【技術實現步驟摘要】
：本專利技術涉及甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物及其制備方法和其在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應用。
技術介紹
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技術介紹
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1、惡性腫瘤一直是威脅人類健康的重要殺手。盡管針對腫瘤治療的研究在不斷進步和深入，但目前臨床治療惡性腫瘤的方法仍主要是通過使用化療藥物誘導腫瘤細胞dna損傷從而殺傷腫瘤細胞。拓撲異構酶1(top1)抑制劑常作為治療肺癌、結腸癌和膀胱癌等腫瘤化療藥物在臨床上廣泛使用，如拓撲替康(tpt)、伊立替康(irt)和羥基喜樹堿(hcpt)等。這些藥物在治療初期通常可取得明顯的療效，但隨著治療時間的延長，腫瘤細胞對該類藥物容易產生耐藥，從而大大降低了藥物的治療效果。有研究表明，tpt給藥治療后會導致dna修復酶—酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)表達上升，導致在治療一段時間后機體對相同劑量的藥物產生耐受。海洋真菌由于具有高度的物種多樣性，已逐漸成為重要的藥源分子補給站。從海洋真菌中尋找具有高效、低毒、可與腫瘤化療藥物協同起效的tdp1抑制劑，有望成為克服腫瘤耐藥性的重要策略，為腫瘤的治療提供更多可能性。
技術實現思路
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技術實現思路
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1、本專利技術的目的是提供一種甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物及其制備方法和其在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應用。
2、本專利技術是通過以下技術方案予以實現的：
3、甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物，其結構式如下：
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5、所述的甾體-吲哚生物堿雜合二
6、1)菌株活化：將菌種接種到含有pda培養基的平板上，置恒溫培養箱中28℃培養2-3天，待平板長出單菌落后用接種環挑取單菌落轉移至裝有pdb培養基的三角瓶中，在28℃的全溫搖瓶柜中165r/min培養2-3天，獲得活化的aspergillus?sp.egf15-0-3的種子培養液；
7、2)菌株發酵：吸取該活化的種子液加入裝有大米培養基的三角燒瓶中，在28℃下靜置培養35天，與空白培養基對比觀察是否有明顯的菌株生長，成長完畢便停止發酵，用etoac滅活后搖床振搖提取然后減壓濃縮得到etoac相浸膏；
8、3)將步驟2)得到的etoac相浸膏經硅膠柱層析，以vpe:vetoac＝50:1～1：1的石油醚-乙酸乙酯體系梯度洗脫后用乙酸乙酯和純甲醇體系沖柱，tlc薄層跟蹤，結合nmr和lc-ms共同分析后得到8個流份fr.1-fr.8，其中fr.6根據nmr和lc-ms分析為甾體類吲哚二酮哌嗪雜合物富集部位，選擇進行進一步的mci柱層析，以v甲醇:v水＝40％-100％甲醇-水體系為洗脫劑進行粗分離得到8個亞流份：fr.6-1-fr.6-8，其中fr.6-8進行凝膠柱層析，以v甲醇:v二氯甲烷＝7：3的甲醇-二氯甲烷體系為洗脫液，再進行硅膠柱層析，以vpe:vetoac＝50:1～10：1的石油醚-乙酸乙酯體系為洗脫劑得到fr.6-8-1-fr.6-8-10，其中fr.6-8-9經反復hplc液相制備，得到化合物1-4。
9、pda培養基：葡萄糖2.0％、土豆汁200g/l、瓊脂10％、土豆汁用陳海水作溶劑配制，鹽度3.5％，ph自然。
10、pdb為pda中不加瓊脂的培養基。
11、大米培養基：大米100g、蛋白胨0.3％、鹽海水100ml。
12、專利技術人首次從真菌aspergillus?sp.egf15-0-3大米培養基中制備得到甾體類吲哚二酮哌嗪生物堿雜合類化合物，化合物1-4為自然界中首次發現的新骨架化合物。也首次發現該類雜合物具有tdp1抑制活性。因此本專利技術還保護所述化合物作為酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制劑的應用。
13、本專利技術首次發現了該類雜合物對腫瘤化療藥物的化療增敏活性。
14、因此本專利技術還保護所述化合物在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應用。
15、所述腫瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宮頸癌。
16、抗腫瘤化療藥物包括拓撲替康(tpt)、伊立替康(irt)和羥基喜樹堿(hcpt)。
17、本專利技術還保護一種組合物，包含所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物與腫瘤化療藥物tpt。
18、本專利技術的有益效果如下：
19、1)首次從真菌aspergillus?sp.egf15-0-3大米培養基中制備得到甾體類吲哚二酮哌嗪生物堿雜合類化合物，該化合物為自然界中首次發現的新骨架化合物。
20、2)首次發現該類雜合物具有酪氨酸-dna磷酸二酯酶1(tdp1)抑制活性，可作為tdp1抑制劑應用。
21、3)首次發現了該類雜合物對腫瘤化療藥物拓撲替康tpt的化療增敏活性，為開發新型天然抗腫瘤聯用抑制劑提供藥源分子和數據支撐，對海洋曲霉屬真菌資源的開發利用具有重要意義。
22、本專利技術的保藏編號為gdmcc?60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌aspergillus?sp.egf15-0-3已公開于cn?111139185?b，曲霉屬真菌及其應用。
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1.甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物，其特征在于，其結構式如下：
2.權利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物的制備方法，其特征在于，從保藏編號為GDMCC?60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌Aspergillus?sp.EGF?15-0-3的大米培養基中制備得到，具體步驟如下：
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，PDA培養基：葡萄糖2.0％、土豆汁200g/L、瓊脂10％、土豆汁用陳海水作溶劑配制，鹽度3.5％，pH自然。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，PDB為PDA中不加瓊脂的培養基。
5.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，大米培養基：大米100g、蛋白胨0.3％、鹽海水100mL。
6.權利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物作為酪氨酸-DNA磷酸二酯酶1抑制劑的應用。
7.權利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物在制備抗腫瘤化療藥物增敏劑中的應用。
8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，所述腫瘤包括包括人肺癌、人乳腺癌和人宮頸
9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，抗腫瘤化療藥物為拓撲替康、伊立替康和羥基喜樹堿。
10.一種組合物，包含權利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物與腫瘤化療藥物拓撲替康。
...【技術特征摘要】
1.甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物，其特征在于，其結構式如下：
2.權利要求1所述甾體-吲哚生物堿雜合二聚體類化合物的制備方法，其特征在于，從保藏編號為gdmcc?60476的海洋軟珊瑚曲霉屬真菌aspergillus?sp.egf?15-0-3的大米培養基中制備得到，具體步驟如下：
3.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，pda培養基：葡萄糖2.0％、土豆汁200g/l、瓊脂10％、土豆汁用陳海水作溶劑配制，鹽度3.5％，ph自然。
4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，pdb為pda中不加瓊脂的培養基。
5.根據權利要求2所述的制...
【專利技術屬性】
技術研發人員：韋霞，張翠仙，張澤坤，林彥安，
申請(專利權)人：廣西醫科大學，
類型：發明
國別省市：
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