雜交瘤細胞株或權利要求2或3所述的單克隆抗體4A8在制備犬冠狀病毒的檢測試劑或檢測試劑盒中的應用。
6.一種如權利要求1所述的雜交瘤細胞株或權利要求2或3所述的單克隆抗體4A8在制備防治感染犬冠狀病毒導致疾病的藥物中的應用。
7.一種如權利要求1所述的雜交瘤細胞株或權利要求2或3所述的單克隆抗體4A8在制備犬冠狀病毒的疫苗中的應用。
8.一種用于檢測犬冠狀病毒N蛋白的免疫膠體金試紙條，其特征在于，
9.如權利要求8所述的免疫膠體金試紙條的制備方法，其特征在于，包括將單克隆抗體4B6噴于NC膜上作為檢測線的步驟，所述單克隆抗體4B6是由4B6雜交瘤細胞株分泌，所述4B6雜交瘤細胞株的保藏編號為CCTCC?NO：C2024305，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學；所述單克隆抗體4B6的重鏈亞型為IgG1，輕鏈亞型為κ鏈。
10.如權利要求9所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括將羊抗鼠IgG用劃線稀釋液稀釋，按照1.0mL/cm噴于NC膜上檢測線下作為質控線的步驟。
...【技術特征摘要】
1.一株雜交瘤細胞株，其特征在于，所述雜交瘤細胞株命名為4a8，所述4a8的保藏編號為cctcc?no：c2024304，保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏地址為中國.武漢.武漢大學。
2.一種如權利要求1所述雜交瘤細胞株分泌的單克隆抗體4a8。
3.根據權利要求2所述的單克隆抗體4a8，其特征在于，所述單克隆抗體4a8的重鏈亞型為igg2a，輕鏈亞型為κ鏈。
4.一種如權利要求2或3所述的單克隆抗體4a8的制備方法，其特征在于，利用權利要求1所述的雜交瘤細胞株4a8分泌得到。
5.一種如權利要求1所述的雜交瘤細胞株或權利要求2或3所述的單克隆抗體4a8在制備犬冠狀病毒的檢測試劑或檢測試劑盒中的應用。
6.一種如權利要求1所述的雜交瘤細胞株或權利要求2或3所述的單克隆抗體4a8在制備防治感染犬冠狀病毒導致疾病的藥物中的應用。
【專利技術屬性】
技術研發人員：張程光，劉桂坤，趙凌，趙劍清，吳穎，周明，鐘鳴，傅振芳，
申請(專利權)人：華中農業大學，
類型：發明
國別省市：
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